总糖的测定方法

铁氰化钾滴定法

准确称取经105℃烘干并冷却之后的样品5.000g，用少量水溶解并移入500ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。取出此液50ml于100ml容量瓶中，加盐酸5ml摇匀，置65～70℃水浴上加温30min，取出，迅速冷却至室温。用30%氢氧化钠溶液中和，加水至刻度，摇匀，倒入滴定管中。

吸取已配制好的铁氰化钾溶液5ml于150ml三角瓶中，加入2.5ml10%氢氧化钠溶液、12.5ml水和洁净的玻璃珠数个，于石棉网上加热至沸腾，保持1min。然后加入次甲基蓝指示剂1滴，立即以样品液滴定至蓝色消失为止，记录用量。正式滴定时，先加入比预实验少0.5ml的样品液，煮沸1min，加入次甲基蓝指示剂1滴，再用样品液滴定至无色。

按下述公式计算铁氰化钾的浓度：

式中C：相当于5ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g)；

V：滴定时消耗样品液的体积(ml)；

W：称取的样品重量(g)；

0.95：换算系数（1g蔗糖可转化为0.95g转化糖）

称取样品5～10g（视含糖量多少而增减），用200ml左右的水洗入250ml容量瓶内（样品中如含有较多的蛋白质、色素、胶体等可逐渐加入20%醋酸铅溶液10～15ml，至沉淀完全为止。并加入10～15ml10%磷酸二氢钠溶液，至不再产生沉淀为止）。加水至刻度，摇匀过滤。

吸取滤液50ml于100ml容量瓶中，按上述铁氰化钾标定方法进行转化、中和及滴定（以样液代替糖液，其余操作相同）。

按下述公式计算总糖含量：

式中A：相当于5ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g)；

V：滴定试样液消耗体积(ml)。

蒽酮比色法测总糖

实验五总糖的测定——蒽酮比色法

一、目的：

1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。

二、原理：

糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮

(C

14H

10

O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸

收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器、试剂和材料

1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等

2.试剂：

(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml

(2)浓硫酸

(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H

2SO

4

中。当日配制使用。

3.材料：甜糜秸秆

四、操作步骤

1.葡萄糖标准曲线的制作

取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：

在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。

2.植物样品中可溶性糖的提取：

将样品剪碎至2 mm以下，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50 ml 三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。

3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。

4.测定

吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A

620

平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。

五、结果处理

C ×V总× D

样品含糖量（%）= ─────────────×100

W ×V测×106

其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），

V总——提取液总体积（ml），

V测——测定时取用体积（ml），

D——稀释倍数，

W——样品重量（g），

106——样品重量单位由g换算成µg的倍数

六、注意事项：

该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。