梅毒血清学检测技术
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亮光下观察结果
60滴/mL，1滴=17ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。
下同定性试验。 问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？
√
Baidu Nhomakorabea
2、定性试验
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，
×
并均匀地涂布在整个圈内
加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原
反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下观察结果
梅毒血清学检测技术
中牟卫生防疫站 闫娇霞
梅毒及其病原体
梅毒有梅毒苍白螺旋体引起的一种性传 播疾病，可以分为早期梅毒（一期、二 期和早期隐匿性梅毒）和晚期梅毒（三 期和晚期梅毒），临床症状不明显，病 例依赖于实验室检查。
2
实验室检测的目的？
早期发现 临床诊断 有效治疗 精准医疗 疫情报告
检测方法 检测策略
外部对照质控品，可采用商用质控品或 自制质控品。质控品应包含阳性和阴性 样品。 非梅毒螺旋体试验阳性样品应有 抗体滴度（一般为 1:8）。自制质控品可 使用本室保留的阳性样品。
28
结果如何解读和合理应用
结果如何解读和合理应用（1）
1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋体特异性抗体通常会终身阳性 2.RPR/TRUST只能用于梅毒初筛 3. 二期梅毒时，TPPA和RPR两种血清学试验100％阳性 4.接受抗梅治疗的婴儿，随访18个月后TPPA （+）/RPR（- ）可
12
检测策略二图解
13
非梅毒螺旋体抗原血清学原理
方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。
基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉
眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似
(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。
问题： 为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？
检测方法分类
非梅毒螺旋体试验
1、快速血浆反应素 环状卡片试验 (RPR)
2、甲苯胺红不加热 血清试验 （TRUST
3性病研究实验室试 验 (VDRL)等。
梅毒螺旋体试验
梅毒螺旋体颗粒凝集试 验 (TPPA)
1:1 1:2
1:4
1:8
1:16
1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
定量试验结果判断
血清稀释度
结果
1:1 1:2 1:4 1:8 1:16
+ - - - - 1:1 + + - - - 1:2 + + + + - 1:8
非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、 梅毒 敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。 病期
26
质量控制-试剂盒内部质控品对照
试剂盒内部对照质控品即为试剂盒提供 的阳性和阴性对照血清。
试剂盒内部对照用于判断每次实验的有 效性，但不能作为室内质控品使用。每 个检测日，在检测样品前应先检测试剂 盒内部对照，而且只能在同批号的试剂 盒中使用。内部对照结果无效，则表明 此试剂盒失效。
27
质量控制-外部对照质控品
一期
因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可
二期
作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；
（2）结梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒 隐性
现症感染和既往感染
晚期
VDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性 非梅 高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据， 毒
敏感性 (%)
86（77-99）
特异性 (%)
-
100
98(95-100)
（一般滴度>1:8， 但不排除<1:8）
73
-
98(93-99)
但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅
毒。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
前带现象
1:1 1:2 1:4
1:8
1:16
血清稀释
1:1 1:2 1:4 1:8 1:16
- - - ++ - - +++
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
方法略，大家可以参考《全国梅毒检测 技术规范》
9
以临床诊断为目的的检测策略一
：采用非梅毒螺旋体定性试验对样品进行初筛
，对呈阴性反应的样品，可出具非梅毒螺旋体 试验阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，用 梅毒螺旋体试验复检，对呈阴性反应 的样品， 可出梅毒螺旋体试验阴性（-）报告；呈阳性反 应的样品再进一步做非梅毒螺旋体定量 试验， 出具梅毒螺旋体试验和非梅毒螺旋体试验均为 阳性的报告，同时报告非梅毒螺旋体定量试 验 滴度。出具报告时均需标明采用的具体方法。
结果的解读和合理应用
医生、检验、防保
常用梅毒实验室检测方法
检测方法
病原学检测 梅毒螺旋体血清学试验 非梅毒螺旋体血清学
组织病理学检测 白细胞检测 蛋白检测
血清学样品采集和保存
血清、血浆、全血及脑脊液可用于梅毒 血清学检测或核酸检测。
血清或血浆样品，短期（1 周）内进行 检测的可存放于 2～8℃， 一周以上应存 放于低于 -20℃的条件下。
假阳性反应
技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起 的假阳性反应，经过重复试验即可排除。
生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应 采用梅毒螺旋体抗原血清学试验如TPPA等进 行排除。
TPPA
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅 毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高 的敏感性和特异性。
10
检测策略一图解
11
以临床诊断为目的的检测策略二
采用梅毒螺旋体试验初筛检测，对呈阴性反应 的样品，可出具梅毒螺旋体试验 阴性（-）报 告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做非梅 毒螺旋体定性试验进行复检，对呈阴 性反应的 样品，可出具非梅毒螺旋体试验阴性（-）报告 ；呈阳性反应的样品再进一步做非梅毒 螺旋体 定量试验，出具梅毒螺旋体试验和非梅毒螺旋 体试验均为阳性的报告，同时报告非梅毒螺 旋 体定量试验滴度。出具报告时均需标明采用的 具体方法
确诊为胎传梅毒 5.常规梅毒血清学检测的是IgG抗体，不能检测到IgM抗体 6.TPPA（- ）/ RPR（+）结果一般可排除梅毒螺旋体感染 7. TPPA滴度检测是临床治疗梅毒效果评价的重要参考指标
30
结果如何解读和合理应用（2）
8. 新生儿血清TPPA（+）/ RPR（+），可诊断为先天梅毒 9.梅毒初筛可采用任何一种血清学检测方法 10. RPR和TRUST的方法原理相同，所以两种方法的定量试验滴
5
检测目的
梅毒血清学检测可用于临床诊断、血液 筛查、流行病学监测等。
以临床诊断为目的的检测是为了确定梅 毒感染的状况。
以血液筛查为目的的检测是为了防止梅 毒的经血传播。
以流行病学监测为目的的检测是为了调 查梅毒血清学感染率和发病率。
6
梅毒血清学检测方法
(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）
？ 1:2
1:4
1:8
1:16
1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
定量试验结果判断
血清稀释度
结果
？ 1:2 1:4 1:8 1:16
+- - - -？ ++ - - - ？ ++++ - ？
问题：定量试验原倍血清滴度是多少？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。
临床试验a 100 100
特异性 100
2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 美国CDC 88 100 100 95
1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环
a:均为RPR阳性标本
±： 粒子沉集孔底，中央形成一小点
–： 粒子紧密沉积孔底中央
25
质量控制
非梅毒螺旋体试验的 RPR 和 TRUST、以 及梅毒螺旋体试验的 TPPA、TPHA、TPRT、TP-WB 等均 采用肉眼直接阅读结果 ，其室内质量控制采用非统计学方法进 行。
度结果一定一致 11. TPPA（+）/ RPR（-）可能是极早期梅毒 12. ELISA法检测阳性，TPPA复检阴性，最终结果报告：TPPA
试验阴性，解释ELISA法为假阳性。
31
？滴/mL，1滴=？ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速、转幅
100r/min 约18mm
2、定性试验
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中， 并均匀地涂布在整个圈内
加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原 反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ，
TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“ 金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。
TPPA试验原理示意图
+
明胶颗粒
梅毒抗原
+
抗原致敏颗粒
抗原致敏颗粒 血液中抗体
抗原抗体凝集
TPPA试验结果判读
敏感性
4+： 粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 病期
一二隐 期期性
3+： 粒子光滑覆盖大部分底
梅毒螺旋体血球凝集试 验 (TPHA)、
梅毒酶联免疫吸附试验 （TP-ELISA）
化学发光试验
梅毒免疫层析法-梅毒快 速检测 (TP-RT)
8
检测试剂方法
所有应用于临床的检测试剂均必须是经 国家食品药品监督管理局注册批准、在 有效期内的试 剂，其中 RPR、TRUST、 TP-ELISA 应有批批检合格证。
60滴/mL，1滴=17ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。
下同定性试验。 问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？
√
Baidu Nhomakorabea
2、定性试验
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，
×
并均匀地涂布在整个圈内
加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原
反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下观察结果
梅毒血清学检测技术
中牟卫生防疫站 闫娇霞
梅毒及其病原体
梅毒有梅毒苍白螺旋体引起的一种性传 播疾病，可以分为早期梅毒（一期、二 期和早期隐匿性梅毒）和晚期梅毒（三 期和晚期梅毒），临床症状不明显，病 例依赖于实验室检查。
2
实验室检测的目的？
早期发现 临床诊断 有效治疗 精准医疗 疫情报告
检测方法 检测策略
外部对照质控品，可采用商用质控品或 自制质控品。质控品应包含阳性和阴性 样品。 非梅毒螺旋体试验阳性样品应有 抗体滴度（一般为 1:8）。自制质控品可 使用本室保留的阳性样品。
28
结果如何解读和合理应用
结果如何解读和合理应用（1）
1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋体特异性抗体通常会终身阳性 2.RPR/TRUST只能用于梅毒初筛 3. 二期梅毒时，TPPA和RPR两种血清学试验100％阳性 4.接受抗梅治疗的婴儿，随访18个月后TPPA （+）/RPR（- ）可
12
检测策略二图解
13
非梅毒螺旋体抗原血清学原理
方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。
基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉
眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似
(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。
问题： 为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？
检测方法分类
非梅毒螺旋体试验
1、快速血浆反应素 环状卡片试验 (RPR)
2、甲苯胺红不加热 血清试验 （TRUST
3性病研究实验室试 验 (VDRL)等。
梅毒螺旋体试验
梅毒螺旋体颗粒凝集试 验 (TPPA)
1:1 1:2
1:4
1:8
1:16
1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
定量试验结果判断
血清稀释度
结果
1:1 1:2 1:4 1:8 1:16
+ - - - - 1:1 + + - - - 1:2 + + + + - 1:8
非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、 梅毒 敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。 病期
26
质量控制-试剂盒内部质控品对照
试剂盒内部对照质控品即为试剂盒提供 的阳性和阴性对照血清。
试剂盒内部对照用于判断每次实验的有 效性，但不能作为室内质控品使用。每 个检测日，在检测样品前应先检测试剂 盒内部对照，而且只能在同批号的试剂 盒中使用。内部对照结果无效，则表明 此试剂盒失效。
27
质量控制-外部对照质控品
一期
因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可
二期
作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；
（2）结梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒 隐性
现症感染和既往感染
晚期
VDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性 非梅 高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据， 毒
敏感性 (%)
86（77-99）
特异性 (%)
-
100
98(95-100)
（一般滴度>1:8， 但不排除<1:8）
73
-
98(93-99)
但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅
毒。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
前带现象
1:1 1:2 1:4
1:8
1:16
血清稀释
1:1 1:2 1:4 1:8 1:16
- - - ++ - - +++
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
方法略，大家可以参考《全国梅毒检测 技术规范》
9
以临床诊断为目的的检测策略一
：采用非梅毒螺旋体定性试验对样品进行初筛
，对呈阴性反应的样品，可出具非梅毒螺旋体 试验阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，用 梅毒螺旋体试验复检，对呈阴性反应 的样品， 可出梅毒螺旋体试验阴性（-）报告；呈阳性反 应的样品再进一步做非梅毒螺旋体定量 试验， 出具梅毒螺旋体试验和非梅毒螺旋体试验均为 阳性的报告，同时报告非梅毒螺旋体定量试 验 滴度。出具报告时均需标明采用的具体方法。
结果的解读和合理应用
医生、检验、防保
常用梅毒实验室检测方法
检测方法
病原学检测 梅毒螺旋体血清学试验 非梅毒螺旋体血清学
组织病理学检测 白细胞检测 蛋白检测
血清学样品采集和保存
血清、血浆、全血及脑脊液可用于梅毒 血清学检测或核酸检测。
血清或血浆样品，短期（1 周）内进行 检测的可存放于 2～8℃， 一周以上应存 放于低于 -20℃的条件下。
假阳性反应
技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起 的假阳性反应，经过重复试验即可排除。
生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应 采用梅毒螺旋体抗原血清学试验如TPPA等进 行排除。
TPPA
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅 毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高 的敏感性和特异性。
10
检测策略一图解
11
以临床诊断为目的的检测策略二
采用梅毒螺旋体试验初筛检测，对呈阴性反应 的样品，可出具梅毒螺旋体试验 阴性（-）报 告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做非梅 毒螺旋体定性试验进行复检，对呈阴 性反应的 样品，可出具非梅毒螺旋体试验阴性（-）报告 ；呈阳性反应的样品再进一步做非梅毒 螺旋体 定量试验，出具梅毒螺旋体试验和非梅毒螺旋 体试验均为阳性的报告，同时报告非梅毒螺 旋 体定量试验滴度。出具报告时均需标明采用的 具体方法
确诊为胎传梅毒 5.常规梅毒血清学检测的是IgG抗体，不能检测到IgM抗体 6.TPPA（- ）/ RPR（+）结果一般可排除梅毒螺旋体感染 7. TPPA滴度检测是临床治疗梅毒效果评价的重要参考指标
30
结果如何解读和合理应用（2）
8. 新生儿血清TPPA（+）/ RPR（+），可诊断为先天梅毒 9.梅毒初筛可采用任何一种血清学检测方法 10. RPR和TRUST的方法原理相同，所以两种方法的定量试验滴
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检测目的
梅毒血清学检测可用于临床诊断、血液 筛查、流行病学监测等。
以临床诊断为目的的检测是为了确定梅 毒感染的状况。
以血液筛查为目的的检测是为了防止梅 毒的经血传播。
以流行病学监测为目的的检测是为了调 查梅毒血清学感染率和发病率。
6
梅毒血清学检测方法
(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）
？ 1:2
1:4
1:8
1:16
1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
定量试验结果判断
血清稀释度
结果
？ 1:2 1:4 1:8 1:16
+- - - -？ ++ - - - ？ ++++ - ？
问题：定量试验原倍血清滴度是多少？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。
临床试验a 100 100
特异性 100
2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 美国CDC 88 100 100 95
1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环
a:均为RPR阳性标本
±： 粒子沉集孔底，中央形成一小点
–： 粒子紧密沉积孔底中央
25
质量控制
非梅毒螺旋体试验的 RPR 和 TRUST、以 及梅毒螺旋体试验的 TPPA、TPHA、TPRT、TP-WB 等均 采用肉眼直接阅读结果 ，其室内质量控制采用非统计学方法进 行。
度结果一定一致 11. TPPA（+）/ RPR（-）可能是极早期梅毒 12. ELISA法检测阳性，TPPA复检阴性，最终结果报告：TPPA
试验阴性，解释ELISA法为假阳性。
31
？滴/mL，1滴=？ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速、转幅
100r/min 约18mm
2、定性试验
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中， 并均匀地涂布在整个圈内
加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原 反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ，
TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“ 金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。
TPPA试验原理示意图
+
明胶颗粒
梅毒抗原
+
抗原致敏颗粒
抗原致敏颗粒 血液中抗体
抗原抗体凝集
TPPA试验结果判读
敏感性
4+： 粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 病期
一二隐 期期性
3+： 粒子光滑覆盖大部分底
梅毒螺旋体血球凝集试 验 (TPHA)、
梅毒酶联免疫吸附试验 （TP-ELISA）
化学发光试验
梅毒免疫层析法-梅毒快 速检测 (TP-RT)
8
检测试剂方法
所有应用于临床的检测试剂均必须是经 国家食品药品监督管理局注册批准、在 有效期内的试 剂，其中 RPR、TRUST、 TP-ELISA 应有批批检合格证。