栀子药材中栀子苷和绿原酸含量测定方法研究_史玉红

38第15卷 第6期 2013 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 6 Jun .，2013栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoidesEllis 的干燥成熟果实。

具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效。

用于热病心烦，黄疸尿赤，血淋涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡；外治扭挫伤痛。

化学成分研究表明，栀子药材有效成分主要有环烯醚萜类化合物、有机酸酯类化合物、萜类化合物、黄酮类化合物及多糖类化合物等[1-8]。

本实验主要研究应用高效液相色谱法同时测定环烯醚萜类化合物栀子苷和有机酸酯类化合物绿原酸含量，为全面实现栀子药材的质量控制提供新方法。

1 仪器与试药Agilent 1200 型液相色谱仪（Agilent 科技有限公司），ChemStation 工作站（Agilent 科技有限公司）；Sarturius-BS110S 分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

无水乙醇、乙腈（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；冰乙酸（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；所用水为去离子水；栀子苷（中国药品生物制品检定所，No.110749-200410）；绿原酸（中国药品生物制品检定所，No.110753-200212）；10批栀子（购于安国市，分别产于：河南、湖南、贵州、安徽、广西、江西、云南、四川、福建、湖北；经沈阳药科大学孙启时教授鉴定）。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C 18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：1.0%的冰乙酸水溶液-1.0%冰乙酸乙腈溶液梯度洗脱（表1）；检测波长：238 nm ；柱温：30.0 ℃；进样量：10 μL ；流速：1.0 mL/min。

表1 栀子栀子苷和绿原酸含量测定梯度洗脱程序梯度流动相时间（min） 010223045507580A 水（含1.0%冰乙酸）9595908870651414B乙腈（含1.0%冰乙酸） 551012303586862.2 对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品39.64 mg，绿原酸对照品24.40 mg 置25 mL 量瓶中，加80%乙醇溶液溶解稀释并定容至刻度，摇匀；精密吸取上述混合对照品溶液2 mL 置50 mL 量瓶中，加80%乙醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀，备用。

2.3 供试品溶液的制备栀子粉末（过4号筛）取约1.0 g，精密称定，加水50 mL，加热回流提取2 h，滤过，残渣继续加水30 mL 回流提取2 h 后，两次滤液合并，进行减压浓缩至20 mL，加乙醇至80%（V/V），阴凉处避光放置24 h 后，过滤弃去沉淀，滤液用80%乙醇定容至25 mL，摇栀子药材中栀子苷和绿原酸含量测定方法研究史玉红（辽宁中医药大学附属第四医院，辽宁 沈阳 110101）摘 要：目的：建立栀子药材中栀子苷和绿原酸含量测定方法。

方法：色谱柱为Diamonsil C 18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为1.0%的冰乙酸水溶液-1.0%冰乙酸乙腈溶液梯度洗脱；检测波长为238 nm ；流速1.0 mL/min ；柱温30 ℃；进样量10 μL。

结果：栀子苷在3.171~126.85 μg/mL 质量浓度范围内线性关系良好，r =0.9999（n =6），平均回收率为99.98%，RSD 为0.33%；绿原酸在1.952~78.08 μg/mL 质量浓度范围内线性关系良好，r =0.9999（n =6），平均回收率为100.6%，RSD 为0.81%。

结论：方法操作简便，结果准确，可用于栀子药材中的栀子苷、绿原酸含量测定。

关键词：栀子；HPLC ；栀子苷；绿原酸含量中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 06- 0038- 03收稿日期：2012-12-10作者简介：史玉红（1971-），女，辽宁沈阳人，副主任药师，研究方向：药学。

Study on Determination of Geniposide and Chlorogenic Acid in Fructus GardeniaeSHI Yuhong（The Fourth Hospital Affiliated to Liaoning University of TraditionalChinese Medicine，Shenyang 110101，Liaoning，China）Abstract ：Objective ：To establish a method for determination of Geniposide and chlorogenic acid contents in Fructus gardeniae. Methods ：Chromatographic column of Diamonsil C 18 column（250 mm ×4.6 mm，5 μ m）was selected ；the mobile phase consisted of 1% acetic acid aqueous solution-1.0% acetic acid acetonitrile gradient elution ；the detection wavelength was 238 nm ；the flow rate was 1 mL/min ；column temperature was 30 ℃；sample was 10 μ L. Results ：Jasminoidin in the concentration range of 3.171~126.85μg/mL had good linear relationship，r =0.9999（n =6），the average recovery was 99.98% and RSD was 0.33%；chlorogenic acid in the concentration range of 1.952~78.08 μg/mL had good linear relationship，r =0.9999（n =6），the average recovery was 100.6% and RSD was 0.81%. Conclusion ：The method is simple，accurate and can be used for determination of geniposide，chlorogenic acid contents in Fructus gardeniae.Key words ：gardenia ；HPLC ；geniposide ；chlorogenic acid content3915卷 辽宁中医药大学学报匀，精密吸取上述溶液1mL 置25mL 量瓶中，加80%乙醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液，用微孔滤膜过滤，备用。

2.4 系统适用性试验按2.1色谱条件，分别将栀子苷和绿原酸混合对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，测定并记录相应色谱图。

结果表明，在本色谱条件下，栀子苷色谱峰及绿原酸色谱峰均与其他色谱峰的分离度大于1.5，且拖尾因子在0.95~1.05范围内，系统适应性良好。

2.5 专属性试验分别取空白溶剂（80%乙醇溶液）、栀子苷和绿原酸混合对照品溶液及供试品溶液，按2.1色谱条件测定，记录色谱图，结果表明，本方法专属性良好（见图1）。

ABCA.空白溶剂（80%乙醇溶液）；B.混合对照品；C.栀子样品（色谱峰1为绿原酸，色谱峰2为栀子苷）。

图1 专属性试验2.6 精密度试验取含63.42 μg/mL 的栀子苷、39.04 μg/mL 的绿原酸混合对照品溶液，在2.1色谱条件下，连续进样6次进行测定，栀子苷色谱峰面积RSD 为0.27%，绿原酸色谱峰面积RSD 为0.22%，结果表明仪器精密度良好。

2.7 线性关系试验分别精密称取栀子苷对照品39.64 mg，绿原酸对照品24.40 mg 置50 mL 量瓶中，加80%乙醇溶液溶解稀释并定容至刻度，摇匀，备用；上述溶液分别精密吸取0.2、0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，置50 mL 量瓶中，用80%乙醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀，即得含栀子苷浓度分别为3.171、15.855、31.71、63.42、95.14和126.85 μg/mL 及绿原酸浓度分别为1.952、9.76、19.52、39.04、58.56和78.08 μg/mL 系列混合标准溶液。

将上述溶液在2.1色谱条件下分别进行测定，记录色谱图。

分别以对照品的质量浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，经线性回归，栀子苷回归方程为：Y=11305X+96.952，r =0.9999（n =6），绿原酸回归方程为：Y=13285X+63.032，r =0.9999（n =6）。

结果表明栀子苷对照品在质量浓度3.171~126.85 μg/mL 范围内有良好的线性关系；绿原酸对照品在质表2 加样回收率结果序号 栀子苷 绿原酸样品已知量（μg/mL）加入量（μg/mL）测得量（μg/mL）回收率（%）平均回收率（%）RSD （%）样品已知量（μg/mL）加入量（μg/mL）测得量（μg/mL）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）131.5331.7131.6699.84299.980.3319.9719.5219.88 101.84100.60.81231.2831.7131.80100.2819.7419.5219.4399.539331.1131.7131.77100.1919.6219.5219.55100.15431.4231.7131.5599.49519.8319.5219.66100.72531.7431.7131.81100.3219.9819.5219.59100.36631.5731.7131.6499.77919.9119.5219.76101.23量浓度1.925~78.08 μg/mL 范围内有良好的线性关系。

2.8 加样回收率试验取已知栀子苷和绿原酸含量的同一批栀子药材6份，按2.3项下供试品溶液的配制方法操作至醇沉过滤定容至25 mL 后，精密吸取溶液1 mL 置25 mL 量瓶中，再分别精密吸取混合对照品溶液适量，加80%乙醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀，备用。

上述溶液用微孔滤膜过滤，在2.1色谱条件下进行测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算加样回收率，结果表明，本方法回收率良好（见表2）。