总糖和还原糖的测定

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酸水解法使没有还原性的双糖与多糖，彻 底水解成具有还原性的单糖，再进行测定，这 样就可以求样品中总糖的含量。
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测定方法－比色法
OHNO2
OH NH2
HOOC
+还 原 糖 HOOC
NO2 (DNS)
NO2
（ 3－ 氨 基 － 5－ 硝 基 水杨 酸 ）?
黄色
棕红色
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一起显色和比色 5.样品测定：每个样平行做三个试管，空白不做，
用标准曲线中的0号管。
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六、分光光度计的使用
1).电源打开，用波长设置键，设置所需的分析波长，预热20分 钟；
2).比色皿有光面和毛面，手接触毛面； 3).待测液倒至比色皿3/4高度，切忌太满！ 4).空白对照放在比色皿槽的第一槽位；测定时浓度由低到高； 5).将空白对照推（拉 )入光路中，按<100%T>键，此时显示器
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四、操作步骤
1.葡萄糖标准曲线制作 2wenku.baidu.com还原糖的提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖的水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量的测定
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五、注意事项
1. 实验安全：强酸，强碱 2. 总糖的水解及提取是两次定容，中和至微红色 3. 先把样品混匀后测定OD540值（封口膜） 4. 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，
实验三 总糖和还原糖的测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
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一、目 的
掌握还原糖和总糖的测定原理 掌握分光光度计的使用
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二、原 理
还原糖：指含有自由醛基或酮基的糖类
单糖: 不能被水解成更小分子的糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最重要的是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多个单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
2.比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法 测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果，这两 种方法各有何优点？
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值日生：每间教室第5、6组同学
职责：实验台面物品整理归位，水池边 的蓝色垃圾桶清理干净，教室里所用仪 器电源插销拔掉，关窗，最后把垃圾袋 丢到厕所外的垃圾桶里。
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重要通知
下周实验－－维生素C的定量测定
为开放、设计型实验，撰写小论文， 实验主题由各组自己拟定，可以以温度 为主题，也可以以浸泡时间为主题，等 等……请各组提前设计实验主题，自己 准备特需实验水果、蔬菜（颜色浅）， 实验室提供卷心菜和桔子。
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显示的“BLA—”直至显示“100.0”为止。 6).将被测样品推（拉）入光路，这时便可从显示器上得到被测
样品的透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
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移液器的使用手法，两档位
吸液
放液
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八、思考题
1.比色时为什么要设计空白管？
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
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三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖标准溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
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首先制作葡萄糖标准曲线，以标准葡萄 糖样品进行测定，以葡萄糖含量（mg）为 横坐标，OD540读数为纵坐标，绘制标准曲 线。
待测样品的OD540平均值在标准曲线上 查出相应的糖含量。
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朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析的基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光的吸收程度与 溶液及液层厚度间的定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。