实验二微量凯氏定氮法测定总氮量

三、试剂
1、浓硫酸 2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物
K2S04与CuS04.5H20以 3：1配比研磨混合 3、30％氢氧化钠溶液 4、2％硼酸溶液 5、标准盐酸溶液(0.0098 mol／L) 6、混合指示剂(田氏指示剂)
由50mL0．1％甲烯蓝乙醇溶液与200mL0．1％甲基 红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。
蒸馏: 改进型凯氏定氮仪结构
特点：将蒸汽发生器、蒸馏器和冷凝器组成一个整体，体积小，安装容 易，操作简便。
(1)水蒸汽发生器和反应室 (2)冷凝器和通气室 (3)排水柱
关键:搞清水管系统
蒸馏器的洗涤
１． 接通冷凝水，先向蒸汽发生器中加入一定量的水(以排水口高度为宜) 。 ２．水的自动喷出：
c为标准盐酸溶液摩尔浓度(0.0098M)； V1为滴定样品消化液用去的盐酸溶液平均mL数； V2为滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均mL数； w为样品重量(1g),消化液量500ml,滴定消耗用液
量5ml。 14为氮的相对原子质量。 样品蛋白质含量(％)=总氮量×6.25
思考题
1、何谓消化？如何判断消化终点？ 2、在实验中加入粉末硫酸钾―硫酸铜混合物的作用是什么？ 3、固体样品为什么要烘干？ 4、蒸馏时冷凝管下端为什么要浸没在液体中？ 5、如何证明蒸馏器洗涤干净？ 6、本实验应如何避免误差？
蒸馏: 关闭自由夹，打开冷凝水(注意不要过快过猛，以免水溢出,实验过程中， 冷凝水可一直打开)。 点燃酒精灯，蒸馏开始，当观察到锥形瓶中的溶液由淡紫色变绿时(约 2―3分钟)，开始计时，蒸馏3分钟，移开锥形瓶，使冷凝器下端离开液 面约1cm，同时用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外侧，继续蒸馏1分钟，取下 锥形瓶，用表面皿覆盖瓶口。 蒸馏完毕后，应立即清洗反应室，方法如前所述。 如此3～5次。最后将 自由夹同时打开，将蒸汽发生器内的全部废水换掉，继续下一次蒸馏。 待样品和空白消化液均蒸馏完毕，同时进行滴定。
酸性时为紫红色，碱性时为绿色。变色范围很窄且 灵敏。 7、样品—面粉1g
五、操作方法
1.样品处理 固体样品: 某一固体样品中的含氮量是用100g该物质(干重) 中所含氮的g数来表示(％)。 一般样品烘干的温度都采用105℃，因为非游离的水都不能 在100℃以下烘干。 在称量瓶中称一定量磨细的样品(如0.1 g左右的干燥面粉)， 然后置于105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人 干燥器内，待降至室温后称重，按上述操作继续烘干样品。 每干燥1小时后，称重一次，直到两次称量数值不变，即达恒 重。
若样品为液体(如血清等)，可取一定体积样品直接消化测定。
Leabharlann Baidu 2、消化
取凯氏烧瓶 标号。各加几颗玻璃珠; 在1及2号瓶中各加样品0.1g，催化剂(K2S04+CuS04.5H2O)200 mg，浓硫酸5 mL。 在3及4号瓶中各加相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照，用以测定试剂中可能含有的
微量含氮物质。每个瓶口放―漏斗，在通风橱内的电炉上消化。 注意加样品时应直接送人瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。
消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并 放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。
定容：冷却后，加蒸馏水约10 mL。(注意慢加，随加随摇)。然后将瓶中溶物倾入50 或100 mL的容量瓶中，并以蒸馏水洗烧瓶数次，将洗液并入容量瓶，用水稀释到刻 度，混匀备用。
4.滴定
全部蒸馏完毕后，用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示 剂溶液由绿变淡紫色为滴定终点。
注意：使用前检查酸式滴定管漏不漏？漏的话，涂凡士林
滴定时一边滴一边摇，防止滴定过头！
及时记录读数
要求：空白消化液1次，样品消化液2次
5.计算
总氮量(%)=C(V1-V2)×0.014 × 100 × 消化液量(ml) / 滴定消耗用液量(ml) × w
将蒸馏水由加样室加入反应室，加样口水封，用酒精灯将其加热烧开 将酒精灯移开片刻，反应室内水自动喷出到蒸汽发生器 打开蒸汽发生器出水口，放水。
如此反复清洗3-5次。 ３．清洗后在冷凝管下端放一锥形瓶盛有5 mL，2％硼酸溶液和1～2滴指示
剂的混合液。打开冷凝水，进行蒸馏，如3-5min不变色则表明蒸馏装置内部 已洗涤干净。
3 蒸馏过程：
准备: 取50 mL锥形瓶3个，各加入5 mL 2％硼 酸溶液和1―2滴指示剂，溶液 呈淡紫色，用表面皿覆盖备用。
打开冷凝水，置换成冷水。将一个盛有硼酸和指示剂溶液的锥形瓶放在冷 凝器下，并使冷凝器下端浸没在液体内。
加样: 用移液管取5 mL消化液（空白液和消化液分别做），细心地加入反应室， 随后用小量筒加入30％NaOH溶液5mL，关闭自由夹，在加样漏斗中加 少量水做封口。