《大学分析化学教学课件》第四节 吸光光度法的应用
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吸光光度法的应用
bc x
△Cx
（Cx > Cs）
△C
c x c x cs
适宜 高 浓度的测定
Analytical Chemistry 分析化学
示差法的误差
方法 常规法
示差法
∵ I0 > Is
Ax bc x lg Tx d dT c Ix cx Tx ln Tx Tx I0 d cx dT Ac bc x lg Tr cx Tr ln Tx Ix Tr d c x dcx Is 有 cx cx ∴ Tr > Tx
Analytical Chemistry 分析化学
在上述实验的基础上作数据处理 对特定 pH
pH < pKa-1
Ai HR [ HR] R [R ]
b = 1 cm
C = [HR]
AHR HR C
pH > pKa+1 C = [R-] 代入，得 整理，得
AR RC
四、弱酸弱碱离解常数的测定
HR HR = H+ + RR
A
HR
R
用光度法可以测定其离解常数
HR
R
[H ][R ] Ka [HR]
[HR] pK a pH lg [R ]
[ HR] [ HR] 用吸光值表征 lg ，相对于pH作图，可求得pKa 或 [R ] [R ]
A
曲线 1 2
3 4 5 6
pH 1.10, 1.38 2.65
3.06 3.48 3.98 5.53,6.80
1
2 3 4 5 6
Aa(HL)
Ab 6
5 4 3 2 1
吸光光度法PPT讲稿
吸光光度法课件
天津理工大学
吸光光度法概述
吸光光度法：基于物质对光的选择性吸收的分析方法
2020年7月4日12时5 分
天津理工大学
分类：
比色法：以比较溶液颜色深浅，从而确定被测定 组分含量的方法。比色法的准确度和精密度受 视力条件影响很大，一般相对误差约在5％～ 20％的范围。
分光光度法：使用分光光度计进行测量,相对误 差约在2％～5％ 可见分光光度法、紫外分光光度法、红外分光 光度法、荧光分光光度法
光的互补：蓝➢ 黄
天津理工大学
光子具有一定的能量Ｅ=h =h c/λ Ｅ为光的能量（尔格）； 为频率；λ为波长；h
为普朗克常数；c为光速。 仅当照射光的光子能量与被照射物质粒子的基态 与激发态能量之差相当时才能被吸收，不同的物 质微粒由于结构不同而具有不同的能量差，所以 物质对光的吸收具有选择性。
2020年7月4日12时5分
天津理工大学
白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还 可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。 能组成白光的两种颜色的光叫补色光。
物质的颜色与吸收光的关系： 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种 颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示 出一定的颜色。 物质所显示的颜色是吸收光的互补色。
E = E2- E1 =h
2020年7月4日12时5 分
天津理工大学
4 吸收曲线（吸收光谱）：每一种物质对不 同波长光的吸收程度是不同的，如果我们让各种 不同波长的光分别通过被测物质，分别测定物质 对不同波长光的吸收程度，以波长为横坐标，吸 收程度为纵坐标作图所得曲线。描述了物质对不 同波长光的吸收能力。
朗伯-比尔定律的适用条件 1) 单色光: ２) 稀溶液：
天津理工大学
吸光光度法概述
吸光光度法：基于物质对光的选择性吸收的分析方法
2020年7月4日12时5 分
天津理工大学
分类：
比色法：以比较溶液颜色深浅，从而确定被测定 组分含量的方法。比色法的准确度和精密度受 视力条件影响很大，一般相对误差约在5％～ 20％的范围。
分光光度法：使用分光光度计进行测量,相对误 差约在2％～5％ 可见分光光度法、紫外分光光度法、红外分光 光度法、荧光分光光度法
光的互补：蓝➢ 黄
天津理工大学
光子具有一定的能量Ｅ=h =h c/λ Ｅ为光的能量（尔格）； 为频率；λ为波长；h
为普朗克常数；c为光速。 仅当照射光的光子能量与被照射物质粒子的基态 与激发态能量之差相当时才能被吸收，不同的物 质微粒由于结构不同而具有不同的能量差，所以 物质对光的吸收具有选择性。
2020年7月4日12时5分
天津理工大学
白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还 可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。 能组成白光的两种颜色的光叫补色光。
物质的颜色与吸收光的关系： 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种 颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示 出一定的颜色。 物质所显示的颜色是吸收光的互补色。
E = E2- E1 =h
2020年7月4日12时5 分
天津理工大学
4 吸收曲线（吸收光谱）：每一种物质对不 同波长光的吸收程度是不同的，如果我们让各种 不同波长的光分别通过被测物质，分别测定物质 对不同波长光的吸收程度，以波长为横坐标，吸 收程度为纵坐标作图所得曲线。描述了物质对不 同波长光的吸收能力。
朗伯-比尔定律的适用条件 1) 单色光: ２) 稀溶液：
《吸光光度法》PPT课件 (2)
10-邻二氮菲铁的a及ε。
需要知两个公式 A= a b c 以及ε =Ma,
解：先求a，再求ε
已知 M Fe=55.85 a =A / bc = 0.19/2×5.0×10-4=190L·g-1·cm-1
ε =Ma =55.85×190=1.1×104L·mol-1·cm-1
2021/1/14
仪器分析：微量组分(<1%), Er : 1%～5% 灵敏度高 依据物理或物理化学性质, 需要特殊的仪器
例: 含Fe约0.05%的样品, 称0.2 g, 则m(Fe)≈0.1 mg
容量法 V(K2Cr2O7)≈0.02 mL, 测不准 光度法 结果0.048%～0.052%, 满足要求
2021/1/14
甲苯 (262nm)
A
230
250
270
l
2021/1/14
苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱
精选课件ppt
16
8-2 光的吸收定律
──朗伯-比耳（Larnbert-Beer）定律
吸光度与液层厚度 吸光度与物质浓度
A∝b
A lg
I0 I
k1
b
①
A∝ c
A lg I0 I
k2
c
②
2021/1/14
精选课件ppt
精选课件ppt
2
1. 光学分析法: 基于电磁辐射与物质的相互作用.
非光谱法 （折射法，浊度法，旋光法）
光
（不以光的波长为特征讯号）
学
分 光谱法 析
分子光谱法 UV/Vis,IR 原子光谱法 AAS,AES
法 （以光的吸收、发射等作用而建立的分析方法，通过
检测光谱的波长和强度来进行定性和定量的方法）
需要知两个公式 A= a b c 以及ε =Ma,
解：先求a，再求ε
已知 M Fe=55.85 a =A / bc = 0.19/2×5.0×10-4=190L·g-1·cm-1
ε =Ma =55.85×190=1.1×104L·mol-1·cm-1
2021/1/14
仪器分析：微量组分(<1%), Er : 1%～5% 灵敏度高 依据物理或物理化学性质, 需要特殊的仪器
例: 含Fe约0.05%的样品, 称0.2 g, 则m(Fe)≈0.1 mg
容量法 V(K2Cr2O7)≈0.02 mL, 测不准 光度法 结果0.048%～0.052%, 满足要求
2021/1/14
甲苯 (262nm)
A
230
250
270
l
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苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱
精选课件ppt
16
8-2 光的吸收定律
──朗伯-比耳（Larnbert-Beer）定律
吸光度与液层厚度 吸光度与物质浓度
A∝b
A lg
I0 I
k1
b
①
A∝ c
A lg I0 I
k2
c
②
2021/1/14
精选课件ppt
精选课件ppt
2
1. 光学分析法: 基于电磁辐射与物质的相互作用.
非光谱法 （折射法，浊度法，旋光法）
光
（不以光的波长为特征讯号）
学
分 光谱法 析
分子光谱法 UV/Vis,IR 原子光谱法 AAS,AES
法 （以光的吸收、发射等作用而建立的分析方法，通过
检测光谱的波长和强度来进行定性和定量的方法）
分析化学吸光光度法.ppt
observed value A1’
△λ band
λ
width
(2)介质不均匀 （heteromogeneous of medium)
2. 化学因素( chemical factors) (1)High concentration (2) Chemical reaction
四、光度误差
A lg T abC C lg T
Ax
Cx
C
(mmol / L )
三 偏离朗伯-比尔定律的原因
The reasonw
A
C
1 物理因素（ Physical factors ）
（1）非单色光(Nonmonochromatic light)
A
True value A1
物质的颜色与其吸收光波长的关系
二、物质对光的选择性吸收
1. 分子内部的三种运动及能级 外层电子运动----电子能级
原 子 振 动----振动能级 分子 转动----转动能级
2. Molecular energy level 分子能级
3. Energy level transition 分子能级跃迁
ab
dC 1 0.434 dT ab T
C 1 0.434 T ab T
C 0.434 T C lg T T
当T = 36.8%时（A = 0.434） ，误差最小， 为2.72% （假设△T = 1%） 吸光度读数范围一般控制在0.2 ~ 0.8。
§5 吸光光度法的应用
1 酸碱解离常数的测定
☆显色反应：配位反应、氧化-还原反应、 重氮化—偶联反应等。
1.显色反应的选择
①待测组分与显色剂应定量地转变成有色物。 ②显色产物组成恒定、有足够的稳定性。 ③显色产物有较大的吸光系数，ε＞10，000。 ④显色产物与显色剂有明显的颜色差别。 ⑤显色反应有较高的选择性。
武汉大学无机及分析化学ppt (吸光光度法)
选择性
2 测定浓度控制
控制浓度 吸光度A：0.2～0.8
减少测量误差
3 参比溶液选择
仪器调零 消除吸收池壁和溶液对入射光的反射 扣除干扰
试剂空白 试样空白 褪色空白
4 标准曲线制作
理论基础：朗伯-比尔定律
相同条件下 测定不同浓度标准溶液的吸光度A A～c 作图
A
0 .3 5
0 .3 0
0 .2 5
0 .2 0
0 .1 5
0 .1 0
0 .0 5
0 .0 0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
c o n c e n tra tio n
12.6 吸光光度法的误差
对朗伯-比尔定律的偏移 非单色光引起的偏移 物理化学因素：非均匀介质及化学反应 吸光度测量的误差
显M 色+ n反L应= 体M系Ln中显的色副反反应应影响 *其它离子可能与显色剂反应：M´ + nL = M´Ln,消耗显色剂； *L受酸效应影响，有L-、HL+等形态存在；被测离子有络合效应
e 表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时溶液的吸光度。单位：
(L•mol-1 •cm-1)
桑德尔(sandell)灵敏度： S 当仪器检测吸光度为0.001时，单位截面积光程内所能检测到
的吸光物质的最低含量。 单位：mg/cm2
S=M/e
推导：根据定义0.001＝εbc 故 bc ＝0.001/ε （1） c为浓度，单位为mol/1000cm3,b为cm, bc表示单位截面积光程内的摩尔数，即 mol/1000cm2，如果bc乘以被测物质的分子量M,则得单位截面积光程内被测物质的量， 即桑德尔灵敏度S。 S=（bc/1000）×M×106 = bcM × 103（μg·cm-2），将（1）的bc＝0.001/ε代入，S＝
吸光光度法新改PPT课件
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本章目录
13 总目录
四川农业大学
无机及分析化学
15.1.4 吸光光度法的特点：
1、灵敏度高，下限为10-5～10-6 mol·L-1。适 于微量分析。
2、准确度较高，相对误差为2% ～ 5%。 3、操作快速简便，易于掌握。 4、应用广泛。
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14 总目录
四川农业大学
无机及分析化学
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19 总目录
四川农业大学
无机及分析化学
(2)同一吸光物质在不同波长下的ε值是不同 的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数 ，常以εmax表示，表明该吸收物质最大限度 的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可
能达到的最大灵敏度。
(3)εmax越大表明该物质的吸光能力越强，用 光度法测定该物质的灵敏度越高。
将不同波长的光透过某一固定的溶液，测量 不同波长下溶液对光的吸光度，作图，图15-2
A 1.6
D
A、B、C、D代表不 同浓度下的吸收曲线。
1.2
C 0.8
B
0.4
A
400 480 560 640 720 nm KMnO4 溶液的吸收曲线
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11 总目录
四川农业大学
无机及分析化学
吸收曲线的讨论
度之和。或溶液的吸光度应等于溶液中各
组分的吸光度之和。(组分间没有干扰)
A总 = ∑ Ai =ε1b1c1 + ε2b2c2 + …… εnbncn
A4 A3 A2 A1
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25 总目录
四川农业大学
第章：吸光光度法PPT课件
)弯曲愈严重。故朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。
(4) 为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色 器。此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸 收曲线较平坦处。
.
29
(2) 化学性因素
• 朗—比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互 作用；假定只有在稀溶液(c<10-2mol/L)时才基本符合。
当溶液浓度c >10 －2 mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合
等相互作用，直接影响了对光的吸收。 • 故：朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。
溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等 化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 • 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡：
CrO42- ＋2H＋ = Cr2O72- ＋H2O 溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不相 同。故此时溶液pH 对测定有重要影响。
λmax处吸光度A 的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。
（5）在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸
收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。
.
15
定性分析与定量分析的基础
定性分析基础
物质对光的选择 吸收
定量分析基础 在一定的实验条 件下，物质对光 的吸收与物质的 浓度成正比。
白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光
单色光：单波长的光(由具有相同能量的光子组成)
可见光区：400-750 nm
紫外光区：近紫外区200 - 400 nm
远紫外区10 - 200. nm （真空紫外区）
4
与物质作用
电场向量 Y
Z 磁场向量
.
X 传播方向
(4) 为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色 器。此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸 收曲线较平坦处。
.
29
(2) 化学性因素
• 朗—比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互 作用；假定只有在稀溶液(c<10-2mol/L)时才基本符合。
当溶液浓度c >10 －2 mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合
等相互作用，直接影响了对光的吸收。 • 故：朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。
溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等 化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 • 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡：
CrO42- ＋2H＋ = Cr2O72- ＋H2O 溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不相 同。故此时溶液pH 对测定有重要影响。
λmax处吸光度A 的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。
（5）在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸
收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。
.
15
定性分析与定量分析的基础
定性分析基础
物质对光的选择 吸收
定量分析基础 在一定的实验条 件下，物质对光 的吸收与物质的 浓度成正比。
白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光
单色光：单波长的光(由具有相同能量的光子组成)
可见光区：400-750 nm
紫外光区：近紫外区200 - 400 nm
远紫外区10 - 200. nm （真空紫外区）
4
与物质作用
电场向量 Y
Z 磁场向量
.
X 传播方向
分析化学精品课件之吸光光度法完整ppt
光系数，单位：L/(mol·cm)，它反映吸光物质 对光的吸收能力，表示吸光光度法分析该物质 的灵敏度，表示ε时注明入射波长。
第二节 Lambert-beer定律
在光度分析中，为提高分析灵敏度，在 光吸收定律的基础：光的吸收与溶液的浓度和光路的长短密切相关
方法优点：仪器简单，操作简便； 2显色剂用量：见图9-11,通过实验来确定。
6干扰物质的影响及消除方法： 影响：a干扰物质本身有色或与显色剂形成有 色络合物，在测量条件下也有吸收；b在显色 条件下，干扰物质析出沉淀或使溶液混浊，以 致无法进行光度测量；c与待测离子形成更稳 定的络合物，使显色反应不能进行。 消除办法：a控制酸度；b加入适当掩蔽剂；选 择适当的测量波长；d选用适当的参比溶液。
已消除干扰的情况下，应选择ε值大的 4温度：大多在室温进行，但有些显色反应须加热和一定时间完成。
棱镜（折射原理）和光栅（衍射原理）。
有色化合物进行测定，并以最大吸收波 五、标准曲线的制作：A-c图，A值最好落在0.
4温度：大多在室温进行，但有些显色反应须加热和一定时间完成。 1当试液和显色剂均无色，以蒸馏水作参比；
第四节 光度分析的步骤
4上述两者都有颜色，则可取两份试液。一份 加入适当掩蔽剂将待测离子掩蔽不与显色剂作 用，然后两份试液都加入显色剂及其它试剂将 加入掩蔽剂的那份作参比，可消除试液中其它 有色组分的干扰。
第二节 Lambert-beer定律
光吸收定律的基础：光的吸收与溶液的浓度和 光路的长短密切相关
吸光度：A=Kbc (即L-B定律:b为溶液厚度) 透光率：T=I/I0=透射光强度/入射光强度 A与T的关系：A=log I/I0 =log1/T=-logT=Kbc
K:吸光系数，随b,c单位不同而不同，通常b： cm, C:mol/L 表示时，以ε表示，称为摩尔吸
第二节 Lambert-beer定律
在光度分析中，为提高分析灵敏度，在 光吸收定律的基础：光的吸收与溶液的浓度和光路的长短密切相关
方法优点：仪器简单，操作简便； 2显色剂用量：见图9-11,通过实验来确定。
6干扰物质的影响及消除方法： 影响：a干扰物质本身有色或与显色剂形成有 色络合物，在测量条件下也有吸收；b在显色 条件下，干扰物质析出沉淀或使溶液混浊，以 致无法进行光度测量；c与待测离子形成更稳 定的络合物，使显色反应不能进行。 消除办法：a控制酸度；b加入适当掩蔽剂；选 择适当的测量波长；d选用适当的参比溶液。
已消除干扰的情况下，应选择ε值大的 4温度：大多在室温进行，但有些显色反应须加热和一定时间完成。
棱镜（折射原理）和光栅（衍射原理）。
有色化合物进行测定，并以最大吸收波 五、标准曲线的制作：A-c图，A值最好落在0.
4温度：大多在室温进行，但有些显色反应须加热和一定时间完成。 1当试液和显色剂均无色，以蒸馏水作参比；
第四节 光度分析的步骤
4上述两者都有颜色，则可取两份试液。一份 加入适当掩蔽剂将待测离子掩蔽不与显色剂作 用，然后两份试液都加入显色剂及其它试剂将 加入掩蔽剂的那份作参比，可消除试液中其它 有色组分的干扰。
第二节 Lambert-beer定律
光吸收定律的基础：光的吸收与溶液的浓度和 光路的长短密切相关
吸光度：A=Kbc (即L-B定律:b为溶液厚度) 透光率：T=I/I0=透射光强度/入射光强度 A与T的关系：A=log I/I0 =log1/T=-logT=Kbc
K:吸光系数，随b,c单位不同而不同，通常b： cm, C:mol/L 表示时，以ε表示，称为摩尔吸
分析化学—— 吸光光度法
Ι0 Ιt
λ1 λ2 λ3 λ4 λ5
A1 A2 A3 A4 A5
17
KMnO4吸收曲线（吸收525nm的绿光而呈紫色）
吸收曲线的讨论：
（1）同一种物质对不同 波长光的吸光度不同。吸 光度最大处对应的波长称 为最大吸收波长λmax （2）对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则 不同。吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为 物质定性分析的依据之一。 （3）同一种物质、不同浓度时，其吸收曲线形状相 似、λmax不变；吸光度与浓度成正比。定量分析
例12–3 有一浓度为1.0μg • mL–1的Fe2+溶液，以邻 二氮菲显色后，用分光光度计测定，比色皿厚度为 2.0cm，在波长510nm处测得吸光度A=0.380，计算 该显色反应的吸光系数a和摩尔吸光系数ε。
(2) Fe2+的浓度用mol • L–1表示时， 1.0 10 3 g L-1 c 1.8mol L1 -1 55.85 g mol
（4）不同浓度的同一种 物质，在λmax处吸光度 随浓度变化的幅度最大， 所以测定最灵敏。此特 性可作为物质定量分析 的依据。
吸收曲线是定量分析 中选择入射光波长的重 要依据。
§12-2
光吸收的基本定律
1.朗伯—比耳定律***
当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、 液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一 部分被器皿的表面反射则它们之间的关系为：
溶液的颜色由透射光的波长所决定。 透射光与吸收光为互补色光。 如CuSO4溶液因吸收了白光中的黄色 光的互补：蓝 黄 光而呈现蓝色
3. 吸收曲线
用不同波长的单色光照射某一物质测定吸光度 A(物质对光的吸收程度)，以波长为横坐标，以吸光度 为纵坐标，绘制吸收曲线，可描述物质对不同波长光 的吸收能力。
λ1 λ2 λ3 λ4 λ5
A1 A2 A3 A4 A5
17
KMnO4吸收曲线（吸收525nm的绿光而呈紫色）
吸收曲线的讨论：
（1）同一种物质对不同 波长光的吸光度不同。吸 光度最大处对应的波长称 为最大吸收波长λmax （2）对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则 不同。吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为 物质定性分析的依据之一。 （3）同一种物质、不同浓度时，其吸收曲线形状相 似、λmax不变；吸光度与浓度成正比。定量分析
例12–3 有一浓度为1.0μg • mL–1的Fe2+溶液，以邻 二氮菲显色后，用分光光度计测定，比色皿厚度为 2.0cm，在波长510nm处测得吸光度A=0.380，计算 该显色反应的吸光系数a和摩尔吸光系数ε。
(2) Fe2+的浓度用mol • L–1表示时， 1.0 10 3 g L-1 c 1.8mol L1 -1 55.85 g mol
（4）不同浓度的同一种 物质，在λmax处吸光度 随浓度变化的幅度最大， 所以测定最灵敏。此特 性可作为物质定量分析 的依据。
吸收曲线是定量分析 中选择入射光波长的重 要依据。
§12-2
光吸收的基本定律
1.朗伯—比耳定律***
当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、 液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一 部分被器皿的表面反射则它们之间的关系为：
溶液的颜色由透射光的波长所决定。 透射光与吸收光为互补色光。 如CuSO4溶液因吸收了白光中的黄色 光的互补：蓝 黄 光而呈现蓝色
3. 吸收曲线
用不同波长的单色光照射某一物质测定吸光度 A(物质对光的吸收程度)，以波长为横坐标，以吸光度 为纵坐标，绘制吸收曲线，可描述物质对不同波长光 的吸收能力。
【分析化学】吸光光度法共74页
6宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
【分析化学】吸光光度法
21、没有人陪你走一辈子，所以你要 适应孤 独，没 有人会 帮你一 辈子， 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候，留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运，首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
吸光光度法PPT课件
光谱示意
完全吸收
复合光
表观现象示意
完全透过
吸收黄色光
光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征
的W颜hy色? ?。? 物质呈现的颜色与光有着密切的关系，物质呈 现何种颜色，与光的组成和物质本身的结构有关。
a
66
物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸 收基础。
物质选择性地吸收白光中某种颜色的光，物质就会呈现其互补色光的颜色。
a
19 19
二、 光电比色法 A
1.方法：（滤光片获取单色光）
C
通过滤光片得一窄 范围的光(几十nm)
光电比色计结构示意图
2.特点：准确度较高（消除人眼的主观因素）
选择性较好（滤光片、参比液可消除干扰）
a
20
三、分光光度法
1.方法：同上。不同点：光栅或棱镜获取单色光 2.特点： 单色光纯度高（可精选某一波长，准）
✓选择测，可避开干扰的吸收 ✓增加显色剂用量，将干扰灌饱
✓分离
a
28
二、仪器测量误差
偏离A=bC
光度分析法的误差除了来源于朗伯－比耳定律的偏
离以外，仪器测量不准确也是导致误差的原因。
任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来
源于光源不稳定、实验条件的偶然变动、读数不准确等
。
P286页图10－5：
桑德尔灵敏度：当光度仪器的检测极限为A＝0.001
时，单位截面积光程内所能检出的吸光物质的最低质量
。ug/cm2
SM
a
13 13
例 ： 用 双 硫 腙 比 色 法 测 定 镉 ， 已 知 含 Cd2+浓 度 为 140μ g/L，
比 色 皿 厚 度 为 2cm， 在 λ = 520 nm处 测 得 透 光 率 为 60.3%，
完全吸收
复合光
表观现象示意
完全透过
吸收黄色光
光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征
的W颜hy色? ?。? 物质呈现的颜色与光有着密切的关系，物质呈 现何种颜色，与光的组成和物质本身的结构有关。
a
66
物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸 收基础。
物质选择性地吸收白光中某种颜色的光，物质就会呈现其互补色光的颜色。
a
19 19
二、 光电比色法 A
1.方法：（滤光片获取单色光）
C
通过滤光片得一窄 范围的光(几十nm)
光电比色计结构示意图
2.特点：准确度较高（消除人眼的主观因素）
选择性较好（滤光片、参比液可消除干扰）
a
20
三、分光光度法
1.方法：同上。不同点：光栅或棱镜获取单色光 2.特点： 单色光纯度高（可精选某一波长，准）
✓选择测，可避开干扰的吸收 ✓增加显色剂用量，将干扰灌饱
✓分离
a
28
二、仪器测量误差
偏离A=bC
光度分析法的误差除了来源于朗伯－比耳定律的偏
离以外，仪器测量不准确也是导致误差的原因。
任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来
源于光源不稳定、实验条件的偶然变动、读数不准确等
。
P286页图10－5：
桑德尔灵敏度：当光度仪器的检测极限为A＝0.001
时，单位截面积光程内所能检出的吸光物质的最低质量
。ug/cm2
SM
a
13 13
例 ： 用 双 硫 腙 比 色 法 测 定 镉 ， 已 知 含 Cd2+浓 度 为 140μ g/L，
比 色 皿 厚 度 为 2cm， 在 λ = 520 nm处 测 得 透 光 率 为 60.3%，
吸光光度法ppt课件
方法分类和比较
测定下限 相对误差
比色分析法
10-5 ~ 10-6 mol·L-1 5% ~ 10%
分光光度法
10-5 ~ 10-8 mol·L-1 2% ~ 5%
适用于分析半微量和微量的物质 5
一. 概述 方法的评价
快速、简便 显色
比色
灵敏度高：浓度下限达10-5~10-8 mol·L-1
准确度高：相对误差通常为2~5％，
稀溶液 入射光为单色光
20
二 . 吸光光度法的基本原理
4. 吸光度测定方法
步骤
(1) 配制一组浓度系
仪器测量
列的标准溶液（ci）
一组相应的吸 光度值（Ai）
制图（ci 为横坐标，
A
Ai 为纵坐标）
工作曲线
·
Ax
·· ·
仪器测量
(2) 配制样品
Ax
相同条件
·
查图得出cx
cx
c
21
二 . 吸光光度法的基本原理
(2) 选择性好
(3) 有色物组成恒定，化学性质稳定
(4) 显色剂在测定波长处无明显吸收
对比度=λmax有色物 -λmax显色剂＞60nm
42
四、显色反应和显色条件的选择
3.影响显色反应的因素
M +R
MR
(1) 显色剂用量 根据吸光度A与显色剂浓度cR的关系来确定
cR选择——引起A变化最小处的cR（即曲线平坦处43 ）
吸光光度法
刘海燕
一. 概述
1. 方法原理
2. 方法分类和比较 3. 方法评价
二.吸光光度法原理
1. 物质对光的选择性吸收
2. 光的吸收定律
(1) Lambert-Beer定律
分析化学第九章吸光光度法
精选课件ppt
6
✓ 分子、原子、离子具有不连续的量子化能级，仅 能吸收当照射光子的能量hv与被照射粒子的 E激 － E基 ＝（hv）n因为不同物质微粒的结构不同 ，共有不同的量子化能级，其能量差也不相同,因 此对光的吸收具有选择性。若固定某一溶液的浓 度 C 和液层厚度 b ，测量不同 λ下的 A ，以 吸光度 A 对吸收波长λ 作图，就得到－吸收曲
c.光栅：在玻璃片或金属片上刻划均匀的线，1200 条/mm, 衍射、干涉原理。
（3）吸收池: 玻璃:可见, 石英:紫外、可见
（4）检测器:光电转换器件（光电管、光电倍增光，光电二极管 阵列）。利用光电效应，光照产生光电流，测定光电流的大小 。
（5）显示器: 检流计：72型。数字显示：722型。数字打印：UV-
入量要严格控制，可通过实验确定。
3.温度：通过实验确定温度范围，通常在室温下
进行。
4.溶剂：一般螯合物在有机溶剂中溶解度大，提高 显色反应的灵敏度。如Cu(SCN)42－在水中大
部分离 解，几乎无色；在丙酮中呈蓝色。
精选课件ppt
16
5.显色时间：通过实验找出适宜的显色时间。 6.干扰组分：共存组分与显色剂生成有色络合物，
精选课件ppt
14
9.3.2显色条件的选择
1、 溶液的酸度：M＋L＝ML（显色剂L存在酸效 应L（H））
a. 影响显色剂的溶度
b. 影响M的存在状态
c. 影响ML的组成和稳定性，如Fe3＋－磺基 水杨酸pH组成颜色
2-3 1：1 紫红
4-8 1：2 棕褐
8-10 1：3 黄色
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15
2.显色剂用量:显色剂过多有时会引起副反应，加
精选课件ppt
《吸光光度法教案》课件
《吸光光度法教案》PPT课件第一章：引言1.1 吸光光度法的定义1.2 吸光光度法在分析化学中的应用1.3 吸光光度法的原理1.4 吸光光度法的仪器与操作步骤第二章：吸光光度法的原理2.1 光的吸收与发射2.2 朗伯-比尔定律2.3 摩尔吸光系数2.4 吸光度的计算与单位第三章：分光光度计的结构与操作3.1 分光光度计的组成部分3.2 分光光度计的操作步骤3.3 光谱仪的使用与维护3.4 波长的选择与调整第四章：标准曲线的制备与分析4.1 标准曲线的制备方法4.2 标准曲线的绘制与分析4.3 样品浓度的计算与误差分析4.4 实际案例分析：药物含量测定第五章：吸光光度法的应用5.1 环境监测中的应用5.2 生物化学中的应用5.3 食品分析中的应用5.4 临床诊断中的应用第六章：吸光光度法的准确度与精确度6.1 准确度的评估6.2 精确度的评估6.3 干扰因素及其影响6.4 提高吸光光度法准确度的方法第七章：溶液的制备与处理7.1 溶液的配制方法7.2 溶液的浓度与体积的计算7.3 样品的前处理与分离7.4 样品分析中的常见问题与解决方法第八章：光散射与吸光光度法8.1 光散射现象的介绍8.2 光散射对吸光光度法的影响8.3 光散射的测定与分析8.4 光散射在吸光光度法中的应用案例第九章：吸光光度法在药物分析中的应用9.1 药物分析中的重要性9.2 药物的紫外吸收特性9.3 药物含量测定的方法与步骤9.4 实际案例分析：药物制剂中主成分的测定第十章：现代吸光光度法技术进展10.1 光纤吸光光度法10.2 微透析吸光光度法10.3 激光吸光光度法10.4 在线监测与自动化分析技术第十一章：吸光光度法在有机合成中的应用11.1 有机化合物的紫外吸收特性11.2 有机合成中光催化反应的监控11.3 有机物含量的测定与分析11.4 实际案例分析：有机合成产物的纯度测定第十二章：吸光光度法在材料科学中的应用12.1 材料科学中的光吸收现象12.2 吸光光度法在材料合成与表征中的应用12.3 材料性能与吸光性质的关系研究12.4 实际案例分析：纳米材料粒径的测定第十三章：吸光光度法在生命科学中的应用13.1 生物大分子的紫外吸收特性13.2 蛋白质浓度与纯度的测定13.3 核酸的定量分析与监测13.4 实际案例分析：细胞培养中的营养物质监测第十四章：吸光光度法在环境监测中的应用14.1 环境污染物的紫外吸收特性14.2 水质分析与监测14.3 大气污染物分析与监测14.4 实际案例分析：水体中有机物的总量测定第十五章：实验与练习15.1 吸光光度法的基本实验操作15.2 标准曲线与样品分析的实验操作15.3 常见干扰因素的实验探究15.4 综合实验练习：饮料中维生素C含量的测定重点和难点解析重点：1. 吸光光度法的定义、原理及其在分析化学中的应用。
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bc a
a
2
bc bБайду номын сангаас
b
2
λ2
λ
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•3.差示分光光度法
用浓度比试样小的已知浓度为 cs 的标准溶液 作为参比溶液，调吸光度为零。即
As bcs 0
Ax bcx
A A Ax As bcx cs bc
cx cs c
A
c
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二、配合物组成及其稳定常数的测定
1. 摩尔比法： A′
M + nR
MRn
A
A' A
A'
K稳
K稳
MRn M Rn
1 c cncn
1 nn n1cn
n
1
A A
A
nn
A A
A
n1
cn
cR/cM
上一页 下一页
适用范围 摩尔比法适用于M和R均不干扰
MR吸光度的测定，配合物的离解度 小，配合比高的配合物组成和稳定常 数的测定。
上一页 下一页
2.等摩尔连续变化法 A′
以 A 为纵坐标，以
A
cM 为横坐标，作图。 cM cR
A' A
A'
0
cM cM cR
1/2
1/3
1/4
1/5
1/6
1/7
n 12 3456
0.5
1.0
cM
cM cR
此法适用于离解度小、配合比低的配合物组成的测定。
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练习题
甲基红的酸式和碱式的最大吸收波长分别为528nm 和400nm。某含1.22×10－5mol·L-1的甲基红的0.1mol·L1HCl溶液在400nm波长时的吸光度A=0.077，在528nm 时的吸光度A=1.738。另一溶液含甲基红的总浓度为 1.09×10－5mol·L-1及0.1mol·L-1NaHCO3，在400nm和 528nm时的吸光度分别为0.753和0.000。第三个含甲基 红的溶液pH值为4.18，在400nm和528nm时的吸光度分 别为0.166和1.401。设全部用同一吸收池测量，求甲基 红的酸式解离常数及甲基红在第三个溶液中的总浓度。
第四节 吸光光度法的应用
• 一、定量分析 • 二、配合物组成及其稳定常数的测定 • 三、酸碱电离常数的测定
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一、定量分析
•1.单组分化合物分析
•2.混合物中多组分的测定
a
b
原理：吸光度加合性原理 A
A A A a
b
1
1
1
A A A a
b
2
2
2
λ1
A1
bc a
a
1
bc b
b
1
A2