胶束毛细管电动色谱法快速测定人血清白蛋白和人免疫球蛋白

熔融 石 英 毛 细 管 ４ ． ｍ（ 效 长 度 ３ ｍ） × Ｏ ２ｃ 有 ０ｃ
７ ｍ（． ） 浙江萧山产 ｐ ｓ ０ ５ｌ ＩＤ 。 ｘ Ｈ 一１Ａ酸度计 。
１ ２ 试 剂与 材料 ．
ＩＧ 和 Ｈ Ａ 购 自 Ｆｕ ａ 十 二 烷 基 硫 酸 钠 ｇ Ｓ ｌｋ 。
（Ｄ ）（ 学纯 ， 海 沪 一 试剂 公 司） ０ ４ ＳＳ 化 上 ； ．５
人血 清白蛋 白 人免疫球蛋 白
文献标 志码 ： Ａ 文章编号 ：６ １ ７ ５ ２ １ ）２一 ｏ ５一 ３ １７ —８５ （ ０ １ ｏ ｏ ８ Ｏ
Ｆａ ｔＳ ｐ ｒ ｔ ｎ ａ ｄ Ｄｅ ｅ ｍｉ ａ ｉｎ ｏ ｇ ａ ｄ ＨＳ ｉ ｓ ｅ ａ ａ ｉ ｎ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆＩ Ｇ ｎ Ａ ｏ ｎ
偏差分别小 于 ２０ ％和 ４６ ％ ， ．４ ．２ 回收率在 ９ ．％ 一 ０．％之 间。建立 的方法在优化条 件下 ， ２２ １８７ 可在 ５ｍｎ ｉ 内完成人
血 清白蛋 白和人免疫球蛋 白的分析测定 。 关键 词 ： 胶束毛 细管电动色谱法
中图分 类号 ：６ ７８ Ｒ ３ ． ０ ５ ．；３ １１
ａ ａｂ ｍｉ ｎ ｕ ｎ ｏ ｍａ ｍｍｕ ｏ ｌ ｂ ｌ ｒ ｅ ｓｔ ａ ． ４ ｍ ｌ ｕ ｎ ａ ｄ ｈ ｍａ ｎ ｒ ｌｉ ｎ ｇｏ ｕ ｉ ａ ｅ ｌ ｓ ｎ ２ ０ ％ ａ ｄ４． ２ ．ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ ｎ ｈ ｎ ６ ％ ｅ ｐ ｃ ｉ ｌ ．Ｔ ｅ ｒ． ｖ ｈ ｅ
在 毛 细管 电泳 分离 中 ， 机 改 性剂 能 够 改 善 流 有 动相 极 性 、 配 系数 以及 电渗 流 ， 以 向缓 冲溶 液 中 分 所
报
第２ ６卷
值、 添加剂 或涂层 柱等方 法 解决 蛋 白质壁 吸 附问 题－ 。但极端 ｐ ５ ］ Ｈ值会 降低 分离选 择性 ， 加剂 添 的效果则常常难以预料 ， 而涂层柱存在寿命及工作 ｐ Ｈ值范围窄等 问题 。陈义等采用径 向电场调制毛 细管 电泳 法分 离 蛋 白质 ， 方 法操 作 较 复杂 。张 此 宣等利用微乳液毛细管 电动色谱研究 了蛋 白质， 但 是微乳液毛细管 电动色谱分离 时问长 。因此， Ｊ 有 必要研究快速准确分析蛋 白的新方法。 － 以 Ｈ Ａ和 ＩＧ两种 蛋 白为研 究 对 象 ， 立 本文 Ｓ ｇ 建
，
（．Ａａｙｉ ｌ ｎ ｅｉｇＣ ｎ ｒ Ｓｕｈ ｅｔ ｎｖｒｔ ｃ ｎｅａ ｅ ｎｌ ｙ １ ｎｌ ｃ ｄＴｓｎ ｅｔ ， ｏｔｗｓ Ｕ ｉ ｓｙｏ ｉ ｃ ｎ Ｔｃ ｏｏ ， ｔａ ａ ｔ ｅ ｅ ｉ ｆＳ ｅ ｄ ｈ ｇ
Ｍｉｎａ ｇ６ １ １ ， ｉ ｕ ｎ ｈｎ ； ．Ｄ ｐ ｒ ｅｔ ｈｍｓ ｙ Ｌ ｎｈ ｕ Ｕ ｉ ｒｔ ， ａ ｙ ｎ ２ ０ ０ Ｓｃ ａ ，Ｃ ｉ ２ ｅａｔ ｎ Ｃ ｅ ｉ ｒ ， ａ ｚｏ ｎｖ ｓｙ ｈ ａ ｍ ｏ ｆ ｔ ｅｉ
２ ３ 有机改 性 剂对 分 离 的影响 ．
１ 实验 部 分
１ １ 仪 器 ．
Ｐ Ａ Ｅ Ｍ ＭＤ （ 国 Ｂ ｃ ｍ ｎＣ ｕ ｅ 公 司 ） ／ ＣＴ Ｑ 美 ｅ ｋ ａ ｏ ｌ ｒ ｔ ， 二极 管 阵列检 测器 。系统 由 ３ ａａ。 作站 控制 。 ２Ｋ ｒｔ 工 Ｍ
ｃ ｔ ｌ ｔ ｈ ａｉ ｒ ｔ ｎ ｃ ｒ ｅ ｘ ｉ ｉ ｄ ｇ ｏ ｉｅ ｒｒ ｌ ｔ ｎ ｈ ｐ ｖ ｒ ｔ ｅ ｔ ｓ ｄ ｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ ｒ ｎ ｅ ｏ ａ ｅ ｔ ａ ｅ ｃ ｌ ａ ｉ ｕ ｖ ｓ ｅ ｈ ｂ ｔ ｏ ｄ ｌ ａ ｅａ ｉ ｓ ｉ ｓ ｏ ｅ ｅ ｔ ｏ ｃ ｎ ｒ ｉ ａ ｇ ｆ ｌ ｔ ｂ ｏ ｅ ｎ ｏ ｈ ｅ ａｏ
ｃ ｖ ｆ ｓｏ ｅａ ａｙｅ ａ ｇ ｒｍ ２ ２ ｔ ０ ． ％ ． １ｅｍｅｈ ｄ ｗ ｓｓ ｃ ｅ ｓｕｌ ｐ ｌ ｄｆｒｔｅａ ａ— ｏ ｅ ｅ ｆｔ ｌ ｔｓｒ ｎ ｅｆ ｉ ｈ ｎ ｏ ９ ． ％ ｏ１ ８ ７ Ｉ１ ｔｏ ａ ｕ ｃ ｓｆｌ ａ ｐｉ ｎ ｌ ｙ ｅ ｏ ｈ ｙ ｉ ｏ ｕ ｎ ｓ ｒ ｍ ｂ ｍｉ ｎ ｕ ｎ ｎ ｒ ａ ｍ ｓｓ ｆｈ ｍａ ｕ ａ ｕ ｎ ａ ｄ ｈ ｍａ ｏ ｅ ｌ ｍ ｌｉ ｍｕ ｏ ｌｂ ｌ ｎ ｔｅ ｐ ｔ ｎ ｓ ｓｒ ｍｓ ｎ ｇｏ ｕｉ ｉ ａｉ ｔ’ ｅ ｕ ． ｎ ｈ ｅ
一
方面 是 由于 Ｈ Ａ和 ＩＧ 的等 电点 不 同 ， 致 二 者 Ｓ ｇ 导
在不 同 ｐ Ｈ值时所 带电荷发生变化； 另一方 面的原 因是由于带负 电荷 的 Ｓ Ｓ胶束 与分 析物形成 聚合 Ｄ 体所带 电荷的变化 。笔者研究 了 ｐ Ｈ值 ６ ０～ ．５ ． ７ ２ 和 ４０～ ． 对分离的影响。在 ｐ ． ５０ Ｈ值 ６０ ７２ ． — ．５范 围内， 随着 ｐ Ｈ值 的减小 ， 移时 间和分 离度都增 迁 加。实验中发现 ， ｐ 当 Ｈ值低于 ６ ５时 ， Ｇ前拖尾 ． Ｉ ｇ 明显 。在 ｐ Ｈ值 ４０～ ． 围 内 ， 离度 和迁 移 时 ． ５０范 分 间随 ｐ Ｈ值增加而增加。在考察的范围内， ｐ 当 Ｈ值 低 于 ４７ ．５时 ， Ｓ 和 ＩＧ不 能完全 分 离 ， ＨＡ ｇ 而且在 ｐ Ｈ 值为 ５ ０时 ， Ｇ后 拖尾严 重。综合 考虑分离度和 ． Ｉ ｇ 迁移时间 ，． 作为 ｐ ６５ Ｈ值最优条件。
ｏ ｕ ｎｓ ｒｍ ｌ ｕ ｎａ ｄｈ ｍａ ｏ ａ ｍｍｕ ｏ ｌｂ ｌ ｅｅｃ ｍｐｅｅ ． ｎ ｈ ｅｕｔ ｉｄ． ｆｈ ｍａ ｕ ａｂ ｍｉ ｎ ｕ ｎｎ ｒ ｌ ｅ ｍ ｉ ｎ ｇｏ ｕｉ ｗ ｒ ｏ ｌｔｄｉ ５ ０ ｍｉ ．Ｔ ｅｒｓ ｌ ｎ ｉ ｎ ｎ ｓ
过
滤器 购 自上海 化学 试 剂 公 司 ； 砂 购 自中 国太仓 第 硼 二化 学制 品厂 。其 他试 剂 和分析 物 均为分 析 纯 。人 血清 由兰州大 学 附属 医院提 供 。 １３ 溶 液的 制备 ． 标准 品 溶解 于 蒸 馏 水 ， 度 均 为 １０ ｍ ／ 。 浓 ． ｇｍＬ 使 用 时用 水稀 释到所 需 浓度 。 血清 在 使 用前 用 蒸 馏水 稀 释到 合适 的浓 度 ， 经 过 ０４ ｍ 的滤膜 过滤 ， ．５Ｉ ｘ 然后 直 接 进样 。所 有储 备 液在 ４℃保 存 。
１ ５ ０ Ｉ ／ Ｌ Ｉ ｅｒｌｔ ｅｓ ｎ ａｄｄ ｖ ｔ ｎ（ Ｓ ０～ ０ ｇ ｍ ．，１ ｅａ ｖ ｔ ｄｒ ｅ ｉ ｏ Ｒ Ｄ）ｆ ｇａ ｏ ｍ ｎ ｅｋａｅ ｆ ｕ ａ ｅ－ ￣ １ ｉ ａ ａ ｉ ｏ ｍｉ ｔ ｎｔ ｅａｄｐ ａ ａｏ ｍ ｓｒ ｒ ｒｉ ｉ ｒ ｈ ｎ
第２ ６卷
第 ２期
西
南
科
技
大
学
学
报
Ｖ０． ６ Ｎｏ ２ １２ ．
２ １ 年 ６月 ０１
Ｊｕ ｎ ｌｏ ｏ ｔｗ ｓ ｎｖ ｒｉ ｆＳ ｉｎ ｅａ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏ ｒａ ｆＳ ｕｈ ｅ ｔＵ ｉｅｓｔ ｏ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｙ
Ｊ ｎ ０ ｌ ｕ ｅ２ １
胶束 毛细管 电动色谱法快速测定 人 血 清 白蛋 白和 人 免 疫 球 蛋 白
王树 民 王卫平２ 胡 之德２
（． １ 西南科 技大学分析测试 中心 ｉＪ绵 阳 ６１１ ； ． ｍｑ ２００ ２ 兰州大 学化学化工学 院 甘肃 兰州 ７００ ） ３００
摘 要： 采用胶柬毛 细管电动色谱法分离测定 了人血清 白蛋 白和人 免疫 球蛋 白。结果表 明 ， 人血清 白蛋 白和人免疫 球 蛋 白样量 在 １ ５ ０ｔ，ｍ Ｏ～ ０ ／ Ｌ范 围内线性 关系 良好 ， ￣ 相关系数 ｒ＝０ ９ ５９～ ． ９ ， 移时 间和 峰面积 的相对标 准 ．９ ０ ９ ８８ 迁
了快 速 分 离测 定 Ｈ Ａ和 ＩＧ 的胶 束 毛 细 管 电 动 色 Ｓ ｇ 谱 （ Ｋ ） 方法 ， 成 功应 用 于 人 血清 中 Ｈ Ａ 和 ＭＥ Ｃ 新 并 Ｓ
Ｇ的测 定 。
１ ｍｏ Ｓ Ｓ ０ｍ ｌ Ｄ 为最佳 条件 。 ２２ 运行 缓冲 浓度 和 ｐ ． Ｈ值 对分 离 的影 响 在 ５～２ ｍｏ范 围 内考 察 了磷 酸 要 活性物质 ， 是生 命活动的基 础物质。人 血清 白蛋 白（ Ｓ 存在遗 Ｈ Ａ）
和粒子大小等物理化学数据。已有分析蛋 白质的方 法包括区带电泳 、 等速电泳、 等电聚焦电泳和十二烷 基硫酸钠 一 聚丙烯酰胺凝胶 电泳等Ｈ 。然而， Ｊ 凝 胶电泳方法操作繁琐复杂 ， 上述其他方法无法解决 蛋 白质 分子 吸 附在 石英 毛细 管 内壁 的问题 ， 而 造 从
传多态性 ， 在遗传学方 面有重要意义 。免疫球蛋 白 Ｇ（ｇ ） ＩＧ 是体液主要 的免疫活性成分 ， 具有 防治细
菌和 病毒 感染 的作 用 。毛 细管 电泳 是分 离蛋 白质 的
有效手段 ， 可以提供所研究的蛋 白质 的电荷、 疏水性
收稿 日期 ：０ ０—１ ２１ ２—０ ３
成峰拖尾 ， 导致柱效降低 。目前， 通常采用极端 ｐ Ｈ
Ｌ ｎｈｕ７ ００ Ｇ ｎｕ ｈｎ ） ａｚｏ ３００， ａｓ ，Ｃ ｉａ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｈｕ ｎ ｓ ｒ ｍ ｌ ｕ ｎ ａ ｄ ｈ ｍａ ｏ ｍａ ｍｍｕ ｏ ｌｂ ｌ ｒ ｉ ｌ ｎ ｏ ｓ ｅ ａ ａｅ ｎ ｍａ ｅ ｕ ａｂ ｍｉ ｎ ｕ ｎ ｎ ｒ ｌ ｉ ｎ ｇｏ ｕ ｉ ｗｅｅ ｓ ｎ ｍｕ ｔ ｅ ｕ ｌ ｓ ｐ ｒ ｔ ｄ ａ ｄ ａ ｙ
Ｋｅ ｒ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ：Ｍｉ ｅｌｒ ｅｅ ｔ ｋ ｎ ｔ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｃ Ｌ ｌ ｃｒ ｉ ｅ ｉ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｐ ｙ；Ｈｕ ｎ ｓ ｒ ｍ ｂ ｍｉ ａ ｏ ｃ ｒ ｍａ ｅ ｕ ｌ ａ ｕ ｎ；Ｎｏ ｍａ ｍｍｕ ｏ ｌ ｂ ｌ ｒ ｌ ｉ ｎ ｇｏ ｕ ｉ ｎ
ｄ ｔｒ ｎ ｄｂ ｃ ｌ ｒｅｅ ｔ ｋｎ ｔ ｈｏ ｔｇａ ｈ ． Ｕ ｄ ｒｔｅ ｏ ｔ ｍ ｏ ｄｔ ｎ ，ｔｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｅｅｍｉｅ ｙｍｉｅｌ ｌｅｒ ｉｅｉ ｃ ｒｍａｏ ｒｐ ｙ ａ ｏ ｅ ｎ ｅ ｈ ｐ ｉ ｍｕ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｈ ｅｅｍｉａ ｏ ｉ ｉ
’
基 金项 目： 四川 省教 育厅基 金（ ９ Ｃ ０ ） ０ Ｚ ０９ 。 作者简介 ： 王树 民（１７ 一 ）， ， ９４ 男 博士 ， 师， 讲 主要 从事药 物分析 研究 Ｅ ｍ ｉｓ ＿ ｉ ａｇ ６ ．ＯＩ — ａ： ｕ ｍｎ ｎ ＠１３ ｔＲ。 ｈ ｗ ￣．
西
南
科
技
大
学
学
Ｓ ｒ ｍ ｙ Ｍ ｉｅｌ ｒ Ｅｌｅ ｒ ｋ ｎ ｔ ｒ ｍ ａ ｏ ｒ ｐ ｙ ｅ ｕ ｂ ｃ ｌ ｅ ｔ ｏ ｉ ｅ ｉ Ｃｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ａ ｃ
Ｗ ＡＮＧ ｈ ． ｎ ，Ｗ ＡＮＧ ｅ． ｉ ｇ ＨＵ ｈ ． ｅ Ｓ ｕ ｍｉ Ｗ ｉ ｎ２ ｐ Ｚ ｉｄ
白分离 的影 响。随着磷 酸二 氢钠浓度增 大， ２种蛋 白分离度稍有增 加。综合考 虑迁移时间和分离度， 选 择 １ ｏ 磷 酸 二 氢 钠 为 最 佳 浓 度 。实 验 中 发 ０ｍｍ ｌ 现， ｐ 在 Ｈ值大于 ５ ２ ．５时， 分析物在阴极端流 出， 而
当ｐ Ｈ值小 于 ５ ２ ．５时在 阳极 端 流 出 ， 而且 出峰 顺 序 正好 相 反 。分析 物 电泳 方 向 和 出峰 顺 序 发 生 变化 ，