影响蜂蜜淀粉酶活性的研究
影响蜂蜜淀粉酶活性的研究
张传慧1) 刘春云1) 黄腾飞2) (1)安徽大学生物系,合肥230039;2)安徽省康园食品有限公司)
摘要 蜂蜜在加工、储存、运输以至冲调过程中,酶的活性常常发生变化。为了保持蜂蜜中酶类的原有活性,探讨酶的活性受外界因素影响而变化的程度,运用酶值为指标(以淀粉酶的酶值为例)鉴定蜂蜜的质量。
关键词 蜂蜜;淀粉酶值;冲调;储存时间
Study on External Factors’I nf luence on Amylase Activity i n Honey
Zhang Chuanhui et al (D epartm ent of B i o loge of A nhui U niversity)
Abstract Enzym e activity in honey often change w hen honey is p rocessed,p reserned and transpo rtated.To keep the o ringinal activity of enzym e in honey and study the external facto rs’influence on enzym e,w e use am ylase value as an index.T he am y2 lase value is vo lum e(m l)of1%starch transfo rm ed by am ylase in1g honey under certain conditi on.
Key words Honey,Am ylase value,D iluti on,Sto rage ti m e
蜂蜜中含有大量的生物活性物质,其中淀粉酶含量丰富,淀粉酶活性直接影响蜂蜜的质量。目前市场需要使用一定的检测手段,以保证蜂蜜的质量。为此,笔者以蜂蜜淀粉酶的酶值为指标进行温度、日照及储存时间等几方面实验,以摸索出一些规律供生产厂家及消费者参考。1 材料和方法
1.1 材料
材料:蜂蜜(安徽康圆保健食品有限公司)。试剂:氢氧化钠(蚌埠化学试剂厂A.R);氯化钠(上海化学试剂厂A.R);冰乙酸(南京化学试剂厂A.R)标准可溶性淀粉(上海化学试剂厂A.R)。
1.2 测定
1.2.1 蜂蜜中淀粉酶最适温度范围的测定。称取试样10g(精确至0.01g),溶解于50～70m l蒸馏水中,加入酶酞指示剂1滴,用0.1mo l L氢氧化钠溶液中和,将此溶液移入100m l容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,混匀。统一采用试管法:取大小相同的试管12个,做好序号标记,按表1序号分别加入蜂蜜试样溶液,蒸馏水(本试验所用蒸馏水均需预经煮沸,冷却),0.02mo l L乙酸溶液, 0.1mo l L氯化钠溶液和10m g g淀粉溶液(注意:每加入1种试剂应摇均后再加入后1种试剂)摇匀,立即将所有试管同时浸入水中,使试管液面浸入水面下约2.5cm,在27～34℃的水浴温度放置1h,取出后立即在冰水中冷却,随即在每一试管中加入1滴0.1mo l L碘溶液,摇匀后立即观察(必要时可多加1滴0.1mo l L碘溶液后观察),此时各试管的颜色顺次由黄色经红色、紫红色、紫色至蓝色,根据紫红色试管的号数由表1查得被测样品的淀粉酶值(如有争议时,以分光光度法为仲裁法)。
表1蜂蜜淀粉酶值
试管序号蜂蜜样溶浆
m l
蒸馏水
m l
0.02mo l L乙酸
m l
0.1mo l LN aC l
m l
1%淀粉
m l
总容积
m l
淀粉酶值
1104.00.50.51.0161.0 2102.50.50.52.5162.5 31000.50.55.0165.0 47.72.30.50.55.0166.5 56.04.00.50.55.0168.3 64.65.40.50.55.01610.9 73.66.40.50.55.01613.9 82.87.20.50.55.01617.9 92.17.90.50.55.01623.8 101.78.30.50.55.01629.4 111.38.70.50.55.01638.5 121.09.00.50.55.01650.0
按上述方法测得在此温度下的淀粉酶值为5.0。运用同样试验方法和步骤测得温度在35～39℃;40～44℃; 45～49℃;50～54℃;55～60℃下的淀粉酶值分别为6.5,
收稿日期:199920220810.9,13.9,8.3。由此表明蜂蜜的淀粉酶值的最适温度在45～49℃之间。试验将以此水浴温度为基础测定淀粉酶值。2 结果与分析
1.2.2 冲调温度对蜂蜜酶值的影响。
将称取的样品按表2中的温度水溶解于室温(27℃)
安徽农业科学,1999,27(4):413-414 Jou rnal of A nhu i A gricu ltu ral Sciences
下放置,自然冷却,用水稀释至刻度,按前述的方法加入试剂并放在45～49℃的水浴锅中。依法测定(下同)其结果见表2。
表2冲调温度对蜂蜜酶值的影响
样品
温度 ℃10085685327
1洋槐1.02.510.913.913.9
2紫云英1.02.513.917.917.9
3混合1.02.510.913.913.9
由表2可以得出冲调水温在53℃以下淀粉酶值不变,以保证冲调饮用时不影响蜂蜜的质量。
2.2 加工对蜂蜜酶值的影响
蜂蜜加工分装前多采用水浴保温进行消毒灭菌。现模拟实验如下:分别称取蜂蜜50.0g于烧杯中,放置水浴温度,保温时间及其测定结果见表3。
表3加工对蜂蜜中淀粉酶值的影响
样号加工前酶值温度 ℃时间 m in加工后酶值113.9100301.0
213.985208.3
313.985立即流水冷却10.9
413.9702013.9
513.9603013.9
由表3得出蜂蜜在加工前后淀粉酶值受加工时间和温度影响而发生变化,在70℃时20m in和60℃时30m in 淀粉酶值不受影响。
2.3 储存时间对蜂蜜淀粉酶值的影响
将如下蜂蜜样品储存于棕色玻璃瓶中,密闭于室内放置,比较放置(储存)前后蜂蜜中淀粉酶值的变化情况。具体储存时间及测定酶值见表4。
表4储存时间对淀粉酶值的影响
编号收蜜日期酶值复检日期酶值
1199520422113.91998204230 10.9
219952052055.019982052012.5
319952052158.319982052012.5
419952062142.519982052020
5199520922217.9199820520213.9
6199521020810.919982052038.3
7199521020813.919982052038.3
81995.10.2213.9199820520410.9
9199521022213.9199820520410.9 10199620820810.919982052056.5 11199620820813.9199820520510.9 1219962082166.519982052065.0 1319962082218.319982052066.5 1419962122116.519982052075.0 15199721020313.9199820520713.9 16199721121417.9199820520717.9
由表4可知储存蜂蜜,淀粉酶值一年内几乎无变化,2～3a,则酶值均呈下降趋势(表4中前13份样品酶值总和为41.7,平均值3.27)
2.4 光线对蜂蜜中淀粉酶值的影响
取洋槐蜜和紫云英蜜分别置于无色玻璃瓶和棕色玻璃瓶中,分别在室内自然光和室外太阳光照光下照射15d (5月份)测定其淀粉酶值,结果见表5。
表5光线对蜂蜜淀粉酶值的影响
样品酶值容器(玻璃器)光照时间 d酶值
1.洋槐13.9无色太阳光照1510.9
2.洋槐1
3.9棕色太阳光照1510.9
3.洋槐13.9无色自然光照1513.9
4.洋槐13.9棕色自然光照1513.9
1.紫云英17.9无色太阳光照1513.9
2.紫云英17.9棕色太阳光照151
3.9
3.紫云英17.9无色自然光照1517.9
4.紫云英17.9棕色自然光照1517.9
3 讨论与小结
(1)蜂蜜中的酶类物质是其活性成分之一,以蜂蜜淀粉酶值为指标,通过实验证明了温度、光照、储存时间等外界因素均可能引起酶值降低活性下降,从而影响蜂蜜的天然品质和生理活性。
(2)蜂蜜酶值对温度的影响比较敏感,温度越高,酶值下降越迅速。实验结果表明:在53℃(人体可忍受的温度)以下,短时间内(30m in左右)酶值几乎无变化,68℃以上时酶值会显著下降。
因此,饮用蜂蜜应注意冲调温度,以温开水(53℃)以下为宜。沸水冲调将大大降低酶的活性;加工蜂蜜,水浴消毒温度宜控制在80℃,时间为20m in为宜,时间要严格控制,并迅速降温。
(3)经长时间(1a以上)储存的蜂蜜其酶值也呈下降趋势,时间越久,下降越多。因此,从发挥蜂蜜酶类物质的活性作用来看,蜂蜜不宜久存,饮用时以新鲜蜂蜜优于久储蜂蜜。并应低温放置,以延缓酶的活性,保持蜂蜜固有的品质。
(4)阳光照射蜂蜜,对其酶值也有一定的影响,室外大于室内,这可能与光波辐射,光能转换为热能有关。总之避光有利于保持酶的活性。因此在蜂蜜的运输、储存、加工等过程中应以低温、避光、新鲜为原则。
3 参考文献
1 张维杰主编.复合多糖生化研究技术.上海:上海科学技术出版社,1987.
2 张传慧,等.不同花型蜂蜜三种糖比较分析.安徽大学学报,1998,(4):99—101.
3 杨连生,等.酶法淀粉连续液化喷射技术的研究与开发.食品工业科技,1995,(4):3—10.
4 董怡为,等.蜂蜜的电特性～蜂蜜的电导率与其成分的关系.食品科学,1991,(11):8—11.
414 安徽农业科学 1999年
淀粉酶含量测定
淀粉酶(AMS)测定试剂盒说明书 (碘-淀粉比色法) 一、 原理： 淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，家人碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出AMS 的活力。 二、 试剂组成与配制：（100T ） 1、0.4mg/ml 底物缓冲液：60ml ×1瓶，4℃冰箱保存6个月。 2、0.1mol/L 碘贮备液：7ml ×1瓶，4℃避光保存6个月。 0.01mol/L 碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。 三、 操作表： 测定管（u 管） 空白管（0管） 底物缓冲液（ml ）37℃预温5分钟 0.5 0.5 待测样本（ml ） 0.1 混匀，37℃水浴，准确反应7.5分钟 碘应用液（ml ） 0.5 0.5 蒸馏水（ml ） 3.0 3.1 混匀，660nm 波长，1cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。 *注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将 （空白OD-测定OD 控制在0.05～0.150之间） 四、 计算： 1、 单位定义：100ml 血清（浆）中的AMS ，在37℃与底物作用30分钟，水解10mg 淀粉为1个单位。 2、公式： 样本测试前稀释倍数空白管吸光度 测定管吸光度空白管吸光度样本测试前稀释倍数分钟分钟空白管吸光度测定管吸光度空白管吸光度??-=?????-=801 .01005.730105.04.0dl AMSu （此公式适用于测定血清中淀粉酶）
血清淀粉酶的含量测定 一、实验准备： 1、实验器材：移液枪（100~1000ul、10~100ul、1000~5000ul、2~20ul）、5mlEP管、0.5mlEP 管、比色皿、100ml烧杯、漩涡仪、水浴箱，分光光度计、计时器。 2、实验药品：NaCl、蒸馏水、0.4mg/ml底物缓冲液、0.1mol/L碘贮备液。 二、实验步骤： 1、0.01mol/L碘应用液的配制： 将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。 2、生理盐水的配置： 称取9gNaCl置100ml烧杯，加入100ml蒸馏水，溶解即得。 3、样品最佳取样浓度摸索： 取待测血清用生理盐水稀释成不同比例（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍等倍数进行稀释），取0.1ml进行检测。 取两个5mlEP管，标记为空白、血清所稀释的倍数，分别加入底物缓冲液0.5ml，其中带有倍数的EP管加入相应的稀释好的血清0.1ml，于漩涡仪上混匀，同时放入37℃水浴箱反应7.5分钟，取出后各加入0.5ml 0.01mol/L 碘应用液，空白管加入3.1ml蒸馏水，带有倍数的EP管加入3.1ml蒸馏水，混匀，蒸馏水调零，迅速于660nm波长测定吸光度，控制空白OD-测定OD在0.05~0.150之间。 4、样品测定： 将所需测定样品按摸索确定的倍数稀释，同法测定吸光度，记录数据。 5、数据处理：按给定公式计算待测血清淀粉酶含量。 注：加入碘应用液后不能长时间放置，否则碘见光分解后影响测定结果
《探究温度对酶活性影响实验》教学设计
《探究温度对酶活性影响实验》教学设计 一．设计思路： 1、指导思想 高中生物新课程标准提出以提高学生的生物科学素养为主要目的，教师在教学中要组织好各种探究性学习，使学生领悟科学研究的方法并学会相关的操作技能。 2、理论依据 绝大多数酶是蛋白质，凡是能破坏蛋白质结构的因素都能影响酶的活性。如温度、PH等。 3、教学特色 （1）本节课立足于引导学生尝试设计探究性的实验,通过生活中的小常识引入课题，引发学生的思考，让探究的问题贴近学生的生活，激发学生思考、探究问题的兴趣。 （2）采用学生先尝试再补充的实验的设计与操作的教学法，帮助学生主动参与探究式的实验教学，构建以体验科学探究过程,领悟科学探究方法，体现团队合作精神和因材施教的教学原则。这样的教学对培养学生的发散思维及应变能力很有意义。最后通过拓展加深学生对生物科学技术知识的理解，使学生领悟科学技术与社会应用的相互关系。 二．实验教学分析： （1）内容分析：酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物，其中大多酶是蛋白质，凡是能破坏蛋白质结构的因素都能影响酶的活性。如温度、PH等。 （2）学情分析：学生已经学习了酶在细胞代谢中的作用,酶的化学本质及酶的高效性和专一性,对酶有一定的感性认识。但学生自主探究能力还较低，教师需进行有效的指导和帮助。 （3）教学条件分析: 相应的实验器材等学校基本都有。 三．教学重点及解决的具体策略： 教学重点：尝试探究温度对酶活性的影响。 具体策略：我将这一探究性的试验改为限定因素的定量试验，给定探
究的因素(温度)。因为探究性实验学生自己决定和判断的因素很多，我将引导学生重点尝试探究温度对酶活性的影响。 四、教学难点及突破的具体办法： 教学难点：如何进行探究温度影响酶活性的实验设计与分析。突破的具体办法：（1）设计实验是本教学的难点，但对如何进行材料选择，如何设计实验方案，并简要写出基本的实验步骤。这都需要老师的引导和帮助。 （2）通过设置一系列的疑问，并一一加以引导，通过在回答问题的过程中，学生经过反复思考，心中就会对实验设计有了大致的框架。这样就使教学难点实验设计得到突破。利于调动学生的学习积极性和特长的发挥，又在教师可控制范围之内，使探究活动按照教师的预设顺利进行。 五．实验目标： （1）知识与技能： 1、尝试设计温度对酶活性的影响的实验。 2、学会设置对照组和实验组并会控制单一变量，并能用准确的语言阐明实验探究的结果。 (2) 过程与方法： 1.培养学生观察、分析问题，解决问题的能力； 2.培养学生实验操作能力； (3)情感态度价值观目标: 1.培养学生实事求是和严谨的科学态度； 2.激发学生对生物科学的兴趣和热爱，培养学生理论联系实际。六．实验准备： 指导学生预习教材,根据学生探究能力的高低，将学生分成能力比较均衡的小组，每组选出一名动手能力较强的学生担任组长。 实验材料用具:试管、3%的淀粉溶液、温度计、碘液、烧杯、量筒、滴管、试管夹、石棉网、酒精灯、三脚架、冰块、教学课件、小组探究性实验设计方案报告单等。 七．教学流程图：
测定α淀粉酶活力的方法
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响 一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。 二、实验原理 酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。酶催化的反应称为酶促反应。生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。 能提高酶活力的物质，称为激活剂。激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。 酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。 食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。 本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。 三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响
淀粉酶活性研究
淀粉酶活性研究 宁加彬1，王文移2 （青岛科技大学） 摘要：淀粉酶主要用作果汁加工中的淀粉分解和提高过滤速度以及蔬菜加工、糖浆制造、葡萄糖等加工制造。淀粉酶活性的研究在淀粉催化分解工程中占有 重要地位。文中综述了淀粉酶活性及其热稳定性，电场对淀粉酶活性的影响。 pH值、温度、淀粉浓度和钙的添加量以及瞬时高压处理对α-淀粉酶的热稳定 性和活性的影响 关键词：淀粉酶酶活性热稳定性 淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的 淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。对淀粉酶的研究，有利于我们 更好的理解其催化机理。淀粉是植物种子的主要贮存物质，淀粉酶的主要作用是催化淀粉的水解，淀粉被水解成简单有机化合物并提供细胞生长所需的能量。 1、淀粉酶的研究概况 淀粉酶研究经历了一个较长的奠定和发展时期。在中国知网依据主题—— 淀粉酶进行检索，结果显示在1979-2013年共涉及15840篇文献。其中，2005 年以前的总计5256篇，2005-2010年5256篇，也就是说2005年之前的研究篇 数仅占目前土壤酶研究总数的1／3。而从2005年开始我国对土壤酶活性研究 的论文以超百篇的速度增加，且增加趋势较为明显，仅2012年就有724篇。 针对我国淀粉酶活性研究的快速发展，该文就我国淀粉酶研究种类及研究 方法的资料进行归纳总结，旨在进一步扩宽我国淀粉酶活性研究的范围，为今 后淀粉酶的研究提供一些新的思路，同时也可促进我国淀粉酶研究方法的发展。 2、淀粉酶的分类 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的统称。按水解淀粉方式不同，把淀粉酶分 为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶四类。目前淀粉酶已广泛 地应用于食品、发酵、畜牧业生产、谷物加工、纺织、造纸、轻化工业、医药 和临床分析等领域 (Ashok et al．，2000；Lili，2000；柳辉等，2007；张剑等，2009)。其中，中温淀粉酶主要应用于饴糖、啤酒、黄酒、葡萄糖、味精以及抗生素等行业，也可以用于高质量的丝绸人造棉、化学纤维的退浆。淀粉 酶广泛存在于微生物、植物和动物体中。现已有大量有关土壤微生物产淀粉酶 及酶学性质的文献报道(卢涛等，2002，四川大学学报(自然科学版)，39(6)：1131—1133；张应玖等。2002)。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告 淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告 实验四、淀粉酶活性的测定 一、实验目的: 1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义; 2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。 二、实验原理: 淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。 淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。 三、实验用具: 1、实验设备 研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热 恒温水浴锅，离心机，电磁炉。 2、实验材料与试剂 (1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至 1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。 (2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6
的柠檬酸缓冲液; (3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入; (4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中; (5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用 0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至 6.8，加水稀释至1000ml即得。 (6)0.4mol/L的NaOH溶液; (7)1%NaCl溶液。 (8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm) 四、操作步骤 1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。取上清液1.0ml，用pH 为6.8的缓冲溶液稀释5倍，所得酶液。 2、a- 淀粉酶活力测定 (1) 取试管4支,标明2支为对照管,2支为测定管。 (2) 于每管中各加酶液lml ,在 70?士0.5? 恒温水浴中准确加热15min ,取出后迅速用流水冷却。 (3) 在对照管中加入4m1 0.4mol/L氢氧化钠。 (4) 在4支试管中各加入1ml pH5.6的柠檬酸缓冲液。 (5) 将4支试管置另一个40?士 0.5? 恒温水浴中保温15min ,再向各管分别加入40?下预热的1,淀粉溶液 2m1,摇匀,立即放入40?恒温水浴准确计时保温 5min。取出后向测定管迅速加入4ml 0.4mol/L氢氧化钠,终止酶 活动,准备测糖。
澳大利亚蜂蜜中的羟甲基糠醛与淀粉酶含量
澳大利亚蜂蜜中的羟甲基糠醛与淀粉酶含量 摘要 澳洲蜂蜜样品(加工及未加工)的质量是用来评估HPLC技术。羟甲基糠醛作为主要的质量指标。包括四个经过商业加工的蜂蜜样品（澳大利亚雨林,Beechworth、homebrand和Leabrook)和三个未加工的蜂蜜样品(Banksia、灰盒子和Mallee)。所有样品,除了Leabrook和Beechworth,中的初始羟甲基糠醛(HMF)含量低于法典委员会标准和国际蜂蜜标准(40毫克/公斤)外，其余样品都高出标准。Leabrook和Beechworth中的羟甲基糠醛分别为50.8±1.34毫克/公斤和74.9 ±234毫克/公斤。在85°加热未加工的蜂蜜2分钟造成显著(p≤ 0.05)蓄积的羟甲基糠醛含量。在85°C加热2分钟后Mallee的样品中羟甲基糠醛的量从34.0±0.31增加到42.3±0.37毫克/公斤。所有的蜂蜜淀粉酶活性样品显示超过最低限度(8 Gothes)。蜂蜜成品的理化性质的变化有明显的样品。结果显示,加热也并不是唯一的影响羟甲基糠醛(HMF)在蜂蜜中形成的因素,还有蜂蜜的成分、pH值和植物源可导致这些变化。因此,一定数量的羟甲基糠醛(HMF)可能不是一个唯一的蜂蜜质量指标。 关键词: 羟甲基糠醛;Gothe单位数,淀粉酶活性;加工过的蜂蜜；新鲜蜂蜜。 1．介绍 澳大利亚新西兰食品标准 (FSANZ,2006年)规定了蜂蜜的定义即蜜蜂是从花朵或植物的生命部位所分泌的物质中制造出的自然甜美的物质。它必须包含至少60%的还原糖和不超过21%的水分。蜂蜜成分是高度受到蜂蜜所采的花朵的类型、区域和气候条件的影响(门德斯,Proenca、费雷拉、和费雷拉,1998)。 澳大利亚是世界上第四大蜂蜜出口国。在澳大利亚蜂蜜行业每年至少价值达6500万美元。新南威尔士是蜂蜜的主要生产者,占总产量的45%。制造出的蜂蜜有一半是在国内消费的,而剩下的则出口(澳大利亚蜂蜜工业委员会,2004年)。在澳大利亚桉树代表了生产蜂蜜的主要本土植物(78%)（吉布斯和Muirhead，1998)。约有95%的桉树构成了安大利亚的植被,统治了森林植被中的约550-600个不同类型的物种和品种,还有许多杂交物种(凯莉,1983)。 加热新鲜蜂蜜通常是为了方便加工和保持良好的质量。然而过度热处理会形成羟甲基糠醛(HMF)以及降低蜂蜜质量。羟甲基糠醛的量在新鲜蜂蜜中几乎没有或很低 ,而在加热过的蜂蜜中含量很高,它们储存在不适当的条件,或搀假在逆变糖浆中(Nozal伯纳作了开题报告,Toribio,希门尼斯,马丁,先后,2001)。蜂蜜的理化性质如酸碱度,矿物含量和总酸度也会影响羟甲基糠醛含量。在有机酸存在和低水分活动的情况下,也会影响产品中的羟甲基糠醛含量 (Kalabova ,Borkovcova ,Smutna,和Vecerek,2003)。食品法典(2001)和国际蜂蜜委员会 (2002)设定了最大的羟甲基糠醛浓度：非热带地
实验七尿淀粉酶活性测定
实验七尿淀粉酶活性测定 淀粉酶（AMY或AMS在体内的主要作用是水解淀粉，它随机地作用于淀粉分子内的 a—1, 4糖苷键生成葡萄糖、麦芽糖、寡糖及糊精。血清中的淀粉酶主要有胰型（P型）和 唾液型（S型）及其亚型同工酶组成，P型淀粉酶主要来源于胰腺，S型淀粉酶主要来源于唾 液腺。正常淀粉酶因分子量小，故可从肾小球滤过而由尿中排出。 【目的】 1、验证淀粉酶的催化作用。 2、观察淀粉及其水解产物分别与碘反应呈现的颜色变化。 【原理】血清及尿中的淀粉酶来源于胰腺和唾液腺，正常血清与尿中有一定活性。 Winslow 氏法测定尿和血清中淀粉酶活性是将试样作等比稀释，观察一系列试样在规定的 37C、30分钟的条件下，恰好能将0.1%淀粉溶液1ml水解（指加入碘液后不再呈蓝色）的 酶量定为淀粉酶的一个活性单位，乘以尿的稀释倍数，即可得知每项ml 尿液中的淀粉酶活性。 【器材】 试管（10mn X 100mr）、试管架、电热恒温水浴箱、吸管、洗耳球、滴管。 【试剂】 1 、 9%NaCl 2、0.3%碘液 3、0.1%淀粉溶液 【操作】 1 、准备尿液（自备）。 2、取 10支试管，编号，用吸管向管中加入0.9%NaCl 1ml。 3、用1ml吸管（注意应用刻度到头的）向第一管加尿液1ml，混合，再将试管中的液 体吸起，然后任其流回试管，如此重复三次，以便全管混匀，并借此冲洗吸管内壁。吸出此混合液1ml 移入第二管中。 4、用同法处理第二管使之混匀，并取出1ml 置于第三管中。依此类推，如此继续稀释 至第九管后，吸出1ml混合液弃之，这样既可获得分别含原尿液为1/2ml,1/4ml,1/8ml, ... 1/512ml 的不同浓度的尿稀释液。第十管不加尿液作为对照管。 5、从第十管起依次向各管迅速准确加入0.1%淀粉液2ml，迅速摇匀（是否充分混匀往
探究温度对酶活性影响剖析
实验能力训练期末实验（实验设计方案） 课题：温度对酶活性腐乳影响
探究温度对酶活性影响 （一）．背景资料 高中生物实验分两种类型，验证性实验和探究性实验（包括研究性课题），由于后者更能体现探究能力、实验设计能力和运用生物学知识和方法分析和解决实际问题能力；更能体现科学态度、科学精神和创新意识，是高考中为高校选拔人才的较好材料，近年来一直被沿用。由于缺乏实验设计的有关理论知识，平时的练习也偏少，因此，遇到这类题型，就会感到茫然。为解决这一问题，现将有关实验设计的基本理论、实验设计的思路方法和常见的类型作一介绍，以期增加理论知识，提高分析问题和解决问题的能力之目的。 “温度对酶活性的影响”是高中生物新教材人教版《分子与细胞》的第五章《细胞的能量供应与利用》第一节降低化学反应活化能的酶第三课时酶的特性中的探究实验《影响酶活性的条件》其中的一个。本实验是一个探索性实验，通过淀粉酶在不同的温度条件下催化淀粉的水解情况。加深对控制实验变量的了解。 探究性实验一般包括：课题、假设、设计实验、预期、完成实验、观察并记录结果（有时需收集数据）、分析结果（数据）并推导结论七个基本内容。 一．探究性实验的基本内容 （一）提出课题 人们对事物作缜密观察以后，常常由于好奇心或想作进一步的了解而提出问题，虽然任何人都能提出问题，但只有意义的问题才值得探讨，课题即为实验的题目，是实验要达到的具体目标，例如“蚯蚓如何借肌肉的收缩和舒张而移动身体？” （二）假设 科学方法的第三步是假设。假设，也称假说或猜测，指用来说明某种现象但未经证实的论题，也就是对所提出的问题所做出的参考答案。假设一般分为两个步骤：第一步，提出假设，即依据发现的事实材料或已知的科学原理，通过创造性思维，提出初步假定；第二步，做出预期(推断)，即依据提出的假设，进行推理，得出假定性的结论；例如，新编高中生物的“动物激素饲喂小动物的实验”，其假设是：“甲状腺激素对动物的生长发育有影响”；其预期结果是：“用适量的甲状腺激素饲喂蝌蚪，将促使蝌蚪的生长发育加速”。实验预期是较具体的推断。 一个问题常有多个可能的答案，但通常只有一个是正确的。因此，假设是对还是错，还需要加以验证，即依据假设或预期，设计实验方案，进行实验验证。 （三）设计实验
影响淀粉酶活性因素
温度、PH值、金属离子等均能影响酶的活度，具体表现在以下几个方面： ①温度： 由于酶对热是不稳定的，所以在不同的温度下，酶的活度是不同的。低温时，酶的活度很低，随着温度的升高，酶的活度逐渐增加，在某一温度下，酶的活度表现最高，此温度称为这种酶的最佳温度。 所谓稳定温度是指酶在该温度范围内是稳定的，不发生或极少发生失活现象。 每种酶都有它的稳定温度和作用最佳温度。酶退浆应选择所用酶的最佳温度，以使酶的活性及活性的稳定性都具有较大的数值。 胰酶的耐热性较差，稳定温度若低于35℃，高于55℃，则即失活，它的最佳温度为40～55℃，而BF-7658淀粉酶的耐热性高，40～85℃活性较高，20℃时也有较高的活性，当温度为100℃时，其活性尚未完全消失。酶的最佳温度可因加入某些活化剂而提高。同时可因与淀粉作用的时间不同而不同。 表BF-7658淀粉酶的最佳温度与作用时间的关系 与淀粉作用时间(min)作用最佳温度(℃) 60 70 30 80 15 90 2-3 100
由表可知，BF-7658淀粉酶的最佳温度随反应时间的缩短而提高。在实际生产中，经常采用短时间高温的处理工艺。如BF-7658淀粉酶在55～60℃轧酶后，再用汽蒸或热浴处理来求得快速退浆，使生产连续化，其机理是酶的破坏瞬间也是酶发挥最大作用的时间。 ②pH值： pH值对酶的活性影响很大，不同PH值下测得酶的活度及稳定性是不同的。 酶具有最大活性与最大稳定性所需的PH值是不同的，但适当选择可兼顾活度与稳定性。BF-7658淀粉酶在PH6.0～6.5范围内，其活度与稳定性可以兼顾。胰酶在PH为6.8～7.3范围内，其活度与稳定性可兼顾。 ③活化剂与抑制剂： 淀粉酶对淀粉的消化作用常受到一些药品的影响而变得活泼或迟钝，这种现象叫活化(激化)或阻化(抑制)，这种化学药品称为活化(激化)剂或阻化(抑制)剂。例如一些轻金属盐类，都是活化剂，其中较常用的是氯化钠和氯化钙。所以为了提高酶的活性，酶退浆时可用适当的硬水(含有一定量的Ca+、Mg1+等离子)，而不必加软水剂。而一些重金属盐类如Fe3+、Cu2+、Hg2+、Ag+、Zn2+等离子的盐类能使活化作用减弱，所以称为抑制剂。另外，离子型的表面活性剂对酶也有抑制作用，因此，酶退浆液中若要使用表面活性剂时，只能用非离子型表面活性剂，如渗透剂JFC等。 ｐＨ值是影响酶活的主要因素。它影响酶分子构象 的稳定性，影响酶分子极性基团的解离状态，也影响 底物的解离。ｐＨ值不是酶的特定常数，它可随底物的 浓度和种类、酶的纯度、缓冲液的种类和浓度、温度、 反应时间长短以及抑制物的作用等而改变。
(植物中)淀粉酶活性的测定
(植物中)淀粉酶活性的测定 一实验目的 本实验的目的在于掌握淀粉酶的提取及活性的测定方法。 二实验原理 植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解为麦芽糖。淀粉酶几乎存在于所有植物中，有α－淀粉酶及β－淀粉酶，其活性因植物生长发育时期不同而有所变化，其中以禾谷类种子萌发时淀粉酶活性最强。 α－淀粉酶和β－淀粉酶都各有其一定的特性，如β－淀粉酶不耐热，在高温下容易钝化，而α－淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下容易发生钝化。通常酶提取液中同时存在两种淀粉酶，测定时，可以根据他们的特性分别加以处理，钝化其中之一，即可以测出另一种酶的活性。将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β－淀粉酶，便可测定α－淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6的醋酸在0℃加以处理，钝化α－淀粉酶，以测出β－淀粉酶的活性。 淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5－二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原成3－氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可以求出麦芽糖到含量。以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性大小。 三实验材料 萌发的小麦、大麦或者豆类等（芽长1cm左右） 四实验仪器和试剂 1．仪器： 电子天平、研钵、100mL容量瓶（1个）、50mL量筒（1个）、刻度试管[25mL（9个）、10mL（1个）]、试管6支、移液管[1mL（2支）、2mL（2支）、10mL（2支）]、离心机、恒温水浴锅、7220型分光光度计 2．试剂： 1％淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、 pH5.6的柠檬酸缓冲液：A、称取柠檬酸20.01g，溶解后稀释至1 000mL；B、称取柠檬酸钠29.41g，溶解后稀释至1 000mL；取A液13.70mL与B液26.30mL 混匀即是。 3,5－二硝基水杨酸：精确称取3,5－二硝基水杨酸1g溶于20mL1mol/LNaOH 中，加入50mL蒸馏水，在加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100mL，盖紧瓶盖，勿让CO2进入。 麦芽糖标准液：称取化学纯麦芽糖0.100g溶于少量蒸馏水中仔细移入100mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。 五操作步骤 1．酶液的提取： 称取萌发的水稻种子0.5g（芽长1cm左右，置于研钵中加石英砂研磨成匀浆，移入25mL刻度试管中，用水稀释至刻度，混匀后在温室下放置，每隔数分钟振荡一次，放置20分钟后离心，取上清液备用。 2．α－淀粉酶活性的测定： （1）取三支试管，编号注明1支为对照管，2支为测试管。 （2）于每管中各加入酶提取液1mL，在70℃恒温水浴中（水文的变化不应该超过±0.5℃），准确加热15分钟，在此期间β－淀粉酶受热钝化，取出后迅速在自来水中冷却。
探究温度对酶活性影响的实验设计[参照模板]
探究温度对酶活性影响的实验设计 龙岩长汀一中曾宪琰 1 实验设计理念 由于在第一课时学生已经学习了酶的发现和酶的概念以及酶的特性，在此基础上，教师引导学生设计实验，提出预期，让学生分组进行实验探究，观察思考，进行讨论，由学生自己总结出结论。这样的实验设计能体现学生自主、探究、合作的学习方式，有利于培养学生科学的思维方法和研究方法，提高学生的实验设计探究能力和科学素养。 2 实验目标 2.1 知识目标理解温度对酶影响的实质。 2.2 能力目标①通过探究温度对酶活性影响的因素，发展学生的科学探究能力；②培养学生观察、分析问题，解决问题的能力；③培养学生实验操作能力；④提高学生收集资料和语言表达能力。 2.3 情感目标①通过探究温度对酶活性影响的因素，培养学生的探索精神、创新精神和合作精神；②培养学生实事求是和严谨的科学态度；③激发学生对生物科学的兴趣和热爱，培养学生理论联系实际。 3 课前准备 3.1 实验材料用具的准备①质量分数为2%的新配制的淀粉酶溶液；②质量分数为3%的可容性淀粉溶液；③热水，蒸馏水，冰块，碘液，菲林试剂。④试管，量筒，大烧杯，小烧杯，滴管，试管架，酒精灯，三脚架，石棉网，温度计，火柴。 3.2 寻找资料请同学上网或上图书馆找资料，内容为：除温度外还有哪些条件影响酶的活性？酶与社会的联系，酶与人类生活的关系，酶的活性与动物体内环境的相对稳定有什么关系。 4 实验过程 4.1 设置探究情景，提出探究课题教师设置探究情景：生活中的加酶洗衣粉的包装袋上，往往注明这种洗衣粉的适用温度范围，从而联想温度是否影响酶的活性，提出探究课题：设计一个探究温度影响淀粉酶活性的实验。 4.2 介绍科学探究的方法，引导学生设计探究实验方案因为我校学生的实验动手能力差，平时课上又很少进行探究实验，所以教师明确地把科学探究的步骤告诉学生：提出问题→作出假设→设计实验→实验探究→阐述和交流实验结果与结论。有利于学生按照正确的
淀粉酶活性的测定
淀粉酶活性的测定 一、原理 淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。淀粉酶产生的这些还原糖能使3，5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。可以用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。几乎所有植物中都存在有淀粉酶，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，主要是α－和β－淀粉酶。Α－淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；而β－淀粉酶不耐热，在70℃15min则被钝化。根据它们的这种特性，在测定时钝化其中之一，就可测出另一个的活力。本实验采用加热钝化β－淀粉酶测出α－淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定的总活力（α＋β）比较，求出β－淀粉酶的活力。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）。 （二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴（37℃，70℃，100℃）；4.具塞刻度试管；5. 刻度吸管；6. 容量瓶。 （三）试剂（均为分析纯）：1. 标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；2. 3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸，溶于20ml2mol/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。盖紧瓶塞，勿使CO2进入。若溶液混浊可过滤后使用；3.01mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0.1mol/L 柠檬酸）：称取C6H8O7.H2O 21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液（0.1mol/L 柠檬酸钠）：称取Na3C6H5O7.2H2O 29.41g，用蒸馏水溶解并定容至1L。取A液55ml与B液145ml混匀，即为0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液；4.1％淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100ml0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。 三、实验步骤 （一）麦芽糖标准曲线的制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表（详教材）加入试剂。摇匀，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20ml。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制标准曲线. （二）酶液制备：称取1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数min搅动1次，使其充分提取。然后在3000rpm 下离心10min，将上清液倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液10ml，放入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液。 （三）酶活力的测定：取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表（详教材）进行操作。（四）结果计算：淀粉酶活力=C×V T/(W×V s×T)(mg/g/min)。式中，C为从标准曲线上查得的麦芽糖含量（mg）；VT为淀粉酶原液总体积（ml）；Vs为反应所用淀粉酶原液体积（ml）；W为样品重量（g）；t为反应时间（min）。
蜂蜜掺假检测方法分析总结
蜂蜜掺假检测方法分析总结 李兆锦广东医科大学药理学 [摘要]蜂蜜具有较高的营养价值和保健功能,深受消费者的青睐，但猖狂的掺假行为与复杂多样的掺假手段已成为社会关注的焦点。本文综述分析了目前各种蜂蜜掺假鉴别技术的优缺点，对新的检测技术进行展望。 [关键词]蜂蜜；检测；掺假 在最新国家蜂蜜标准GB 14963-2011中，首先规定了蜂蜜的含义，即“蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物融合后，经充分酿造而成的天然甜物质”。其成分复杂包括蛋白质、氨基酸、维生素、有机酸、色素、蜂花粉、激素、微量元素等[1]。《神农本草经》把“石蜜、蜂子、蜜蜡”列为上品，指出有“除百病、和百药”的作用，且“多服久服不伤人。” 《蜜蜂赋》中写道：“散似甘露，凝如割脂，冰鲜玉润，髓滑兰香。百药须之以谐和，扁鹊得之而术良。”可见其营养价值和功效之高，不法分子在巨大的商业利益驱动下，大肆作假，极大损害了蜂农、消费者和正规蜂蜜生产企业的利益。然而蜂蜜成分复杂、内部组分含量变化范围大等特征使得掺假造假容易，也使得蜂蜜品质检测技术遇到了很大的挑战。为使我国蜂蜜产业的健康发展，对建立一套灵敏、高效、准确的蜂蜜掺假鉴定方法具有非常重要的意义与价值，为建立蜂蜜掺假鉴定方法提供理论依据与实施基础。 1.造假手段 蜂蜜造假手段越来越多，随着检测方法的不断发展，造假手段也越来越多。但总的可分为以下几种[2]：（1）直接往蜂蜜中添加白糖或其他糖分（2）给蜜蜂喂食糖水（3）用白糖、明矾、香精等调出全假蜂蜜[3]。 2.鉴别方法 2.1传统鉴别法 对于一般的消费者来说，掌握一些普通简单的鉴别蜂蜜真假的方法尤为重要。首先是观察其颜色深浅，是否有光泽以及其组织状态是否呈胶体状，有无沉淀、杂质、气泡等；嗅其气味是否清香宜人；最后是品尝其滋味，感知味道是否清甜纯正，有无苦涩、酸和金属味等不良滋味以及麻舌感[4]。与蜂蜜接触最多的蜂农，他们建议，对于优劣蜂蜜，可以从如下几个方面进行区分[5]：第一，用碘酒判断是否有添加物。挑出一点蜜，兑入一两滴碘酒，如果蜂蜜变色（变色后为黑色略带蓝色）则说明该蜂蜜经过了后期加工，添加了白糖等物质。如果滴入碘酒不褪色，则说明该蜂蜜为正宗蜂蜜。第二，用纸巾检测是否含有水分。取一点蜂蜜放在纸巾上，如果蜂蜜很快扩散，说明其中添加了水分。反之，则说明该蜂蜜中没有添加水分，是比较纯的蜜。第三，看蜂蜜是否会结晶。一般而言，如果蜜糖好的话，会随着气温降低而产生结晶（如凝固的猪油一般）。而假蜂蜜一般不结晶。不过如果假蜂蜜中加入白糖，在一定条件下也会出现类似结晶的东西，在瓶底形成沉淀。但真蜂蜜结晶较为松软，放在手上很容易捻化，假蜂蜜析出的白糖沉淀较为致密，放在手上时，会有沙砾感。第四，纯正的蜂蜜表面无大量气泡，掺有淀粉的蜂蜜，会显得混浊不清，透明度差。第五，优质蜂蜜口感醇厚、回味绵长，给人一种芳香甜润的感觉，或有极轻微的淡酸味；质量较次或假蜂蜜，则会出现除香甜味外的其他异味，如掺糖蜜，白糖味较浓，掺淀粉的蜜，甜度下降香
影响淀粉酶酶活性的因素复习课程
影响淀粉酶酶活性的因素 一、目的 了解淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对淀粉酶活性的影响。 二、原理 人唾液中淀粉酶为α—淀粉，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。 淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖 淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色，麦芽糖、葡萄糖遇碘不变色。 唾液淀粉酶的最适温度为37－40℃，最适pH为6.8。偏离此最适环境时，酶的活性减弱。 低浓度的氯离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。铜离子等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。 三、试剂和仪器 1．碘液：称取2g碘化钾溶于5ml蒸馏水中，再加1g碘。待碘完全溶解后，加蒸馏水295ml，混合均匀后贮存于棕色瓶内。 2．1％淀粉溶液：称取1克可溶性淀粉放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中，继续煮沸1分钟，冷后再加蒸馏水定容至100ml。 3．0.4％的盐酸溶液 4．0.1％的乳酸溶液。 5．1％的碳酸钠溶液。 6．％的氯化钠溶液。 7．％的硫酸铜溶液。 8．仪器：试管试管架吸管玻璃棒白磁板烧杯漏斗恒温水浴量筒冰浴四、操作步骤 1．淀粉酶液的制备：实验者先用蒸馏水嗽口，然后含一口蒸馏水于口中，轻嗽一、二分钟，吐入小烧杯中，用脱脂棉过滤，除去稀释液中可能含有的食物残渣。最后将数人的稀释液混合在一起，再进行过滤，以避免个体差异。 2．pH对酶活性的影响 取4支试管，分别加入0.4%盐酸（pH＝1），0.1％乳酸（pH＝5），蒸馏水（pH＝7），与1％碳酸钠（pH＝9）各2毫升，再向以上四支试管中各加入2毫升淀粉溶液及淀粉酶液。混合摇匀后置于37℃水浴中保温。2分钟后，从蒸馏水试管中取出一滴溶液，置于白磁板上，用碘液检查淀粉的水解程度，待蒸馏水试管内的溶液遇碘不再变色后，取出所有的试管，各加碘液2滴，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明pH对酶活性的影响。 3．温度对酶活性的影响 取3支试管各加入3毫升2％淀粉溶液，另取三支试管，各加入1毫升淀粉酶液。将6支试管分为三组，每组中盛放淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支。三组试管分别置于0℃、37℃、70℃的水浴中，5分钟后将各组中的淀粉溶液到入淀粉酶液中，继续保温。2分钟后从37℃试管中取出一滴溶液，置于白磁板上，用碘液检查淀粉的水解程度，待37℃试管内的溶液遇碘不再变色后，取出所有的试管，各加碘液2滴，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明温度对酶活性的影响。 4．激活剂与抑制剂对酶活性的影响
淀粉酶活性测定实验报告
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：03 淀粉酶活性的测定 一、研究背景及目的 酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。 α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内 二、实验原理 萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在下则发生钝化。本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。 酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。 在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，四支测定管及空白管不要混淆。
探究温度对酶活性影响的实验设计
探究温度对酶活性影响的 实验设计 This manuscript was revised by the office on December 10, 2020.
探究温度对酶活性影响的实验设计 遵义县团溪中学黄定梅 “新陈代谢与酶”是高中生物学的一个重要内容，学生必须通过实验探究酶的活性 及其特征，为此，我先后尝试用唾液淀粉酶催化淀粉水解，过氧化氢酶催化H 2O 2 分解来研 究温度和PH值对酶活性的影响，但实验效果不佳，于是我对此实验作了改进，取得了良好的实验效果，其具体实验方案如下： 一、实验目的 1、学会探索影响酶活性因素的方法。 2、探索a—淀粉酶不同温度下催化淀粉水解的情况。 二、实验原理 淀粉遇碘后，形成蓝紫色复合物，a—淀粉酶可以催化淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖，麦芽糖和葡萄糖遇碘后不显色。 三、实验材料和用具 试管12支，试管刷1把，试管架1个，刻度吸管2支，恒温水浴箱2台（水温分别保持在60℃、100℃）、塑料烧杯1个（冻冰），铅笔1支，1%淀粉溶液，%a—淀粉酶溶液，卢戈氏碘液，蒸馏水。 四、实验准备 1、实验前教师应配制好1%淀粉溶液和%的a—淀粉酶溶液，卢戈氏碘液。 2、课前90min，打开2个温水浴箱，并调好温度。 五、实验步骤和实验记录
六、实验结论： 在不同温度下，a-淀粉酶的活性不同，低于最适温度，a-淀粉酶的活性没有全部释放，高于最适温度a-淀粉酶的活性随着温度的升高而消失。从以上实验表格可知，在2℃时，a-淀粉酶的活性最低，几乎没有活性，在60℃时，a-淀粉酶的活性最高，即60℃为最适温度，在96℃时，a-淀粉酶活性完全丧失。 七、说明： 1）对照组均为深蓝色，实验组中冰水组颜色为深棕色，60℃时为黄色，100℃时为深蓝色。 2）水浴箱水温100℃时，敞开盖后只能维持96℃。所以测定的是96℃下酶的活性，但也可以观察到明显现象。 3）水浴锅要保持水温60℃时，应设定在61℃，敞开盖时的实际温度为60.1℃左右。
蜂蜜淀粉酶值实验教学改革与创新
蜂蜜淀粉酶值实验教学改革与创新 【摘要】蜂蜜淀粉酶值检测是控制蜂蜜产品质量和安全的重要指 标之一。为促动高校与社会食品检验方法的衔接，激发学生的学习热情，山东农业大学卫生检验教研组采用最新国标检测方法取代陈旧方 法应用于蜂蜜淀粉酶值实验教学。在实施的过程中，通过增加碘溶液 预热管数保证淀粉酶酶促反应温度的一致性，采用全自动酶标仪替代 分光光度计提升学生实验效率等改进措施，提升了实验数据和结果的 精确度和准确性，改善了实验教学秩序，确保了国标检测方法法在蜂 蜜淀粉酶值实验教学中的应用。 关键词：实验教学；国标法；蜂蜜淀粉酶值；改进 蜂蜜的营养价值很高，口感独特，深受消费者欢迎1-2。在蜂蜜 所含有的一系列营养物质中，生物酶是其主要的生物活性物质，其中 淀粉酶的含量最高，能够促动人体对食物的消化和营养物质的吸收3-4。但当前市场上蜂蜜产品的质量参差不齐，真假难辨5-8。而蜂蜜淀粉酶活性的检测是控制商品化蜂蜜产品质量和安全的重要指标之一9-10。 蜂蜜淀粉酶值的检测方法有试管比色法和分光光度计法，其中分光光 度计法是最新的国家标准方法11-12。紧跟时代的步伐，与时俱进是高校实验教学改革的灵魂，促动实验教学内容的革新对于学生掌握新概念、新知识、新技能，开阔视野和思路具有极为重要的意义。为和社 会衔接，学校对蜂蜜淀粉酶值检测的实验教学实行了一系列的改革， 其中“国标进课堂”取代陈旧实验方法就是其中一项重要举措。在改
革的过程中发现实验教学不同于简单的实验验证，需要几十人同时实行，涉及到仪器、耗材、场地的共享使用，简单地照搬照抄国标方法并不能直接用于实验教学。为使国标法更好地适合实验教学，山东农业大学动物科技学院卫生检验教研组对蜂蜜淀粉酶值检测的部分内容实行了改革和创新。 1实验方案的设计 1.1材料 1.1.1蜂蜜 来源于山东泰安某养蜂场的新鲜百花蜜。 1.1.2试剂及配制