HLPC法测定不同感冒药中马来酸氯苯那敏含量

HLPC法测定不同感冒药中马来酸氯苯那敏含量马来酸氯苯那敏为抗过敏类非处方药，其药理毒理作用：作为组织胺H1受体拮抗剂，本品能对抗过敏反应（组胺）所致的毛细血管扩张，降低毛细血管的通透性，缓解支气管平滑肌收缩所致的喘息，本品抗组胺作用较持久，也具有明显的中枢抑制作用，能增加麻醉药、镇痛药、催眠药和局麻药的作用。

本品主要在肝脏代谢。

本品不仅可以作为抗过敏性药物，在各种感冒药中也均含有。

本文采用HLPC法来测定在不同感冒药中马来酸氯苯那敏的含量。

一：1HLPC法测定复方感冒灵中马来酸氯苯那敏的含量
1.1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪, 四元泵(G1311A) ,DAD 检测器
(G1315B) 。

马来酸氯苯那敏对照品( 中国药品生物制品检定所提供, 批号: 100047- 200305) ; 复方感冒灵药品( 本厂提供) 。

乙腈为色谱纯, 水为重蒸水。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 流动相: 乙腈- 水( 75∶25) ; 检测波长: 280 nm; 柱温: 30℃; 流速: 1.0 ml/min。

在此条件下马来酸氯苯那敏能有效分离。

2.2 对照品溶液的制备
精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量, 加流动相制成每1毫升含马来酸氯苯那敏50 μg 的溶液, 即得。

2.3 供试品溶液的制备
精密称取供试品, 超声处理30 min, 取出放冷, 再精密称定重量, 加乙腈补足减失的重量, 摇匀, 用微孔滤膜过滤, 即得。

2.4 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1.0 ml 置10 ml 量瓶中, 加乙腈定容, 分别进样, 测得峰面积积分值, 以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 得回归方程Y=13 901X- 12.681( r=1.000 0) , 结果表明马来酸氯苯那敏在0.008 08~0.404 00mg/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线
性关系。

2.5 空白干扰试验
按处方比例及工艺制备缺马来酸氯苯那敏的阴性对照溶液, 按上述条件和实验方法操作, 结果在与对照品峰相应位置上无吸收峰。

说明该实验条件和方法对马来酸氯苯那敏的测定专属性强, 处方中其他成分及辅料对测定结果无影响。

2.6 精密度考察
精密吸取同一供试品溶液进样6 次, 测得平均峰面积为1 256.8, RSD 为1.93%。

2.7 重复性试验
取同一批号的供试品, 按供试品溶液制备方法处理, 共6 份, 测得平均浓度为1.81 mg/g, RSD 为1.05%。

2.8 稳定性考察
取同一供试品溶液, 每隔2 h 进样1 次, 连续8 h, 结果峰面积平均值1
072.1, RSD=1.82%, 表明供试品溶液稳定性较好。

2.9 加样回收试验
称取感冒灵细粉约0.5 g, 共6 份, 精密称定, 精密加入0.101 mg/ml 的马来酸氯苯那敏对照品溶液10 ml, 再精密加入乙腈- 水( 75∶25) 10 ml, 以样品测定法进行测定, 平均回收率为96.86%, RSD=1.00%。

结果表明本测定方法准确度高,误差小。

2.10 样品测定
将处理好的三批样品溶液按上述条件和方法测定。

二：1.HPLC法测定速感宁胶囊中马来酸氯苯那敏的含量
1.1 仪器与试药
LC210AP型高效液相色谱仪(日本岛津公司) ; SPD-10Avp紫外-可见检测器; LC210ATVP7725 ( i)型手动进样器;威玛龙色谱工作站。

甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯。

马来酸氯苯那敏对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用) ;速感宁胶囊。

2 实验方法与结果
2．1 色谱条件色谱柱: Agilent Eclip se XDB2C18 ( 416 250 mm, 5μm) ;流动相:甲醇0125%磷酸溶液( 25: 75) ;流速: 1
ml/min;检测波长: 262 nm;进样量: 10μl。

2.2对照品溶液的制备精密称取马来酸氯苯那敏对照品
适量,加流动相稀释成每1 ml含3215μg的溶液,作为对照
品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取本品内容物约015 g (约相当于
马来酸氯苯那敏118 mg) ,精密称定,置具塞锥形瓶中,加流
动相50 ml,称定重量,超声处理40 min,放冷,补重,摇匀,滤
过,取续滤液,即得。

2.4 线性关系分别精密吸取对照品溶液( 32145 μg/ml)
3, 6, 9, 12, 15μl,按上述色谱条件测定峰面积,以进样量对峰
面积绘制标准曲线,得回归方程Y = 1106 1 05X + 29 01413, r
= 019995,表明马来酸氯苯那敏在010974～014868μg范围
内呈现良好线性关系。

2.5 精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μl,重复进
样6次,测定马来酸氯苯那敏,其RSD为0135%。

2.6 稳定性试验精密吸取供试品溶液(批号: 20080407)
10μl,分别于0、4、8、12、24 h进行测定,其峰面积RSD 为
0145% ,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 阴性对照试验取除马来酸氯苯那敏阴性样品,按供
试品制备方法制成阴性供试品。

按上述色谱条件测定,结果
在马来酸氯苯那敏出峰位置无干扰峰。

2.8 重复性试验取同一批样品6份,分别按样品溶液制备方法制备,按上述色谱条件测定,求得马来酸氯苯那敏平
均含量为标示量的95167% , RSD为1135%。

2.9 回收率试验取已知含量的样品6 份(批号:
20080407) ,分别精密加入马来酸氯苯那敏对照品018113
mg,按供试品溶液制备方法处理。

并按上述色谱条件测定,
计算回收率分别为98106%、99188%、97165%、102116%、99198%、96187% ,平均回收率为99110% , RSD = 1196%。

2.10 样品测定取对照品溶液和供试品溶液,依法测定,
外标法计算马来酸氯苯那敏含量分别为95114%
(20080117) 、95103% (20080407) 、96183% (20080823) 。

3 讨论
3．1 波长的选择文献[ 2 ]采用262 nm作为检测波长;对马
来酸氯苯那敏对照品溶液进行紫外吸收光谱测定,其吸收峰
为226 nm和262 nm, 262 nm处的峰面积较大,故选择262
nm作为本品的检验波长。

3．2 流动相的选择文献[ 3 ]采用甲醇2庚烷磺酸钠醋酸混
合溶液(60 ∶40)为流动相;本试验分别考察了流动相: ①甲
醇:水:乙酸(30: 70: 1) ; ②甲醇:水:磷酸(43: 57: 012) ; ③甲醇0125%磷酸溶液( 25: 75) ;结果表明在③条件下,马来酸
氯苯那敏的峰型和分离度较好,阴性对照无干扰。

参考文献
[ 1 ] 朱张庆,李园园. 高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒马
来酸氯苯那敏含量与均匀度. 医药导报, 2008, 27 ( 11 ) : 139121392.
[ 2 ] 罗远秀. HPLC法测定维C银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量. 广西中医学院学报, 2009, 12 (2) : 60262.
[ 3 ] 刘晓琳. HPLC法测定感宁胶囊中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度. 安徽医药, 2003, 7 (2) : 1332134.
三HPLC 法测定维C 银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量
维C 银翘胶囊是根据维C 银翘片改变剂型的中西药复方制剂,为8 类新药。

处方中的中药由连翘、荆芥、金银花等组成,西药为对乙酰氨基酚、维生素C、马来酸氯苯那敏,具有辛凉解表,清热解毒之功效,常用于流行性感冒引起的发热头痛, 咳嗽, 口干, 咽喉疼痛。

维C 银翘片现行质量标准[1-2 ]中无马来酸氯苯那敏含量测定项,维C 银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量测定方法也未见有文献报道。

为进一步更好地控制该制剂的质量,笔者对维C 银翘胶囊的质量标准进行研究,建立了维C 银翘胶囊中马来酸氯苯那敏的含量测定方法,方法操作简单,专属性强,可作为维C 银翘胶囊的质量控制方法。

1 仪器与试药
Waters 515 泵、996 二极管阵列检测器、M32色谱工作站、717 自动进样系统。

乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

马来酸氯苯那敏对照品购于中国药品生物制品检定所(供含
量测定用) , 维C 银翘胶囊样品(批号为050801 、050802 、050803) 由广西维威药业有限公司提供。

2 方法与结果
211 色谱条件色谱柱: shim2pack CLC2ODS 色谱柱(250
mm ×610 mm ,5μm ,日本岛津公司) ;流动相:乙腈- 013 %
十二烷基硫酸钠- 磷酸(60∶40∶0102) (用三乙胺调节pH 值至313
±011) ;检测波长:262 nm;流速:110 ml/ min ;柱温:室
温;进样量:20μl ,理论板数按氯苯那敏峰计不低于10 000 。

212 对照品溶液的制备取马来酸氯苯那敏对照品约
10 mg ,精密称定为10132 mg ,置50 ml 量瓶中,加乙醇使溶解并稀释至刻度,精密量取5 ml ,置50 ml 量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得浓度为012064 mg/ ml 的对照品溶液。

213 供试品溶液的制备取样品20 粒的内容物,混匀,精
密称取相当于一粒量的内容物,置50 ml 的容量瓶中,加乙醇约35 ml ,超声处理30 min ,放冷,加乙醇稀释至刻度,摇匀, 滤过,取续滤液作为供试品溶液。

214 阴性样品溶液的制备按处方和工艺制备不含马来酸氯苯那敏的阴性样品,照供试品溶液的制备方法制成阴性样
品溶液。

215 检测波长的选择取对照品溶液20 μl ,注入液相色谱仪,记录色谱图(见图1) 。

在上述色谱条件下,马来酸氯苯那敏出现马来酸峰和氯苯那敏峰,马来酸出峰在前,保留时间短,阴性有干扰,不宜采用;氯苯那敏出峰在后,峰形好,无干扰,因此本文以氯苯那敏峰计算马来酸氯苯那敏的含量。

经
采用液相色谱仪二极管阵列检测器检测氯苯那敏峰,结果在225 nm 和262 nm 处有吸收峰,225 nm 为紫外末端吸收,不
宜采用,因此选择以262 nm 为检测波长。

216 干扰试验按上述色谱条件,分别取对照品溶液、供试
品溶液和阴性样品溶液各20μl ,进样测定,结果阴性样品溶
液在氯苯那敏峰相应的保留时间处无色谱峰,表明处方中其
他组分对氯苯那敏的测定没有干扰。

各色谱峰见图1～3 。

217 线性关系的考察精密量取对照品溶液( 浓度为
012064 mg/ ml) 1 ,3 ,5 ,7 ,9 ml ,分别置50 ml 量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀。

精密吸取上述溶液各20 μl ,分别进样,测定。

以氯苯那敏峰面积A 对马来酸氯苯那敏浓度C 回归,得回
归方程为: A = 141064 C - 541109 ( r = 110000) 。

表明马来酸氯苯那敏进样量在010826～017430μg 范围内,其峰面积
与浓度之间线性关系良好。

218 精密度试验精密吸取对照品溶液20μl ,按上述色谱
条件,分别连续进样6 次,记录氯苯那敏峰面积,结果平均峰
面积为294 544 ,RSD = 0117 %( n = 6) ,表明精密度良好。

219 重复性试验取同一批样品(批号为050801) 6 份,分
别按213 项下制备供试品溶液,取供试品溶液20μl ,进样测
定,计算含量。

结果马来酸氯苯那敏平均含量为标示量的
96173 % , RSD = 2106 %( n = 6) ,表明重复性良好。

2110 稳定性试验取样品(批号050801) 的供试品溶液,分
别在制备后0 ,2 ,6 ,12 ,24 ,48 h 进样,记录氯苯那敏峰峰面
积,结果RSD = 0124 %( n = 6) ,表明供试品溶液在48 h 内稳
定性良好。

2111 加样回收率试验精密称取已测定含量的样品(批号050801 ,马来酸氯苯那敏含量11022 mg/ 粒) 6 份,每份相当
于半粒量,置50 ml 量瓶中,分别精密加入马来酸氯苯那敏对
照品溶液(浓度012064 mg/ ml) 215 ml ,按213 项方法制备供
试品溶液,在上述色谱条件下测定,计算回收率。

3 讨论
311 本方成份较复杂,马来酸氯苯那敏在处方中量少(每粒
含1105 mg) ,不易混匀,影响药效和质量,在其质量标准中增
加马来酸氯苯那敏的含量测定,对保证药品的质量至关重
要。

312 根据马来酸氯苯那敏的溶解性质,曾试用过水、70 %乙
醇和流动相溶解样品,但溶解效果不好,过滤困难,测得的含
量偏低,选用乙醇作溶剂,溶解和过滤效果均得到改善,测得
的含量与投料量相符。

313 使用了不同的色谱柱试验,如Extend2C18柱(250 mm ×
416 mm ,5μm ,) 、luna C18 (2) 柱(250 mm ×416 mm ,5 μm) 、Nucleodur C18 Gravity 柱(250 mm ×416 mm ,5μm) 、shim2pack CLC2ODS 柱(250 mm ×610 mm ,5μm) 等,结果以shim2pack
CLC2ODS 柱(250 mm ×610 mm ,5μm) 柱效、分离效果和峰
形最好。

314 参照文献报道[325 ] ,曾考察了甲醇- 0105 mol/ L 磷酸二氢钾- 三乙胺(15∶85∶0102) ,用磷酸调pH 至314 ;乙腈-
015 %十二烷基硫酸钠- 磷酸(60∶40∶011) 及乙腈- 013 %十
二烷基硫酸钠- 磷酸(60∶40∶0102) (用三乙胺调节pH 值至
313 ±011) 等流动相;结果表明以乙腈- 013 %十二烷基硫酸
钠- 磷酸(60∶40∶0102) (用三乙胺调节pH 值至313 ±011)
为流动相最理想。

315 取050801 批的样品5 份,超声时间分别为10 min ,20
min ,30 min ,40 min ,60 min ,其它操作按213 项方法制备供
试品溶液,进样,测定,结果超声30 min 及超声40 min、超声
60 min 的含量基本不变,故超声时间定为30 min。

参考文献
[ 1 ] 中华人民共和国卫生部药典委员会1 中华人民共和国卫
生部药品标准[ S] . 中药成方制剂第二十册. 1998 :324 - 325.
[2 ] 国家药典委员会审定,国家药品监督管理局发布. 国家
药品监督管理局国家药品标准[ S ] . WS3
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2003.
[3 ] 田秀英,王宝娟,曲素欣. 用HPLC 法测定复方对乙酰氨
基酚胶囊4 组分的含量[J ] . 中国药师,2003 ,6 (12) :793. [4 ] 陈赞民1 高效液相色谱法测定伤风感冒液中盐酸甲基
麻黄碱及马来酸氯苯那敏的含量[J ] . 药物分析杂志,
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[ 5 ] 国家药典委员会1 化学药品地方标准上升国家标准[ S] .
第十三册. 2002 :128 - 129.
(编辑陈明伟)
收稿日期:2008 - 11 - 15
基金项目:广东省经贸委/ 财政厅科技创新重大课题(20060205 - 1) 作者简介:贝伟剑(1963 - ) ,副研究员,博士,研究方向为中药现代化及中成药二次研发
HPLC。