过氧化氢酶活力的测定

实验三过氧化氢酶活性的测定

一、实验目的：

了解过氧化氢酶的作用，掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；

二、实验原理:

过氧化氢酶是一类色素蛋白，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。

R（Fe＋2）2＋H2O2---R(Fe+3OH)2

R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R（Fe＋2）2+2H2O+O2

并合上式：H2O2 ----2H2O+O2

据此，可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，加入过量的KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定，根据N a2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。

三、实验材料、仪器和试剂：

1、实验材料：小白菜

2、仪器：恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶

3、试剂：

（1）0.05mol/L H2O2 （2）2mol/LH2SO4

（3）0.1mol/L Na2S2O3

（4）1%淀粉溶液（5）10%(NH4)6Mo7O24

（6）pH7.8的磷酸缓冲液（7）20% KI

（8）CaCO3

四、实验步骤：

（1）酶液提取：

称取2.5g白菜叶，加少量CaCO3，2mLpH7.8的缓冲液少量，研成匀浆，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容，静置10分钟，过滤。取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测（根据酶活高低而定）。

（2）酶促反应：

取锥形瓶4个，编好号各加入10ml酶液之后，立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL，终止酶活性，作空白对照。向另外两瓶各加H2O2 5mL，摇匀，在加入H2O2的那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL，终止酶活性。向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24，摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色，加入1mL1%淀粉指试剂，蓝色恰好消失，

记录消耗的Na 2S 2O 3的体积V 0，V ；

五、结果记录与数据处理：

被分解的H 2O 2量（mg ）=（空白滴定值-样品滴定值）×Na 2S 2O 3摩尔浓度×17 过氧化氢酶活性（mg.g -1.min -1）=

(min)

)()()(O H 22时间样品重测定取液量总体积量被分解的 g mg 六、 结果分析与问题讨论：

实验十还原型V C含量测定

一、实验目的

学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C的含量。

学会测定维生素C含量的原理和方法,进一步掌握滴定法的基本操作技术. 二、实验原理

Vc由于其结构中具有烯二醇的结构，所以它是一种强还原剂，易被弱氧化剂氧化脱氢而成氧化型抗坏血酸。Vc在酸性溶液中比中性溶液及碱性溶液中稳定，但易被热、光及某些金属离子破坏。

本实验是用碘液作氧化剂，淀粉为指示剂，当Vc全部被氧化后，过量一滴碘液与淀粉指示剂反应生成淡兰色络合物，即为终点。

三、实验材料、试剂及仪器

材料：西红柿。

试剂：

2％草酸溶液：称取20g草酸溶于蒸馏水中，溶解后稀释到1000mL，混匀；1％可溶性淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉用少量蒸馏水调成匀浆，倾入80 mL 的沸水中继续煮沸至透明，冷却后稀释至100 mL；

0．1mol/L碘液（随用随配）：称取6.5克碘和20克碘化钾于研钵中，加少量的蒸馏水研磨至完全溶解后稀释至500毫升混匀。贮存于棕色试剂瓶中；

1％草酸溶液：称取10g草酸溶于蒸馏水中，溶解后稀释到1000mL，混匀；

0.1mg/mLVc标准溶液：准确称取抗坏血酸10mg，溶于1％草酸溶液中稀释至100mL 贮存于棕色试剂瓶中冷藏（现用现配）。

仪器：万分之一电子天平；棕色酸式滴定管；三角瓶等。

四、实验操作步骤：

1、碘液的标定：吸取0.1mg/mLVc标准溶液10mL于100mL的锥形瓶中，加5滴可溶性淀粉，摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色，且30秒内不退色，即为终点。滴二个平行样。

2、样品的提取：准确称取10g左右的样品1份，

用少许2%草酸溶液研磨成匀浆，转入100mL容量瓶中，用2%的草酸溶液洗研钵3-4次，一并转入容量瓶中，最后用2%草酸溶液定容至100mL摇匀，放置10

分钟后过滤，滤液备用。

3、滴定：

空白滴定： 准确吸取10mL2%草酸溶液于100mL 的锥形瓶中，加5滴1%淀粉指示剂，摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色，且30秒内不退色，即为终点,滴二个平行样。

样品滴定： 准确吸取10mL 样品于100mL 的锥形瓶中，加5滴1%淀粉指示剂，摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色，且30秒内不退色，即为终点,滴二个平行样。

六、数据记录及计算

1、样品的重量（g ）：样品1：W 1 =

样品2：W 2 =

2、碘液的标定（mL ）： V 1 = V 2= V =

3、样品的滴定（mL ）：

4、空白的滴定（mL ）：

5、计算：

每毫升碘液相当于Vc 的毫克数K （mgVc/mLI 2）= V

101.0⨯ Vc 的含量（mg/100g 样品）=

10010W 100C )V V (⨯⨯⨯⨯-样品空白样品 六、结果分析与讨论