液相色谱-基础
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液相色谱分离机理
高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微粒 作固定相，待测组分在柱内的两相之间进行高速分配 和高效分离的柱液体色谱方法。
样品溶液中的各组分，因其物理化学性质的微小 差异，当其随流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之 间产生不同的相互作用力，从而导致柱上迁移速率的 微小差异。
随着流动相的连续推移，这种微小的差异被不断 扩大，直至柱内出现明显不同的迁移距离，使最终达 到组分完全分离。
• 峰底 － Peak Base
• 峰的起点与终点之间连接的直线
• 峰高 － Peak Height
• 峰最大值到峰底的距离
• 峰宽 － Peak Width
• 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
• 半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height
• 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之 间的距离
• 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
• 死体积，V0 － Dead volume
• 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的流动相体积
• 保留体积，VR － Retention volume
• 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
液相色谱实验所需的基本参数
• 液相色谱实验所需的基本参数
• 由各种因素所引起的基线波动
• 谱带扩展 － Band Broadening
• 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱 内移动过程中谱带宽度增加的现象
液相色谱图相关术语
• 死时间，t0 － Dead time
• 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的时间
• 保留时间，tR － Retention time
Rs与N、K′及 的关系图示
注意：保留时间和峰宽的变化
再见
W
s
方法
Wtan
16 切线法
Wh
5.54 半峰高
W3s
9
3s
W4s
16
4s
W5s
25
5s
理论板数(n)计算公式
或（通常用）： 若应用调整保留时间 tR′计算理论塔板数，
所得值称为有效理论塔板数( n有效或 neff )
分离度(R）计算方法示意图
高效液相谱分离的基本方程式
影响分离度的因素很多，但可 慨刮为三个基本项,(a)柱效项。(b) 柱选择性项(c)柱容量因子项。即 ：
什么是液相色谱
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱 纸色谱 薄层色谱
气相色谱：流动相是气相 液相色谱：流动相是液相
高效液相色谱 HPLC
什么是高效液相色谱
• High Performance Liquid Chromatography
• 高效液相色谱法，简称：HPLC
• 是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高 效能分离手段：
基线 ↓
← 色谱峰 峰宽
保留时间（分）
峰高
色谱峰或色谱谱带
流出曲线上的突起部分称为色谱峰 正常色谱峰为对称形正态分布曲线 不对称色谱峰有两种：前延峰和拖尾峰
色谱流出曲线图及相关参数
样品进入色谱柱，经流动相冲洗，由检 测器测得的信号-洗脱时间曲线，即色谱图。
检测限（敏感度）
常用基线噪音的三倍表示： S/N=3
• 鬼峰 － Ghost Peak
• 并非由试样所产生的峰；亦称假峰
•液相色谱图相关术语
• 基线 － Baseline
• 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的 曲线
• 基线漂移 － Baseline Drift
• 基线随时间定向的缓慢变化
• 基线噪声；N － Baseline Noise
• 流动相：种类及配比，等度或梯度 • 固定相：色谱柱类型及内径、粒径、长短 • 流动相流速 • 检测器参数：紫外检测波长或其他检测器相应参数 • 柱温度 • 进样量
• 以上参数即构成一个具体的HPLC方法， • 亦称色谱条件
色谱图：HPLC图形结果
（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的 曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。
式中： N 为噪音（mV或mAU) S 为信号(mV或mAU)
对称因子计算示意图
色谱峰的对称性—对称因子： a. 拖尾因子 b. 不对称因子
峰对称因子计算公式
对称因子(fs)：
式中： fs=0.95~1.05为正常峰 fs＜0.95为前延峰 fs＞1.05为拖尾峰
色谱柱的柱效 N
理论塔板数计算公式：
• 高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
• 广泛应用于各个领域：
• 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
• 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
检测器
AB C
DE
G
F
泵输液 进样
分离来自百度文库
检测
记录仪和积分仪-色谱工作站
HPLC的仪器配置
数据处理系统
溶剂 流动相 色谱泵（主机） 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器
高效液相色谱基本概念
＊ 色谱峰或色谱谱带 ＊ 基线噪音 ＊ 基线漂移 ＊ 检测限（敏感度） ＊ 色谱峰对称性 ＊ 色谱定性参数 ＊ 色谱柱效能参数
液相色谱图相关术语
• 色谱峰 － Peak
• 色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线
液相色谱图相关术语
• 峰面积 － Peak Area
• 峰与峰底之间的面积
• 标准偏差；σ － Standard Error
• 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
• 拖尾峰 － Tailing Peak
• 后沿较前沿平缓的不对称峰
• 前伸峰 － Leading Peak
• 前沿较后沿平缓的不对称峰
高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微粒 作固定相，待测组分在柱内的两相之间进行高速分配 和高效分离的柱液体色谱方法。
样品溶液中的各组分，因其物理化学性质的微小 差异，当其随流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之 间产生不同的相互作用力，从而导致柱上迁移速率的 微小差异。
随着流动相的连续推移，这种微小的差异被不断 扩大，直至柱内出现明显不同的迁移距离，使最终达 到组分完全分离。
• 峰底 － Peak Base
• 峰的起点与终点之间连接的直线
• 峰高 － Peak Height
• 峰最大值到峰底的距离
• 峰宽 － Peak Width
• 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
• 半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height
• 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之 间的距离
• 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
• 死体积，V0 － Dead volume
• 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的流动相体积
• 保留体积，VR － Retention volume
• 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
液相色谱实验所需的基本参数
• 液相色谱实验所需的基本参数
• 由各种因素所引起的基线波动
• 谱带扩展 － Band Broadening
• 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱 内移动过程中谱带宽度增加的现象
液相色谱图相关术语
• 死时间，t0 － Dead time
• 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的时间
• 保留时间，tR － Retention time
Rs与N、K′及 的关系图示
注意：保留时间和峰宽的变化
再见
W
s
方法
Wtan
16 切线法
Wh
5.54 半峰高
W3s
9
3s
W4s
16
4s
W5s
25
5s
理论板数(n)计算公式
或（通常用）： 若应用调整保留时间 tR′计算理论塔板数，
所得值称为有效理论塔板数( n有效或 neff )
分离度(R）计算方法示意图
高效液相谱分离的基本方程式
影响分离度的因素很多，但可 慨刮为三个基本项,(a)柱效项。(b) 柱选择性项(c)柱容量因子项。即 ：
什么是液相色谱
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱 纸色谱 薄层色谱
气相色谱：流动相是气相 液相色谱：流动相是液相
高效液相色谱 HPLC
什么是高效液相色谱
• High Performance Liquid Chromatography
• 高效液相色谱法，简称：HPLC
• 是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高 效能分离手段：
基线 ↓
← 色谱峰 峰宽
保留时间（分）
峰高
色谱峰或色谱谱带
流出曲线上的突起部分称为色谱峰 正常色谱峰为对称形正态分布曲线 不对称色谱峰有两种：前延峰和拖尾峰
色谱流出曲线图及相关参数
样品进入色谱柱，经流动相冲洗，由检 测器测得的信号-洗脱时间曲线，即色谱图。
检测限（敏感度）
常用基线噪音的三倍表示： S/N=3
• 鬼峰 － Ghost Peak
• 并非由试样所产生的峰；亦称假峰
•液相色谱图相关术语
• 基线 － Baseline
• 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的 曲线
• 基线漂移 － Baseline Drift
• 基线随时间定向的缓慢变化
• 基线噪声；N － Baseline Noise
• 流动相：种类及配比，等度或梯度 • 固定相：色谱柱类型及内径、粒径、长短 • 流动相流速 • 检测器参数：紫外检测波长或其他检测器相应参数 • 柱温度 • 进样量
• 以上参数即构成一个具体的HPLC方法， • 亦称色谱条件
色谱图：HPLC图形结果
（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的 曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。
式中： N 为噪音（mV或mAU) S 为信号(mV或mAU)
对称因子计算示意图
色谱峰的对称性—对称因子： a. 拖尾因子 b. 不对称因子
峰对称因子计算公式
对称因子(fs)：
式中： fs=0.95~1.05为正常峰 fs＜0.95为前延峰 fs＞1.05为拖尾峰
色谱柱的柱效 N
理论塔板数计算公式：
• 高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
• 广泛应用于各个领域：
• 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
• 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
检测器
AB C
DE
G
F
泵输液 进样
分离来自百度文库
检测
记录仪和积分仪-色谱工作站
HPLC的仪器配置
数据处理系统
溶剂 流动相 色谱泵（主机） 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器
高效液相色谱基本概念
＊ 色谱峰或色谱谱带 ＊ 基线噪音 ＊ 基线漂移 ＊ 检测限（敏感度） ＊ 色谱峰对称性 ＊ 色谱定性参数 ＊ 色谱柱效能参数
液相色谱图相关术语
• 色谱峰 － Peak
• 色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线
液相色谱图相关术语
• 峰面积 － Peak Area
• 峰与峰底之间的面积
• 标准偏差；σ － Standard Error
• 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
• 拖尾峰 － Tailing Peak
• 后沿较前沿平缓的不对称峰
• 前伸峰 － Leading Peak
• 前沿较后沿平缓的不对称峰