实验九甲醛滴定法测定氨基酸

实验九甲醛滴定法测定氨基酸一、目的

掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。

二、原理

氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：

H

3

N+—R—COO—⇔H2N—R—COO—+H+

-NH+

3是弱酸，，完全解离时pH为11～12或更高，若用碱滴定-NH+

3

所释放的H+来测量氨基

酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。

常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促

使-NH+

3

释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内(pH9.0左右)。因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。

R-CH(COO—)-NH+

3⇔R-CH(COO—)-NH2+H+−

−→

−NaOH中和

R-CH(COO—)-NH

2

−

−→

−HCHO R-CH(COO—)-NHCH

2

OH−

−→

−HCHO R-CH(COO—)-N(CH

2

OH)

2

如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量（脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定mL数偏低。酪氨酸的滴定mL数偏高）。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。

三、器材药

25 mL 锥形瓶；3 mL 微量滴定管；吸管；

0.1 mol ／L 标准甘氨酸溶液300 mL 准确称取750 mg 甘氨酸，溶解后定容至100 mL ；

0.1 m01／L 标准氢氧化钠溶液500 mL ；（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。）

酚酞指示剂20 mL 0.5％酚酞的50％乙醇溶液

中性甲醛溶液400mL 在50 mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL 0.1％酚酞乙醇水溶液，用0.1 mol ／L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重新中和。

四、操作

1．取3个25 mL 的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2mL0.1 mo1／L 的标准甘氨酸溶液和5 mL 水，混匀。向3号瓶内加入7mL 水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 mL 甲醛溶液，再混匀，分别用0.1 mo1／L 标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。

重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL 数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。

甘氨酸氨基氮回收率％=

加入理论量

实际测得量

×100

公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL 数的平均值与3号

瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。2mL 乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘14.008。即为加入理论量的mg数。

2．取未知浓度的甘氨酸溶液 2 mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数。

氨基氮(mg／mL)=

2

008 .

14

/

)

(⨯

⨯

-NaOH

L

mol

B

A

式中：A为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。

B为滴定对照液(3号瓶)耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。mo1／L

NaOH

为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。

思考题

选用酚酞指示剂，为什么滴定的是氨基?

注意事项

本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求进行。