第三部分-中药指纹图谱研究关键技术及规范

SFDA关于中药注射剂指纹图谱的技术要求 (暂行) 中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南 (试行)
为了加强中药注射剂的质量管理，确保中 药注射剂的质量稳定、可控，中药注射剂 在固定中药材品种、产地和采收期的前提 下，需制定中药材、有效部位或中间体、 注射剂的指纹图谱。
一、中药指纹图谱建立 技术规范总则
② 称样

应按照常规要求，将选取的样品适当粉碎后混合均匀， 再从中称取试验所需的数量，一般称取供试品与选取 样品的比例为1：10，即如称取1g供试品，应在混合 均匀的10g选取的样品中称取。因为指纹图谱需要提 供量化的信息，称取供试品的精度一般要求取3位有 效数字。
③ 制备
药材指纹图谱的主要目的，一是考察药材本身的质量情况， 二是以药材的指纹图谱为参比，提取物及制剂的指纹图谱与 之比较，以考察制剂与原药材的相关性。 药材供试品溶液的制备，可选用适宜的溶剂和提取方法，定 量操作进行，尽量使药材中的成分较多地在色谱图中反映出 来，并达到较好的分离。 最终制备的供试品溶液还应能适应色谱实验的需要，如液相 色谱的供试品溶液宜用色谱流动相或色谱洗脱强度较弱的溶 剂； 气相色谱的供试品可采用水蒸气蒸馏法、顶空进样法或固相 微萃取法，供试品如需使用溶剂，应用低极性低沸点的溶剂。
④ 定容与放置
供试品溶液最终应用适宜的溶剂于标定容量的容器， 制成标示浓度的供试品溶液(g／ml或mg／ml)； 一般要求供试品溶液尽量新鲜配制，如连续实验需 要，供试品溶液应在避光、低温、密闭容器条件下短 期放置，一般不超过两周，溶液不稳定的，一般不超 过48小时。
2．2 半成品(提取物，中间体) 供试品溶液的制备
1 供试品收集
供试品收集是实验研究指纹图谱最初也是最 关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有 样本进行实验，而且生长环境条件对药材代 谢产物有影响，所以要收集有代表性的样品。 收集不少于10批供试品的含义是指样本的 数和量要有足够的代表性。
1．1 原料药材
在药材的化学成分与中医临床疗效之间关联尚未能阐明的现阶段，基本 上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验 研究。原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研 究其指纹图谱是以此作为选择原药材料投料或混批提取的依据，同时作 为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础； 药材的“批”不是工业生产的“批”，是指相互独立的供试品，即不能 将同一地点或同一渠道同一时间获得的样品分成若干份样品，以保证试 验结果的代表性。为使指纹图谱能代表所表征药材的内在质量特征，不 同批药材应首先包括各主产地药材，其次考虑不同其它产地和不同购买 时间的不同批药材样本； 由于收集药材样品受主观和客观的条件限制，供实验的供试品严格讲均 没有统计学的意义，所以样品数越多越好，l0批是最低的要求。供试品 应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括：供试品来源 、 采集时间(购买时间)及采集人 、基原鉴定及鉴定人 、质量评估 、供试样 品的留样、贮藏和标签（留样数量应不少于实验实际用量的3倍。以保证 实验结果有异议时的可追溯）。


1.2 半成品（中间体）和成品（制剂）
半成品及注射剂成品均应有10批以上 的样品供实验，以保证指纹图谱的可 重复性； 各批供试样品须有留样 。
2 试品溶液的制备
2．1药材供试品溶液的制备Байду номын сангаас①取样

供试品取样应注意代表性，以保持实验室取样与实际生 产应用药材一致，例如地上部分的药材，取样约o．5～lkg， 分别称量茎、叶、花、果的大致比例并做记录。如果实类药 材，生产时去除种子的，供试品也应除去种子，并做记录。 如药材表观质量不均匀(如大小不一、肥瘦不等、粗细不匀 等)，应注意供试品的取样有代表性，其后的实验中，必要 时应做比较实验，以考察所含成分有无显著差异，供生产参 考。
3 参照物
3．1参照物的选择
指纹图谱的参照物质一般选取容易获取的一个以上注射剂中的主 要活性成分或指标成分，主要用于考察指纹图谱的稳定程度和重 现性，并有助于色谱的辨认。在与临床药效未能取得确切关联的 情形下，参照物(复方注射剂应首选君药的活性成分或指标成分) 起着辨认和评价色谱指纹图谱特征的指引作用，它并不等同于含 量测定的对照品。指纹图谱一般色谱比较复杂，内标物不易选择， 也不易插入，指纹图谱不是含量测定，故内标物的作用也不等同 于含量测定的内标物，因此应慎重考虑选用内标物质的必要性和 可能性。参照物应说明名称、来源和纯度。如无参照物，可选择 指纹图谱中的稳定的色谱峰作为参照峰，说明其色谱行为和有关 数据，并应尽可能阐明其化学结构及化学名称。如情况需要，且 有可能，也可考虑选择适当的内标物插入色谱中。
称取不同批次的半成品(提取物)，参照“供 试品溶液”的制备方法中相应的内容制备成 一定量的溶液，备用。标签须注明编号或批 号，应与取样的药材编号一致，或有明确的 关联，以保证数据的可追溯。主要操作过程 及数据应详细记录。
2．3 成品(注射剂)供试品溶液制备
液体注射剂一般可直接或稀释后作为供试品溶液，必 要时也可用适宜的溶剂提取并制备成一定量的溶液。 固体形式的注射剂(冻干粉针)须注意注射剂成品的附加 剂有无对色谱实验干扰。如有干扰，须研究采取适宜 的样品预处理方法以排除干扰(如含有氯化钠则液相色 谱不可使用蒸发光散射检测器；如糖分太多，可能影 响薄层色谱的清晰度和分离度；冻干粉针的骨架剂用 量较大时也可能影响色谱的质量等)。此外，单方注射 液药材或复方注射剂中不同药材成分类别如果相差较 大，色谱条件要求不同，需要进行样品的预处理时， 应分别进行试验，便于制备两个以上的指纹图谱。主 要步骤及数据应详细记录。
第三部分
中药色谱指纹图谱研究程序
Research Procedure of TCM Fingerprint
主要内容
中药指纹图谱建立技术规范总则； 中药材指纹图谱建立技术规范说明； 中药注射剂和中间体指纹图谱建立技术规范 说明； 中药指纹图谱建立技术规范总则说明； 色谱条件选择和优化