石斛中总生物碱和多糖的含量测定

样品重( mg)
10102 10130
A
01 215 01 157 01 137
C( Lg#ml- 1) 141 85 111 66 91463
f
11289 11633
21215 精密度实验 精称葡萄糖标准溶液, 连续进样 5 次, RSD 为
119% 。 21216 回收率实验
取已知含量的金钗石斛 01120g, 精密加入石斛 多糖 27mg, 按样品 测定方法测定, 计算, 结 果见 表 4。
金钗 石 斛 ( D. nobile ) 和 铁 皮 石 斛 ( D. candium) 是 5中 国药 典6 收 载的 两个 石斛 品种, 也是研究最多的品种。本文以酸性染料比色法测定
两者的总生物碱含量, 以苯酚- 硫酸法测定两者的 多糖含量, 并比较两者所含化学成分的差异, 为石 斛的质量评定提供依据。
6417278 1120
4 讨论
411 本文 采用超 声振 荡 20min 提 取, 比 较省时,
省力, 且提取结果与药典方法一致。 412 采用高效液相色谱法测定六味木香散中荜茇 的含量, 其结果的精密度, 重现性较好。结果准确 可靠。
参考文献
1 中国药典 1 一部, 2000: 414 2 中国药典 1 一部, 2000: 188
表 5 金钗石斛、铁皮石斛的多糖含量
品种 金钗石斛
铁皮石斛
批号
1 2 3 1 2 3
平均百分含量( % )
31696 31768 31810 221 56 221 69 221 35
RSD ( % )
219 214 214 215 212 213
3 讨论 311 测定方法考察 31111 酸性染料比色法测定总生物碱
1 材料、仪器与试药 111 材料
金钗石斛 ( 产自四川合江) ; 铁皮石斛 ( 产自 浙江) 。 112 仪器与试药
7230 型紫外分光光度 计 ( 上海分析 仪器厂) ; pH415 缓冲液 ( 012mol#L- 1, pH= 4 的邻苯二甲酸 氢钾, 用 012mol # L- 1 氢 氧 化 钠 调 至 pH = 415) ; 0104%溴甲酚 绿溶液 ( 称 取溴甲 酚绿 4010mg, 加 100ml pH415 缓冲溶液溶解, 滤过即得) ; 0101mol# L- 1氢氧化钠无水乙醇溶液; 石斛碱对照品 ( 分析 纯, 浙江省医学科学院提供) ; 苯酚试剂 ( 苯酚 200g, 加入铝片 012g 和碳酸氢钠 011g 蒸馏, 收集 182 e 馏分。称取 17g, 加水 150g 混匀, 溶解即得, 置棕色瓶中, 放入冰箱备用) ; 其他试剂为分析纯。 2 方法与结果 211 总生物碱的含量测定 21111 标准曲线的制备
013ml, 同法操作, 按下式计算样品中多糖的含量, 结 果见表 5。
多糖含量(
%) =
Cs#D#f#V W
@
100%
Cs( Lg/ ml) : 供试液中葡萄糖的浓度;
D: 供试液的稀释因素;
f: 换算因素
V( ml) : 供试液的体积;
W( Lg) : 供试液的重量
中国药事 2002 年第 16 卷第 7 期
中国药事 2002 年第 16 卷第 7 期
精称石斛碱对照品 1mg, 置 100ml 容量瓶, 加 氯仿 至刻度。精取 110、210、310、410、510ml 分 别置于分液漏斗 中, 用氯仿 稀释至 1010ml, 加 入 pH415 缓冲液 510ml 和 0104% 溴甲酚绿溶液 210ml, 剧烈振摇 3 分钟, 静置 30 分钟, 氯仿层通过经氯 仿浸泡处理并 干燥的药棉滤 过。取续滤液 510ml, 加 0101mol#L- 1 氢氧化 钠无水乙 醇溶液 110ml, 摇 匀。以氯仿 1010ml, 同法操作, 作为空白对照, 于 620nm 处测得吸收度。回归方程: A= - 0101700+ 0101035C ( r = 019993) , 石斛 碱量 在 918~ 4910Lg 范围内呈线性关系。
硫酸水解过程是测定的主要因素。据实验, 水 浴 15 分钟, 过程已完全, 超过 20 分钟, 吸收度明显 下降。可能由于条件加剧, 生成的糠醛衍生物继续 分解或发生聚合而影响与苯酚的缩合显色。此外用 水提两次, 分别测得第一次水提液多糖含量为 22156% , 第二次水提液不能检出多糖, 可认为水提 1 小时提取完全。 312 根据实验, 金钗石斛的总生物碱含量远高于铁 皮石斛。据报道, 金钗石斛是石斛中总生物碱含量 最高的品种。这与5本草正6、5增补本草备要6所记 载的相同。
石斛中总生物碱和多糖的含量测定
李亚芳 张晓华 孙国明 ( 浙江省杭州市第一人民医院 310006)
中图分类号: R28411 文献标识码: A 文章编号: 1002- 7777 ( 2002) 07- 0426- 03
中药石 斛原植物为兰 科石斛属 ( Dendrobium) 多种植物的茎, 具有滋阴清热、益胃生津、润肺止 咳之功效。虽然石斛的化学成分的研究较多, 但对 各种石斛所含成分的异同情况及其主要药用成分并 没有明确的定论, 以至于将各种石斛的功效混同起 来, 给石斛的质量评价及临床应用带来困难。
表 4 回收 率实验结果
样品含 加入多糖量
多糖量( mg) ( g)
261 96
010272
281 54
010275
271 09
010267
271 03
010271
271 55
010273
测得总多糖 回收率 平均 RSD
量( mg)
( %) 回收率( % ) ( % )
55194 1061 5
56109 1001 2
自 1932 年 日 本 人 首 先 分 离 得 到 石 斛 碱 ( Dendrobine) 后, 陆续从石斛中提取分离出十多种 生物碱。而传统认为质重、嚼之粘牙、味甘、无渣 者为优, 并有 报道石斛的生理 活性与多糖含 量有 关[ 1] 。因此, 近几年来人们对石斛成分的研究多集 中于生物碱[ 2] 及多糖[ 3] 。
精称 105 e 干燥至恒重的葡萄糖标准品 100mg, 置 100ml 容 量瓶 中, 用蒸 馏水 溶解、 定容。精取 10ml 于 100ml 容量瓶 中, 用 蒸馏水 定容即 得。每 10Ll 含葡萄糖 1Lg。精取 011、012 ,,017ml, 分别 置于容量瓶中, 加蒸馏水使成 210ml, 各加苯酚试 剂 110ml, 摇匀, 迅速 加入硫 酸 510ml, 摇 匀, 放 置 5 分钟, 置沸水浴中加热 15 分钟, 冷水迅速冷 却至室温。另以蒸馏水 210ml 同法操作, 作为空白 对照, 在波长 490nm 处测吸收度。回归曲线: A= - 01008143+ 0101350C ( r = 019990) 。可见 葡萄糖 在 4195~ 34165Lg 范围内呈线性关系。 21213 显色稳定性试验
精取葡萄糖 标准溶液 011、012、013ml, 分别 加蒸馏 水使成 210ml, 各加苯 酚试剂 110ml, 按标 准曲线 项 操 作, 每 隔 5、10、30、60、120、180、 240min 测定吸收度。结果表明该显色在 4 小时内稳 定。 21214 换算因素的测定
精称 60 e 干燥至恒重的铁皮石斛 多糖和金钗 石斛多糖各 10mg, 分别置于 100ml 容量瓶, 用蒸馏 水稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液。分别精取两种 多糖的贮备液 013ml, 按标准曲线项下操作, 测定 吸收度。另精取葡萄糖标准溶液 013ml ( 含葡萄糖
精称约 015g 金钗石斛粗粉 6 份, 分别用氯仿提 取 2、3 小 时, 测得总 生物碱含量分 别为 014566% 、 014616% , 两者无 显著差异, 可 见 2 小 时即提 取完 全。此外, 影响测定结果的主要因素有振摇的剧烈 程度、氢氧化钠无水乙醇液的加入量。振摇需剧烈 以便离子对提取完全。而氢氧化钠无水乙醇液可能 通过影响溶液的 pH 而使显色发生差 异, 给实验结 果带来误差。 31112 苯酚- 硫酸法测定多糖含量
# 426 #
中国药事 2002 年第 16 卷第 7 期
表 2 样品的 含量测定结果
批号
样品取量
胡椒碱的含量 X RSD
峰面积值
g
mg
mg %
20000104 20001022 20010305
215778 215342 215637
6831621 6822256 6686839
651 2183 651 1289 631 8361
21112 显色稳定性试验 按标准曲线项下方法操作, 于氯仿提取液加碱
释放染料后, 间隔 5、15、30、60、120min 测其吸 收度。需加盖进行测定, 加入碱后, 在 30min 内显 色稳定, 故需及时测定。 21113 精密度实验
精取石斛碱对照品溶液, 连续进样 5 次, RSD 为 019% 。 21114 回收率实验
碱量( Lg) ( % )
(%) (%)
21611 8 1051 3
21301 4 991 1
20591 4 931 8 21321 9 991 8
991 8 31 7
21471 4 1011 1
21115 样品的测定 精取各 种石 斛粗 粉 015g, 用适 量氨 水 湿润,
密封放置 30 分钟, 精密加入氯仿 1010ml, 置水浴 上加热 回流 2 小时, 冷却后 称重, 补 足失重, 过 滤。金钗石斛: 精取续滤液 110ml 于 10ml 容 量瓶 中, 加氯仿至刻度, 摇匀, 从中吸取 210ml 置 25ml 容量瓶中, 加氯仿稀释至刻度, 摇匀, 取 10ml 置 分液漏斗中 ( 稀释 125 倍) , 作为样品 液。铁皮 石 斛: 精取续滤 液 210ml 于 分液漏 斗中, 加氯仿 液 810ml ( 稀释 5 倍) , 作为样品液。将各样品液按标 准曲线项下同法操作。同时精密量取石斛碱对照品 溶液 210ml 置分液漏斗中, 同法操作, 测得吸收度, 计算总生物碱含量, 结果见表 2。
# 428 #
30Lg) , 同法操作, 求出两种石斛多糖溶液 中的葡 萄糖浓度, 按下式计算换算因素 f, 结果见表 3。
f=
多糖溶液的浓度( Lg#ml- 1) 多糖溶液的葡萄糖浓度( Lg#ml- 1) @
稀释因素
表 3 各石斛多糖的换算因素
样品液
葡萄糖标准品溶液 铁皮石斛多糖溶液 金钗石斛多糖溶液
取各石 斛粗粉 50g, 加 入石油 醚 ( 60~ 90 e ) 250ml, 回流提 取 1 小时 脱脂。过 滤, 挥 干溶 媒, 以 80% 乙醇回流提取 1 小时, 趁热过滤, 挥干溶 媒, 加 入蒸馏水 750ml 回流提取 2 次, 每次 1 小 时, 趁热过滤, 减压浓缩至 150ml, 用 011% 活性 碳脱 色, 过滤, 加入 95% 乙醇使 溶液 含醇 80% , 静置过夜, 分出沉淀物溶于蒸馏水, Sevag 法脱蛋 白。上清液如上述醇沉, 沉淀物依次用无水乙醇、 丙酮、乙醚洗涤。将沉淀再如上脱色、醇沉得精制 品供分析用。 21212 标准曲线的制备
8ml 洗涤 3 次, 再用 85ml 蒸馏水回流提取 1 小时, 乘
热过滤, 用热水洗涤药渣和烧瓶, 冷后在 250ml 容量
瓶中 以 水定 容。分 别精 取 金钗 石 斛 多糖 供 试 液
110ml、铁皮石斛多糖供试液 013ml, 按标准曲线项下
操作, 测 定 吸 收 度。同 时 精 取 葡 萄 糖 标 准 溶 液
品种 金钗石斛
铁皮石斛
# 427 #
表 2 样品测 定结果
批号
1 2 3 1 2 3
平均百分含量( % )
014566 014528 014672 01 02649 01 02557 01 02579
RSD ( % )
310 215 217 414 315 312
Hale Waihona Puke Baidu
212 多糖的含量测定 21211 多糖的提取精制
52162
951 6 1031 3 51 2
57115 1111 1
55164 1021 9
21217 样品的测定
精称 60 e 恒重的各石斛粗粉 01250g, 置圆底烧
瓶, 用石油醚( 60~ 90 e ) 脱脂, 加入 80% 乙醇 100ml,
回流提取 1 小时, 乘 热过 滤。药 渣用 80% 热乙 醇
取已知含量的金钗石斛 5 份, 精密加入石斛碱 对照品溶液, 按样品测定方法测定, 计算回收率, 见表 1。
表 1 石斛碱回收率实验
样品含 加入生物
生物碱( Lg) 113012 115914 113918 115418 115612
碱量( Lg) 980 980 980 980 980
测得总生物 回收率 平均回收率 RSD