《动物生理学》实验课件：实验二 红细胞比容、血红蛋白及渗透脆性测定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、 无误。
三、血红蛋白含量的测定
• 目的 掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。
• 原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量有关。当 用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、 棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或 高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行 对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血 红蛋白克数（g·L-1）。
2、加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各 加一滴，轻轻摇匀，静置1～2 h。
3、观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不 同，判断红细胞脆性。
①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀， 上层为无色透明，表明无红细胞破裂。
②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀， 上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细 胞已经破裂，称为不完全溶血。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空 格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便 于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加 入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、 边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色 与标准比色板的颜色一致为止。
⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。
具体测定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度 管内,(约加到管下方刻度”2”或10%处)。
②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外 的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部， 再吸上清液洗吸管3次。用细玻棒轻轻搅动，使 血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的 盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血 红蛋白。
③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色， 管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为 完全溶血。
1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液
试管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1%NaCl(ml) 2.70 1.95 1.80 1.65 1.50 1.35 1.20 1.05 0.90 0.75
【注意事项】
• 血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被 吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干 净，重新吸血。
方法与步骤
沙里氏血红蛋白计测定 • 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁
血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 • 沙里血红蛋白计 主要由标准褐色玻璃比色箱和1只方形
刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为 血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血 红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相 对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示， 从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此 一般采用绝对值来表示。
二、红细胞脆性的测定
• 目的 学习测定红细胞渗透脆性的方法，理 解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态 与功能的重要性。
• 原理 正常红细悬浮于等渗的血浆中，若 置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红 细胞膨胀甚至破裂，释放血红蛋白，称为 溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵 抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。Leabharlann Baidu
血管，使血液精确到10 cm刻度处。 • 离心：将分血管以3000 r/min离心30 min，
取出分血管，读取红细胞柱的高度，该读 数的10倍即为红细胞比容（容积百分比）。
[注意事项] • 注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。 • 温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛
细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有 气泡。
实验二 红细胞比容测定 红细胞脆性的测定 血红蛋白含量测定
一、红细胞比容测定
目的 掌握红细胞比容的测定方法。
原理 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中， 定时、定速离心，根据红细胞柱及全血高 度，可计算出红细胞在全血中的容积百分 比，即为红细胞比容（压积） 。
方法与步骤
温氏分血管比容法 • 用带有长注针头的注射器将抗凝血注入分
• 开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该 血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血 时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的 最大抵抗力。
方法与步骤
1、溶液配制：取10个小试管，配制出10种不同浓 度的氯化钠低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%， 0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%， 0.9%）。
蒸馏水(ml) 0.30 1.05 1.20 1.35 1.50 1.65 1.80 1.95 2.10 2.25
NaCl浓度(ml) 0.9 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25
[注意事项] • 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只
加一滴。
• 混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动， 避免人为溶血。
三、血红蛋白含量的测定
• 目的 掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。
• 原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量有关。当 用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、 棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或 高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行 对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血 红蛋白克数（g·L-1）。
2、加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各 加一滴，轻轻摇匀，静置1～2 h。
3、观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不 同，判断红细胞脆性。
①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀， 上层为无色透明，表明无红细胞破裂。
②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀， 上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细 胞已经破裂，称为不完全溶血。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空 格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便 于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加 入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、 边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色 与标准比色板的颜色一致为止。
⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。
具体测定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度 管内,(约加到管下方刻度”2”或10%处)。
②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外 的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部， 再吸上清液洗吸管3次。用细玻棒轻轻搅动，使 血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的 盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血 红蛋白。
③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色， 管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为 完全溶血。
1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液
试管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1%NaCl(ml) 2.70 1.95 1.80 1.65 1.50 1.35 1.20 1.05 0.90 0.75
【注意事项】
• 血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被 吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干 净，重新吸血。
方法与步骤
沙里氏血红蛋白计测定 • 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁
血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 • 沙里血红蛋白计 主要由标准褐色玻璃比色箱和1只方形
刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为 血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血 红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相 对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示， 从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此 一般采用绝对值来表示。
二、红细胞脆性的测定
• 目的 学习测定红细胞渗透脆性的方法，理 解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态 与功能的重要性。
• 原理 正常红细悬浮于等渗的血浆中，若 置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红 细胞膨胀甚至破裂，释放血红蛋白，称为 溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵 抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。Leabharlann Baidu
血管，使血液精确到10 cm刻度处。 • 离心：将分血管以3000 r/min离心30 min，
取出分血管，读取红细胞柱的高度，该读 数的10倍即为红细胞比容（容积百分比）。
[注意事项] • 注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。 • 温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛
细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有 气泡。
实验二 红细胞比容测定 红细胞脆性的测定 血红蛋白含量测定
一、红细胞比容测定
目的 掌握红细胞比容的测定方法。
原理 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中， 定时、定速离心，根据红细胞柱及全血高 度，可计算出红细胞在全血中的容积百分 比，即为红细胞比容（压积） 。
方法与步骤
温氏分血管比容法 • 用带有长注针头的注射器将抗凝血注入分
• 开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该 血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血 时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的 最大抵抗力。
方法与步骤
1、溶液配制：取10个小试管，配制出10种不同浓 度的氯化钠低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%， 0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%， 0.9%）。
蒸馏水(ml) 0.30 1.05 1.20 1.35 1.50 1.65 1.80 1.95 2.10 2.25
NaCl浓度(ml) 0.9 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25
[注意事项] • 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只
加一滴。
• 混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动， 避免人为溶血。