猪繁殖与呼吸综合征病毒-ppt课件

验 （ ELISA ）
控制
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（三）分子生物学诊断技术 1、RT-PCR 2、巢式PCR 3、原位PCR 4、RT-PCR-RFLP 5、核酸探针技术 直接检测病料组织中的病毒。
最为敏感
病毒增殖数量与其适应宿主细胞程度有密切关系。
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病毒增殖的过程：
鼻黏膜或 上呼吸道系统 (巨噬细胞)
初级复制部位
血液循环
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病毒增殖的特点：
增殖的特点
有严格的宿主专一性
对巨噬细胞有专嗜性。
抗体依赖性 增强作用
即在亚中和抗体 水平存在的情况 下，在细胞上的 复制能力反而得 到增强。
• 易感猪可经以下几种途径而感染病毒： 经口、鼻腔、肌肉、腹腔、静脉及子宫内接种。 与带毒猪直接接触。 与污染有PRRSV的运输工具、器械接触。
• 感染猪的流动也是本病的重要传播方式。
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4、流行病学特点 • 高度接触性传染病，呈地方流行性。
• 持续性感染是PRRSV流行病学的重要特征 。 ＊ PRRSV可在感染猪体内存在很长时间。 ＊猪感染病毒后2～14周均可通过接触将病毒
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2、病毒的变异
PRRSV分为两个型：
（1）以Lelystad virus(LV株)为代表的欧洲型（简称A亚群）。 （2）以ATCC VR-2332毒株为代表的美洲型（简称B亚群）。
• 两者在抗原上有显著差异， 只有很少的交叉反应。
A亚群：广泛的基因组变异。 B亚群：呈较为保守性。
传播给其它易感猪。
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六、PRRSV的实验室诊断
该病毒确切诊断需依赖实验室诊断技术，包括病毒 分离鉴定、血清学诊断和分子生物学诊断技术。 （一）病毒分离鉴定
病毒分离鉴定是诊断PRRSV最确切的方法 1、病料 • 首选材料：肺、扁桃体、脾、淋巴结和血清。 • 适宜的检验材料：死产和流产胎儿的脾肺血清和胸水。 • 检出率最高：弱胎猪和有呼吸道症状的急性感染猪。
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3、病毒鉴定的技术
（1）单克隆抗体或多克隆抗体免疫荧光抗体技术
（2）单层过氧化物酶试验
（3）RT-PCR技术
（4）电镜技术
（二）血清学诊断
• 采用血清学抗体检测技术是应用最为广泛的实验室诊 断方法。
• 目前有4种不同的方法用于检测血清中的 PRRSV抗体， 包括：
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M是非糖基化的嵌膜蛋白，分子质 量160000u 。
GP5为糖蛋白，分子质量约25 000u。
GP5与M通过二硫键形成二聚体， 对病毒的感染力及中和作用至关重 要。
• 此外，还有4种次要囊膜蛋白（GP2、 GP3、GP4及E）及两种大分子非结 构蛋白（NSP）。
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• 4、基因组大小为13000～15000nt。 5′端帽，约75%为RNA聚合酶基团。 3′端聚A尾，有编码病毒结构蛋白的基因。
方法
优点
缺点
间接免疫荧光抗 特异性高 早期诊断 抗原变异会影响结果
体试验 （IFA）
结果主观判定
免疫过氧化物酶 特异性高 敏感性高 结果主观判定
单层试验（IPMA） 早期诊断
高背景
抗原变异会影响结果
血清中和试验
（ SN ）
可检测期长
敏感性低 耗时 抗原变异会影响结果
酶联免疫吸附试 自动化操作 高品质 高背景
四、PRRSV的抵抗力
1、病毒的稳定性受pH和温度的影响比较大。 在pH﹤5或 pH﹥7的条件下，其感染力降低95%以
上。 病毒在-70℃可保存18个月，4℃保存1个月，37℃
48h，56℃ 45min完全失去感染力。 2、干燥可很快使病毒失活。 3、对有机溶剂十分敏感，经氯仿处理后，其感染性
可下降99.99％。 4、对常用的化学消毒剂的抵抗力不强。
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一、PRRSV的形态特征
• 1、套式病毒目 动脉炎病毒科 动脉炎病毒属
• 2、基本形态及核酸 病毒粒子呈卵圆形，直
径50～65nm。 核衣壳直径30～35nm，
呈二十面体对称。
有囊膜。 单分子线状单股正链RNA
病毒。
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• 3、病毒蛋白有核衣壳蛋白（N，分 子质量120000u）和两种主要囊膜 蛋白（M和GP5）。
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五、PRRSV的流行病学
1、易感动物 PRRSV只感染猪。 各种品种、不同年龄和用途的猪均可感染，
但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。
2、传染源 患病猪和带毒猪是本病的重要传染源。
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4、传播途径
• PRRSV主要传播途径是接触感染、空气传播，也可通过胎 盘垂直传播。
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2、分离病毒的细胞
原代细胞：PAM。 传代细胞：CL2621、MAl04、 Marcl45等细胞系。 但就临诊分离率而言，PAM的敏感性要高于传代细胞。 注意： （1）一般来说日龄小的猪对病毒的敏感性更高些。 （2）首次传代有时可能无CPE，需盲传2～3代。
（3） 不同的毒株可能适应不同的细胞系。 有些毒株仅能在PAM或仅能在CL2621细胞中生长。 欧洲株在PAM上的复制速度更快、效率更高。 北美毒株在CL2621上更有利于分离。
• 不同毒株之间在毒力和致病力上有明显的差异。 • 我国的PRRSV均属美洲型，迄今还没有发现欧洲型株，同时
我国的分离毒株也存在变异现象，现已发现有缺失变异毒株 的存在。
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三、PRRSV的致病机理
病毒
巨噬细胞
广泛性的血管炎 其他组织的破坏
脾广泛坏死
淋巴结的严重破坏
畜体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒
（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)能引起猪的 一种高度传染性疾病，又称“猪蓝耳病”。 症状:
妊娠母猪的繁殖障碍(流产、死胎、木乃伊胎)。 各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病 。
有感染性。 • 5、表面有约5nm大小的突起，无血凝活性，不凝集哺乳动物
或禽类红细胞。
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二、PRRSV的增殖与变异 1、病毒的增殖
病毒增殖的细胞：
猪的单核细胞巨噬细胞系统内增殖
猪肺泡 巨噬细胞
外周 单核细胞
肺间质 巨噬细胞
在宿主细胞浆的空泡膜及 滑面内质网小池膜上“出 芽”，成熟的病毒粒子多 蓄积在空泡腔内。