TSPOT的临床意义

T-s p o t的临床意义

结核病目前仍是全球公共卫生的主要问题。γ干扰素释放试验通过结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单个核细胞释放的γ干扰素，明确有无结核分枝杆菌感染，不会与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌感染产生交叉反应，特异度优于结核菌素皮试。

目前有两种商业化的试剂盒用于体外检测γ干扰素，一种是基于酶联免疫吸附试验法，检测全血γ干扰素浓度；另一种是基于酶联免疫斑点方法检测结核分枝杆菌特异性效应栽细胞斑点数，如结核感染栽细胞斑点实验（T-SPOT），其敏感度优于ILISA方法。

病原学检查是目前结核病诊断的金标准，但儿童痰标本不易获得，且常合并肺外结核，因此儿童痰细菌学检查阳性的肺结核患病率仅为12．3／10万。目前PPD试验作为潜伏结核感染诊断的主要工具，在成人结核病患者的检出率仅为0．39％。BCG接种后PPD常呈阳性反应，目前尚无可靠标准区别出自然结核杆菌感染与卡介苗接种后的结素反应；同时机体对PPD的反应程度受机体免疫系统状态的影响。以结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP一10抗原为基础的ELlS—POT试验方法敏感性高、特异性强。国外的大量研究数据表明，ELISPOT试验检测结核感染的特异性达95％以上，敏感性达75％～97％，尤其适用于免疫抑制人群、潜伏结核感染者的诊断。

北京儿童医院孙琳、赵顺英报道：

活动性结核病组中，21例患儿存在活动性结核病症状，其PPD试验阳性，随后行ELISPOT试验阳性19例，临床可以确诊结核病；另6例患儿PPD试验阴性，而ELISPOT试验阳性5例，其中4例患儿临床诊断血行播散性重症结核病，CD4水平低于正常，推测4例患儿PPD试验阴性可能由于机体免疫功能低下，机体迟发型免疫应答减弱所致；这一实验结果也进一步验证了ELISPOT方法受机体免疫功能状态影响小，尤其是年幼儿在免疫功能低下或重症患儿使用免疫抑制剂时仍具有较

理想的敏感性。该结果为临床诊断提供了有力证据，尤其是可以为免疫力降低的PPD阴性结核病重症患者的临床诊断提供诊断依据。

国外研究指出，ELISPOT试验受机体免疫状态影响较小，只有当外周血CIM数小于100细胞／L 时，其敏感性才会降低。但同时，在我们研究结果中也发现，在27例活动性结核病患儿中有3例为ELISPOT试验阴性，考虑为ELISPOT假阴性结果(取血量少造成细胞数量少、实验操作误差等)，此时应该结合临床资料综合分析做出临床诊断。

需要指出的是，病原学检测均阴性的27例活动性结核病患者中88．9％ELISPOT阳性，提示该实验对于肺外结核或者难以获取痰标本的儿童结核病患者具有较高的诊断价值，但仍需要进一步扩大样本量进行验证。

非结核性肺疾病组中，8例患儿PPD阳性临床考虑结核感染，进一步应用ELISPOT方法检测后，仅有1例患儿为阳性，ELISPOT阴性的7例患儿均有卡介苗接种史，且为中等强度反应。因此7例PPD 阳性患儿临床应首先考虑为卡介苗接种后的交叉反应，并定期随访排除潜伏结核感染。1例ELISPOT 阳性患儿应结合临床考虑结核感染的诊断。该试验结果与国外研究结果一致，证明了ELISPOT试验具有较高的特异性，是当前健康人群筛查潜伏结核的较有潜力的新方法。但由于ELIS—POT试验存在操作技术要求高，费用昂贵等缺点，限制了其在经济发展水平低的发展中国家的应用。

本研究认为，当l临床医师不能准确判断结核分枝杆菌自然感染和卡介苗接种的PPD阳性结果时，或当患儿PPD试验阴性，临床结合病史、影像学检查等综合分析不能除外结核病存在时，ELISPOT 试验可以作为一个重要的辅助诊断工具。因此，在临床实际应用中将ELISPOT和PPD相结合应是我国目前较为合理、经济的诊断流程。

其他情况也可以引起T-SPOT阳性：

（1）自身免疫疾病引起的机体免疫紊乱，导致T淋巴细胞中非特异性IFN-γ释放增多；

（2）重症脓毒症患者机体T淋巴细胞处于高度活化状态，导致T淋巴细胞中非特异性IFN-γ释放增多；

（3）胞内病毒或胞内细菌严重感染时，T淋巴细胞处于活化状态，也会导致T淋巴细胞中的非特异性INF-γ释放增多。

可能影响T-SPOT检测的各项影响因素

发现T-SPOT结果与性别、年龄、卡介苗接种史、结核病接触史、机体免疫状态和感染部位均无关，与孙琳等的报道符合，说明T-SPOT在儿童结核病及结核分枝杆菌潜伏感染的临床诊断中具有重要价值。

不同结核诊断方法的灵敏度：

（临床儿科杂志2009年第九期报道）

T-SPOT试验80.6%

PPD试验48.4%

结核抗体组15%