液相色谱仪检定方法及注意事项

液相色谱仪检定方法及注意事项

摘要：本文对液相色谱仪检定方法及检定中出现的问题，结合自己的工作经验进行了探讨。

关键词：液相色谱仪 检定

1、概述

液相色谱仪因分离效率高；应用范围广；分析速度快；样品用量少；灵敏度高等特点，在送药、食品、环境、材料等领域有了广泛的应用，成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。本文依据JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程，以紫外—可见光检测器为例，结合实际工作对主要检定项目泵流量、柱箱温度、基线噪声、基线漂移、最小检测浓度、定性定量重复性的检定及检定中的注意事项说几点看法。

2、检定方法

按规程要求设定流量、启动仪器，待压力稳定后在规定时间内收集流动相，同时用秒表计时，出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，在天平上称重，重复测量3次，则流量设定值误差SS 和流量稳定性误差SR ，公式如下：

%100/)(⨯-=-

S S S F F m F S

%100/)(min ⨯-=--m S F F x Fma S 式中：F m -F m =（W 2-W 1）/（e t ·t ），流量实测值，ml/min ； W 2-容量瓶+流动相的质量，g ；

W 1-容量瓶的质量，g ；

e 1-实验温度下流动相的密度,g/cm 3；

t-收集流动相的时间，min ；

min /，ml F m 值同一组测量的算术平均--；

Fs 流量设定值，ml/min ；

Fmax-同一组测量中流量最大值，ml/min ；

Fmin-同一组测量中流量最小值，ml/min ；

2.2注意事项

2.2.1收集流相和计时由一个人完成，减少计时误差；因甲醇容易挥发，收集时用封口胶密封容量瓶瓶口，收集完一瓶后立刻称量，收集的流动相在换算成体积后保留小数点后三位，最后结果保留小数点后一位。

2.2.2如果实际流速低于设定值，清洗或更换单向阀，过滤头；如果流速过高，检查流速补偿和压缩补偿调节是否失灵，如果流量不稳，检查泵头内是否聚集气泡，打开放空阀，让泵在高流速下运行，排除报泡；检查泵头是否松动，拧紧泵头固定螺丝，检查输液管路漏液或部分堵塞，需逐段管路进行排除。

3.1检定方法

将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃（也可根据用户使用温度设定）进行检定。按仪器说明书操作，通过升温，待温度稳定后，记下温度读数并开始计时，

每隔10min记录一次，共记录7次，求出平均值，平均值与设定值之差为 T S，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性T S

3.2。注意事项：

升高温度通常会使理论塔板数升高，峰宽变窄，由于峰面积不变，峰越窄就会越高，因而升高温度会缩短保留时间，温度降低会延长保留时间。

4、基线噪声和基线漂移的检定

4.1检定方法

选用C18争谱柱，以100%甲醇为流动相，流动相要进行脱气处理，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长为254nm，开机预热，待仪器稳定后记录基线30min，计算基线噪声，一般取30min内某一小段（一般小于1min）读取峰峰值。用1h内基线偏离原点的值表示基线漂移。

4.2注意事项

4.2.1检定噪声和飘移时，不能有标准物质通过检测器，只有100%甲醇作流动相。

4.2.2基线出现波动，毛刺等现象，应检查流动相中是否混入空气形成气泡，或等待氘灯稳定，同时检查仪器的接地是否良好，必要时换的氘灯。漂移过大，流动相中含有杂质，检查泵、色谱柱、储液瓶和流动相有无污染物。

4.2.3要注意单位的换算。若工作站显示屏的纵坐标为

MV 或MA V 时，要换算成堆积所要求的A V ，即：1MV 等于1×10-3A V ，1MA V 等于1×10-3AV 。

5、最小检测浓度的检定

适用C 18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min ，检测器的波长选在254nm ，用微量注射器从进样口注入（10-20）/ML1×10-7g

/m 的l 的萘/甲甲醇溶液，记录色谱图，按下式计算最小检测浓度，C L 。

C L =H NdCV 202 式中：CL —最小检测浓度，（g/ml ）；

Nd —基线噪声，（mm ）；

C —标准溶液浓度，g/ml ；

H —标准溶液的色谱峰高，mm ；

V —进样体积，CL 。

注意：式中的“20”按20CL 计算，注入样品为1×10-7gml 的萘/甲醇，而不是1×10-4g/ml 的萘/甲醇。

6、整机性能（定性，定量重复性）的检定。

选用C 18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min ，紫为检测波长为254nm ，用微量注射器注入1×10-4g/ml 萘/甲醇标准溶液，连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按下式计算相对标准偏差RSD 6。

RSD 6定性（定量）=∑=--⨯⨯--612%1001)16/()(i i x

x x 式中：；i x i 面积次测得时保留时间或峰第—

；

—

6

次测量结果的算术平均

x值

。

—

i测量序号

注意：检定中注入样品时要排除注射器中的气泡后方能向进这样注入样品。测量值由一个人连续测量6次完成。

以上检定结果保留小数后一位。

6、总结

液相色谱仪是一种高精确度的仪器，它的更新速度较快，要求检定人员掌握较高的专业操作技术，因此在检定中要认真仔细，多加思考，不断总结经验教训，在工作中边检边学，逐步提高检定水平，提供准确可靠的检定结果。