微核检测试验

诱变物质的微核检测
摘要微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。

一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。

微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的，而且与细胞所受到的不良刺激成正相关，因此可以通过观察植物组织中细胞的微核发生率来确定细胞所受到的污染情况。

1.引言
微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。

微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。

微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。

一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。

有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。

这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。

已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。

所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。

含有微核的细胞数占观察细胞总数的比率称为微核细胞率（千分率），简称微核率。

①微核细胞率可以用来反映遗传物质受损伤的程度；②在一定的剂贝范困内，微核率与环坡因子的剂量呈正相关③人们常用微核率来反映环境有害毒物的污染程度：一般认为，微核率在10‰以下时无污染；10-18‰时，有轻度污染；18-30‰时，有中度污染；>30‰，有中度污染。

微核检测技术灵敏度高，技术简单，在辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面都有所应用。

2.实验材料
2.1.试验材料
大蒜若干
显微镜一台，体视显微镜一台；
解剖针两根，眼科镊，载玻片，盖玻片（20mm×20mm），滤纸条，解剖刀片。

改良苯酚品红，1mol/LHCl，蒸馏水，卡诺氏固定液，75%酒精，待测物质（中华牌牙膏）。

2.2.试验方法
2.2.1.材料的获取
选取新鲜成熟完整可生根的大蒜若干，将大蒜剥皮，浸泡水中24～36小时，发根至0.5～1cm，选择根长整齐一致大蒜随机分组。

2.2.2.处理各实验组
实验组A：A1：0.01g/ml的牙膏溶液；A2：牙膏溶液的沉淀物；A3：原装牙膏（未稀释）。

阳性对照组B：不同浓度的NaN3溶液B1：0.100mol/L；B2：0.005 mol/L。

阴性对照组C：蒸馏水。

将发根至0.5～1cm的大蒜随机分为8组，分别浸泡于上述溶液中，于24℃继续培养约24h（一般植物生长周期17~18h）。

2.2.
3.恢复培养
将材料移入蒸馏水中，于24℃恒温培养箱中继续培养24h。

2.2.4.材料的固定及保存
将各组大蒜根尖剪下，分别于卡诺氏固定液中室温固定24h，之后转入75%酒精中4℃保存。

2.2.5.制片及观察
①尖用1mHCl室温下处理10min，蒸馏水洗涤3次；
②取近根尖分生区的伸长区组织，用改良苯酚品红染色10～15min；
③压片：加上盖玻片后，用铅笔轻敲使细胞分散，最后垂直压下去；
④镜检：先用低倍镜进行观察，找到好的视野后再转用高倍镜观察；每个根尖计数1000
个细胞，统计含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微核千分率。

3.结果及讨论
3.1.实验结果
A1
A3
B1
C
3.2.结果分析
3.2.1.A组实验中，A1的微核率在1‰左右，小于10‰，说明0.01g/ml的牙膏溶液对大蒜
的生长基本没有影响；A2、A3的实验中，微核率相似，都在90%以上，说明牙膏完全可以抑制大蒜的生长；
3.2.2.B组实验中，B1的微核率接近100%，说明0.100mol/L对大蒜的生长有很强抑制作
用；B2的微核率大概为20‰，说明0.005/L的叠氮化钠具有轻度污染。

3.2.3.C组实验试剂为蒸馏水，没有诱导作用，微核率在5‰以下，对大蒜生长没有影响。

3.3.实验分析
3.3.1.选大蒜要选取饱满，完整的，以确保其有较好的生命力，足以生根以观察；
3.3.2.大蒜的培养过程中，鉴于培养皿的大小，不要将过多的大蒜放到一个皿中，以免个
体竞争，影响打算生长；
3.3.3.牙膏的主要成分包括：摩擦剂:碳酸钙、磷酸氢钙、二氧化硅、氢氧化铝等；保湿剂：
甘油、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇等；表面活性剂：十二醇硫酸钠、2―酰氧基键磺酸钠等；增稠剂：羧甲基纤维素、黄原胶等；甜味剂：甘油、糖精钠等；防腐剂：苯甲酸钠等；活性添加物：叶绿素、氟化物等；色素与香精等。

从成分分析上完全可以看出牙膏对植物生长不利。