花卉组培技术

2、有机养分 是植物生长发育时所必需的有机碳、氢、氮等物质， 包括： A、维生素：以辅酶的形式参与各种酶系的反应。直接 影响到蛋白质、糖、脂肪等物质的代谢活动，对生长、 分化等有很好的促进作用。常用的有盐酸硫胺素（VB1全 面促进植物的生长）、盐酸吡哆醇（VB6能促进根的生长）、烟酸 （VB3)、生物素（VB11）、抗坏血酸（VC有抗氧化功能，防止 褐变）等。 B、肌醇：促进活性物质发挥作用的效果，使培养的组 织快速生长。 C、氨基酸：是蛋白质的组成成分，也是有机氮源，对 外植体的芽、根、胚状体的生长、分化有良好的促进作 用。常用的如丙氨酸、甘氨酸等。
B、细胞分裂素类 细胞分裂素类：溶于0.5mol/L或1mol/L的HCl或浓度小的 细胞分裂素类 NaOH中，装入棕色瓶存入冰箱。KT、6－BA先用1mol/L的 HCl溶解，再用加热的蒸馏水定容。ZT先用少量95％乙醇溶 解，再用热蒸馏水定容。 C、赤霉素类 赤霉素类：易溶于水，但不稳定，易分解。用95％乙醇 赤霉素类 配成母液存于冰箱中，用时用蒸馏水稀释到所需的浓度。 D、琼脂、卡拉胶、蔗糖等直接称取，随取随用。 琼脂、卡拉胶、蔗糖 琼脂
e、生长调节剂物质母液 、 由于其用量极微，常用浓度为mg/L，但配制成的母液 浓度为1mg/ml，常用生长调节物质的溶解方法如下： 生长素类：溶于95％的乙醇或0.1mol/L的NaOH中，用蒸 A、生长素类 生长素类 馏水定容，贮存于棕色瓶中入冰箱低温保存。NAA、IBA、 IAA、2,4-D多用少量95％乙醇溶解后用加热的蒸馏水定容。
2、培养基配制程序： 、培养基配制程序： A、将已配好的母液按顺序排好，依母液倍数或浓度计算褐 吸取相应量的各种母液和生长调节物质；计算和称取琼脂、 蔗糖。 B、按大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素的顺序量 取置入容器。 C、加入蔗糖，溶解后再加入琼脂粉，溶解后定容。 D、调整培养基的pH值。多数园林植物都要求pH5.5～6.5 的条件下进行组培。 E、培养基的分装：通常1L培养基分装13杯或33～35瓶。 不得沾染，及时加盖。
三、培养基的配制： 1、母液的配制和保存 母液的配制和保存： 母液的配制和保存 为了提高配制培养基的工作效率和减少多次称 量的人为误差，一般将基本培养基配制成10～200 倍的浓缩贮备液，即母液。存放于冰箱中。使用时 按一定比例稀释混合。 通常基本培养基的母液有4中：大量元素（浓 缩20倍），微量元素（浓缩100～200倍）铁盐 （100～200倍），除蔗糖外的有机物质（100～ 200）倍。现以MS培养基为例介绍母液的配制。
5
将上述物质分别称量分别溶解， 将上述物质分别称量分别溶解，定容后倒入磨口瓶 贴好标签入冰箱保存。 贴好标签入冰箱保存。
c、铁盐母液（配1L200倍的母液） 铁盐母液（ 1L200倍的母液） 倍的母液
成
分
用量/(mg.L-1) 用量
称取量/mg 称取量
吸取量/ml 配1L吸取量 吸取量
FeSO4.7H2O Na2-EDTA
倍的母液） d、有机物母液（配1L200倍的母液） 倍的母液 用量/(mg.L-1) 用量 配1L吸取量 吸取量/ml 吸取量
成
分
称取量/mg 称取量
肌醇 烟酸VB3 盐酸硫铵素VB1 盐酸吡哆醇VB6 甘氨酸
100.0 0.5 0.1 0.5 2.0
20000 100 20 100 400
5
分别称取并分别溶解后定容装瓶贴标签入冰箱保存。 分别称取并分别溶解后定容装瓶贴标签入冰箱保存。
1、无机养分 无机养分： 无机养分 是指植物在生长发育时所必需的各种化 学元素。有各种矿质元素、无机盐等。 依植物吸收量分为大量元素 大量元素（植物所需 大量元素 浓度大于0.5mmol/L的元素）和微量元素 微量元素（所 微量元素 需浓度小于0.5mmol/L）。
大量元素是指氮、磷、钾、钙、镁、硫、碳及来源于水中的氢、氧。 大量元素 微量元素指铁、锰、锌、铜、硼、碘、钼和钴等。 微量元素
花卉组织培养基本技术
1 组织培养的概念
组织培养是利用细胞的全能性原理快速繁殖植物的方 法。所用的繁殖材料少、生长时间短、增殖速度快、无病 毒等特点，广泛应用于花卉的商品生产中。花卉生产中主 要应用于： 观叶植物类：如竹芋、朱蕉、万年青等 盆花类：百合、兰花、非洲菊等 切花类：非洲菊、玫瑰、兰花、康乃馨等 园林绿地观赏植物：杜鹃、玉簪、红叶石楠、红千层等
a.大量元素母液（ 1L20倍的母液） a.大量元素母液（配1L20倍的母液） 大量元素母液 倍的母液
序 号 成 分 用量/(mg.L-1) 称取量 称取量/mg 配1L吸取量 吸取量/ml 用量 吸取量
1 2 3 4 5
NH4NO3 KNO3 KH2PO4 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O
组培主要设备及培养条件： 组培主要设备及培养条件： 包括通用实验室和材料培养室两个部分。 配药室：配制培养基，天平、化学品、冰箱、玻璃器皿等 准备室：材料、器具的洗涤、消毒，高压灭菌锅、蒸馏水器等 贮藏室：贮藏培养基，空调、紫外灯等 接种室：材料消毒、灭菌、接种，超净台、紫外灯、消毒器等 培养室：培养架、灯光、冷暖空调等。 温室大棚：炼苗，空调、水源等
N6 mg/L 37.3 27.8 mg/L 2.0 1.0 0.5 0.5 ——
（二）各种培养基的特点： 各种培养基的特点：
1.MS培养基 培养基：最早于1962年设计。特点是无机盐的浓度 培养基 高，具有高含量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，同 时含有一定数量的铵盐。营养丰富，能加速愈伤组织和 培养物生长的作用。是目前应用最广泛的培养基。
成分 微量元素 MnSO4·4H2O ZnSO4·4H2O H3BO3 KI Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O
MS mg/L 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025
B5 mg/L 10 2 3 0.75 0.25 0.025 0.025
2 培养基及其配制
培养基：是根据植物的需求， 培养基：是根据植物的需求，人工配制的很有各种 营养成分的营养液。是离体植物（ 营养成分的营养液。是离体植物（外植 体）赖以生长、分化的基础。 赖以生长、分化的基础。
培养基成分大致有四大类：无机养分、有机养分、 培养基成分大致有四大类：无机养分、有机养分、 植物激素（生长调节剂）、糖 碳源）。以及介质或载 植物激素（生长调节剂）、糖（碳源）。以及介质或载 ）、 ）。 体（纸桥、琼脂等）。 纸桥、琼脂等）。
27.8 37.3
5560 7460
5
将两种物质称量后分别用蒸馏水溶解， 将两种物质称量后分别用蒸馏水溶解，并适当加 热不停搅拌，然后将硫酸亚铁缓缓倒入Na 热不停搅拌，然后将硫酸亚铁缓缓倒入 2-EDTA 乙二胺四乙酸二纳，螯合物）溶液中，混合定容， （乙二胺四乙酸二纳，螯合物）溶液中，混合定容， 入棕色瓶贴标签入冰箱保存。 入棕色瓶贴标签入冰箱保存。
1650 1900 170 370 440
33000 38000 3400 7400 8800 50
应分别将上述物质溶解，再依次加入容量瓶中定容。 应分别将上述物质溶解，再依次加入容量瓶中定容。 倒入磨口瓶中贴好标签，入冰箱保存。 倒入磨口瓶中贴好标签，入冰箱保存。
b、微量元素母液（配1L200倍的母液） 微量元素母液（ 1L200倍的母液） 倍的母液
二、常用培养基的配方及其特点
（一）几种常见培养基的组成
成分 大量元素 NH4NO3 (NH4)2SO4 KNO3 CaCl2·2H2O KH2PO4 MgSO4·7H2O
MS mg/L 1650 —— 1900 440 170 370
B5 mg/L —— 134 3000 150 150 500
N6 mg/L —— 463 2830 166 400 185
5.SH培养基：是1972年设计的。主要特点与B5培养 培养基： 培养基 基相似，不用(NH4)2SO4而用(NH4)H2PO4，是矿质盐浓 度比较高的培养基。在不少单子叶植物和双子叶植物 使用效果很好。
6.Miller培养基 培养基：与MS培养基比较，无机元素用量减 培养基 少了1/3~1/2，微量元素种类减少，无肌醇。
源自文库
N6 mg/L 4.4 1.5 1.6 0.8 —— —— ——
成分 铁盐 Na2EDTA FeSO4·7H2O 有机物质 甘氨酸 盐酸硫铵素VB1 烟酸VB3 盐酸吡哆醇VB6 肌醇
MS mg/L 37.3 27.8 mg/L 2.0 0.1 0.5 0.5 100
B5 mg/L 37.3 27.8 mg/L —— 10 1 1 100
花卉组织培养的途径： 花卉组织培养的途径： 花卉组织培养是利用植物的组织或细胞培养的植株，可以 通过三种途径实现： 通过器官发生形成植株：通过培养的组织产生芽及根，使用的 器官材料有：茎尖产生芽，芽分离培养成植株；外植体产生不 定芽发育成植株。 愈伤组织分化成植株：将花卉的部分组织培养成愈伤组织，再 诱导分化成芽和根，形成植株。 胚状体发生形成植株：将培养产生的愈伤组织，通过悬浮培养 或直接产生胚状体，再发育成完整的植株
3、植物生长调节物质：
是培养基中不可缺少的关键物质，对外植体愈伤组织的诱导 和根、芽等器官分化，起着重要和明显的调节作用。常用的有： A、生长素 生长素：促进细胞分裂，诱导根和愈伤组织形成，促进细胞分 生长素 化。与分裂素共同诱导不定芽分化、侧芽的萌发与生长等。 常见的有：IAA、NAA、IBA、2,4-D等，以2,4-D活性最强， NAA、IBA其次。 B、细胞分裂素 细胞分裂素：促进细胞分裂，诱导芽的分化等。 细胞分裂素 常见的有6-BA（BA）、KT、2-ip、ZT等。 此外还有如赤霉素（GA3）、脱落酸（ABA)、多效唑（PP333)等。
2.White培养基 培养基：又称WH培养基，1943年设计，1963 培养基 年改良。特点是无机盐浓度较低。使用也很广泛，常用 于生根和胚胎培养。
3.N6培养基：是1974年我国的朱至清等为水稻等谷 培养基 物作物花药培养设计的。特点是成分简单，KNO3和 (NH4)2SO4含量高且不含钼。在国内已广泛用于小 麦、水稻及其他植物的花药培养和组织培养。 4.B5培养基：1968年设计。特点是含有较低的铵， 培养基 这个成分可能不少培养物生长有抑制作用。从实践 中得知，有些植物在B5培养基中生长更适宜，如双 子叶植物特别是木本植物。
4、糖（碳源）： 碳源）： 为植物提供能量和维持一定的渗透压。最常用的是 蔗糖。 5、介质（培养载体）： 介质（培养载体）： 液体培养基通常用纸桥作为培养物的支持载体。 固体培养基的常用载体是琼脂或卡拉胶。 此外，培养基中因特殊培养目的常加入其它添加 物，如活性碳（减少酚类物质排泄和变褐老化），抗 生素（防止菌类污染），抗氧化剂、诱变剂、生长抑 制剂等。
氮：参与营养器官生长和发育。缺氮老叶发黄；过量造成枝叶过度茂盛。 磷：对植物生长和生理起重要作用。缺磷植株生长缓慢；老叶暗紫色。 钾：促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。缺钾致叶尖叶缘枯焦，叶片 呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。 钙：促进幼根生长。缺钙嫩叶失绿；叶缘向上卷曲，出现白色条纹。 镁：影响酶的活性和新陈代谢过程。缺镁叶缘及中央部分失绿变白。 硫：影响蛋白质的合成。缺硫叶色变为淡绿，进而变白。 铁：影响叶绿素的合成和延长生长。缺铁绿叶变黄进而变白。 锰：参与光合、呼吸代谢，影响根系生长。缺锰叶出现缺绿斑点或条纹。 锌：增强光合作用效率，参与生长素代谢。缺锌叶变黄、变小、出现白斑。 铜：促进生殖器官正常发育。缺硼叶失绿，叶缘上卷黄化，顶芽死亡。 钼：参与繁殖器官的建成。 钴：缺钴叶失绿卷曲，叶片向上弯曲凋枯。
成 分 用量/(mg.L-1) 用量 称取量/mg 称取量 吸取量/ml 配1L吸取量 吸取量
MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2MoO4.2H2O CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O
22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025
4460 1720 1240 166 50 5 5