第一章 细胞培养的设施与基本条件

12.电子天平
13.pH计
14.移液设备
其它杂品
①洒精灯，②煮沸锅，③铝饭盒，④胶塞，⑤胶帽。 ⑥小推车 ⑦ 微波炉 ⑧水浴锅
二.动物细胞工程实验室基本设备仪器
1 培养箱 二氧化碳培养箱，提供恒定CO2（5%）以稳定pH值，温度：哺乳 类35℃-37℃，鸟类38.5℃，气相：O2、CO2、pH7.2-7.4
1．储藏室 主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮 罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境 也需要清洁无尘。 还用来储藏什么？ 要求：取放方便。还有什么要求？
2.清洗和消毒灭菌室 清洁和消毒灭菌室应与其他区域分 开，主要进行所有实验动物材料的处 理、细胞培养器皿的清洗、准备、消 毒及三蒸水制备等工作。 应满足哪些要求？
第二节
常用仪器与设备
一、动物与植物细胞工程实验室通用的 仪器设备
1.培养器皿： 培养瓶、培养皿、多孔培养板 2.盛装器皿： 3.计量器皿：
4.超净工作台（净化台） •净化台的工作原理 – 利用鼓风机驱动空气通过高效滤器 除去空气中的尘埃疯粒，使空气得 到净化。 •分类
④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持 洁净气流型不受干扰。 ⑤一般情况下，高效过滤器三年更换一次。更换 高效滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。 要定期将粗过滤器中的过布（无纺布）拆下清洗， 时间应根据环境洁净程度而定，通常间隔3~6个月 进行一次。 ⑥每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品， 并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。
2 显微操作仪
3 细胞融合仪 4 细胞冷冻储存器（程序化冷冻仪和液氮罐-196℃） 5 培养用器皿 各种培养瓶、 培养皿、多孔培养板（6、24、96） 6 手术器械等
三.植物细胞工程实验室基本设备仪器
光照培养箱 人工气候室
摇床
培养瓶
第三节
实验室的生物安全
根据密封程度的不同,将生物安全分为 四个等级,即: P1、P2、P3、P4 一级生物安全标准，其基本要求是： 1、限制随便出入实验室； 2、操作前后要消毒； 3、不能用口吸取液体； 4、禁止在室内进食、吸烟和存放食品； 5、操作时着专门实验服； 6、处理细胞前后要洗手； 7、操作时在超净工作台。
作业
• 自动双重纯水蒸馏器的构造和使用方法和 意事项 • 压力蒸气消毒器的使用方法，物品存放和 消毒要求 • 电热恒温培养箱、电热恒温干燥箱的使用 方法 • CO2培养箱的供气调节和消毒方法
辅助实验室： 细胞学实验室
摄影室及暗室 生化分析室
我系细胞工程实验所涉及的实验室现状
506 608 612 507 609 314
课后作业
细胞工程实验室与一般实验室的结 构区别是什么？请同学们参观完我系 现有细胞工程实验室后，从细胞工程 实验室结构设置方面对我系现有细胞 工程实验室的改建工作提出可行性的 建议或意见？
5.培养与观察室 本区对无菌的要求虽不比无菌区严格， 但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰 少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱 或可控制温度的温室中进行，后者费用 高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
二、 植物细胞培养室的设置
◆ 温度：一般控制在25±2ºC ◆ 光照：光强、光质、光照时间
清洗室: 制备室： 灭菌室： 接种室： 培养室： 鉴定室： 驯化移栽室：
细胞工程实验室它必须满足三个基 本的需要，即： 实验准备室；
无菌操作室；
控制培养室。
A、准备室 细胞和组织培养所需器具的洗涤、干燥和保
wenku.baidu.com
存；培养基的配制、分装和灭菌；化学试剂的
配制；重蒸馏水的生产等。一般建在通风和光
线充足的地方（在向阳面），地面防滑，墙壁
防潮。
消毒和实验前的准备 两间房 实验后污物处理和清洗
缓冲间 接种间
C、培养室 离体细胞、组织等生长发育的场所，应为培养物 创造适宜的生长条件。
①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接 照射的地方，防止室内温度增高。 ②天花板的高度不要超过2.5米，以保证紫外灯 的有效杀菌效应， ③门一般用拉门，以防止空气流动。 ④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要 镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消 毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。
5.显微镜
6.电热干燥箱
用于烘干和干热消 毒玻璃器皿。消毒 时，由于温度高达 160℃，因此一般不 要随意打开箱门， 以免玻璃器皿突然 遇到冷空气而破裂。 要等温度降低到 50℃以下时，才能 打开箱门。
7.纯水设备
8.冰箱
家用冰箱
超低温冰箱
9.蒸汽消毒器
10.过滤除菌
11.磁力搅拌器
准备室内的常用设备 ①水槽两处：实验后的清洗及清洁液浸后的清洗。 ②盛清洁液的陶瓷缸或玻璃缸。 ③清洗后器皿的凉干架和贮存柜。 ④高温干燥消毒箱和高压蒸汽消毒锅。 ⑤消毒后器皿的凉干架和贮存柜。 ⑥重蒸水装置。 ⑦电炉 ⑧工作台 ⑨污物桶
B、无菌操作室
密封、防尘、防菌的工作空间。无 菌操作室并非无菌，但应该保持清 洁。 作用：接种，培养物的转移和原生 质体的游离培养操作之用。
•分类
•使用超净工作台应注意的几点问题
• ①超净工作台最好安装在无尘的房间内，最好为 隔离好的无菌间内，以免尘土过多易使滤器阻塞， 降低净化效果，缩短使用寿命。 • ②新安装的或长期未使用的工用台，工作前必须 对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维 的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外 线灭菌法进行灭菌处理。 • ③每次使用工作台时，应先用75%酒精擦洗台面， 并提前以30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区 内积累的微生物。在关闭紫外灯后应启动送风机 使之运转两分钟后再进行培养操作。
复习细胞工程概念
课前思考？
到目前为止，同学们都学习了哪些专业实验？
植物学实验 生物化学实验 动物学实验 微生物实验
细胞工程实验室与这些常规实验室相比较的主 要区别是什么？ 离体培养
• 细胞工程实验室设计
– 原则 防止微生物污染和有害因素影响
– 要求 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘
划分不同功能区或用铝合金隔板隔开 无菌操作区应在室内较少走动的内侧 清洗和消毒安置在另室
3．制备室 在该区主要进行培养液及有关培 养用的液体等的制备。 应具备什么要求？
4.无菌操作室 相对密封、防尘、防菌的工作空间， 在结构和消毒方面都有具体要求。
更衣室： 缓冲间 无菌操作室
a 更衣室:供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口 罩。要求 b 缓冲间:位于更衣间与操作间之间，目的是 为了保证操作间的无菌环境，同时可放置 恒温培养箱及某些必需的小型仪器。 c 无菌操作室:专用于无菌操作。
Chapter 1 细胞培养的设施与基 本条件
◆
细胞工程实验室的设置
◆ 常用仪器与设备
◆ 实验室的生物安全
第一节 细胞工程实验室的设置
一、 动物细胞工程实验室的设置 动物细胞工程实验室要求严格保持 无菌环境，避免微生物及其他有害因 素的影响。
应能进行六方面的工作：无菌操作、 孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、 储藏。
•培养室内的无菌操作要点
①紫外灯无人时就要打开； ②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩； ③每周清洗消毒一次； ④所用物品要以外科手术方式严格消毒； ⑤室内台面要要保持洁净； ⑥所用物品要一次性准备好； ⑦瓶口要用酒精火焰消毒； ⑧尽量减少出入。
实验室设计
从总体上来分，实验室主要分为两类：
准备室 基本实验室： 接种室 培养室