免疫分型教程
免疫分型教程
40-免疫分型教程(1) 正常骨髓免疫分型上图是正常骨髓经CD45、CD71、CD33染色后组成的CD45/SSC、CD71/CD33双参数散点图；通过这两个组合，能够分辨骨髓的正常细胞、检查是否有异常细胞存在、评估细胞的成熟情况。
CD45/SSC图中可见：1，CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体）；2，中等强度的CD45表达，SSC信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色及红色细胞群体）；3，CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体）；4，CD45阴性，SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片；CD33/CD71图中可见：1，CD33表达最强的单核细胞群体（绿色）；2，粒细胞CD33表达较单核弱，不成熟粒表达CD71，成熟后不表达。
3，淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达CD33、CD71。
CD11B/CD15图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获得CD11B，粒细胞高表达CD15）：1，单核细胞（绿色）高表达CD11B，CD15中等到表达；2，粒细胞（蓝色及橘红色）高表达CD15，蓝色成熟粒CD11B表达较橘红色不成熟粒细胞强，幼稚髓细胞仅表达CD15而无CD11B。
3，T、B淋巴细胞不表达CD15、CD11B，NK细胞表达CD11B而无CD15（红色细胞）。
4，有核红细胞及碎片不表达CD15和CD11B。
根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞：R1门为成熟淋巴细胞；R2门为正常单核细胞位置；R3门正常粒细胞位置；R4门为幼稚淋巴细胞出现位置；R5门为有核红细胞或细胞碎片位置；R6门为幼稚髓细胞出现位置；白血病细胞通常会在R4、R6两门位置处出现。
M0免疫分型M0:急性髓细胞白血病微分化型原始细胞在光镜下类似L2型细胞,核仁明显,胞浆透明,嗜碱性,无嗜天青颗粒及Auer小体,髓过氧化酶(MPO)及苏丹黑B阳性细胞<3%;电镜下,MPO(+);CD33或CD13等髓系标志可呈(+),淋巴系抗原通常为(-),但有时CD7+,TdT+;部分急非淋白血病可表现CD7+,TdT。
白血淋巴瘤免疫分型课件 共104页
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
29
AML-M1
30
AML-M1
31
AML-M2 32
AML-M2 33
AML-M3 34
AML-M4
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AML-M4
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AML-M5
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AML-M6
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初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
Light chains: “kappa” or “lambda” Heavy chains: IgG, IgA, IgM
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B细胞的不同克隆性表达
R7 R6
R7 R6
Normal: k 50; λ 39
k 2; λ 98 +
R7
k 86 ; λ <1
R6
R7
R6
k 1; λ 99
R7
k 3; λ 93 +
早前B-ALL + —
+
— — — L1,L2
前 B-ALL + —/+ + + + — L1
普通B-ALL + +/ — + + — — L1,L2
成熟B-ALL + +
+ +/ — —/+ + L3
40
B-ALL
41
Pre-BALL
42
Common-B-ALL
43
T细胞系ALL的免疫分型
结果，但在具体确定一种淋巴瘤时其侧重点有所不同。
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淋巴瘤病理分类的演进
《急白免疫分型》课件
急白免疫分型
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMARY
目录
CONTENTS
• 急白免疫分型概述 • 急白免疫分型的检测方法 • 急白免疫分型的应用 • 急白免疫分型的研究进展 • 急白免疫分型的挑战与对策
REPORT
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
01
疾病预后评估
急白免疫分型可以评估急性白血病的预后，不同类型的急性白血病具有不同的免疫表型特征，通过分 析白血病细胞的免疫表型，可以预测疾病的发展趋势和治疗效果。
急白免疫分型能够评估患者的病情状况和预后，为制定个性化的治疗方案提供依据，有助于提高治疗 效果和患者的生存率。
疾病治疗指导
急白免疫分型可以为急性白血病的治疗提供 指导，不同类型的急性白血病需要采用不同 的治疗方案，通过急白免疫分型可以确定最 佳的治疗方案。
个体化治疗方案的研究
针存率。
临床试验的开展
开展了一系列急白免疫分型的临床试验，验 证新药物、新疗法的疗效和安全性。
研究前景展望
1 2 3
深入探索急白免疫分型的机制
随着研究的深入，将进一步揭示急白免疫分型的 发病机制和演化过程，为治疗提供新的思路和方 法。
02
WHO（World Health Organization）分型：基于细胞形态学、免疫学、遗传 学和临床表现的综合分类，将急性白血病分为多个亚型。
03
MICM（Morphology, Immunology, Cytogenetics, and Molecular biology ）分型：结合细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学特征进行分型， 是目前最为全面的分型方法。
我国急性白血病免疫分型的四色方案
我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。
因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体，涉及多个造⾎系列的抗原。
但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。
⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性，有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案，供参考。
本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病（APL）1.3急性髓细胞⽩⾎病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红⽩⾎病（AML-M6）z急性巨核细胞⽩⾎病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病1.6 混合表型⽩⾎病1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查2.抗体的选择：根据检测的⽬的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病，可以根据CD45/SSC图型进⾏初步判断。
髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下⽅，且多数⽩⾎病细胞SSC较低（除去⼤颗粒APL 患者）。
免疫细胞分型-T细胞
免疫细胞分型常见标志物大串烧（一）——T细胞分型标志物免疫分型（immunophenotyping）是指根据存在于细胞表面、核或细胞质中的标记物或抗原的类型，利用基于抗体的对异质细胞群进行分析，以鉴定多种目标细胞群的存在及比例。
通过使用特异性识别不同细胞类型标记物或抗原的抗体，从而帮助鉴定细胞的谱系。
例如肿瘤标志物的检测、浸润免疫细胞的分析、白血病的诊断等。
免疫分型可以利用组织切片(新鲜或固定组织)通过免疫组化方法以及利用细胞悬液通过流式细胞术进行分析。
流式细胞术可以说是用于探测人类免疫表型的首选技术，特别是由于它可以在诸如血液的复杂混合物中通过测量许多单个细胞上的多个参数，从而鉴定和分析包括稀有亚群在内的许多细胞亚群。
并且由于可用的抗体试剂的扩大和实验方案的不断调整，流式细胞术不仅可用于评估细胞表面蛋白的表达，还可以用于评估胞内蛋白的表达或修饰水平以及细胞因子的水平。
使用细胞表面标记的特定组合对免疫细胞亚群进行定义是一个不断发展的过程，特别是那些高频研究的细胞类型。
这些类型包括调节性T细胞(Treg)、分泌IL-17的T辅助细胞(Th17)、树突状细胞(DC)和自然杀伤细胞(NK)。
尽管新标记的发现和新的细胞子集将在未来一段时间内持续下去，然而，我们还是希望细胞免疫学领域具有足够的成熟程度，以达到对大多数共同研究的免疫细胞亚群的定义达成共识。
换句话说，应当能够定义一种相对稳定的标记集合，其描绘T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和DC细胞等主要类型。
因此，我们通过总结文献确定各个细胞类型的关键分化标记，并且总结目前用于人体免疫监测的标准化免疫表型分型组合。
T细胞T淋巴细胞可在CD3表达的基础上被免疫表型化，随后进一步细分(如CD8+杀伤性T细胞和CD4+辅助性T细胞)。
此外，T细胞表型是灵活的，可以随不同的微环境发生变化；表型也可能重叠在多个T细胞群体之间。
此外，T细胞亚群的分类还可能是根据响应某些刺激或磷酸化免疫信号蛋白（如STAT蛋白）而分泌的特定细胞因子水平来确定。
免疫分型ppt课件
前 B
静 止 期 B
抗 原 刺 激
外 套 细 胞
Pro-B ALL
TDT+ CD34+ cCD79a+ CD19+ CD10± cμ-
Common -B ALL
Pre-B ALL
TDT+ CD10± cCD79a+ CD19+ CD20+ CD10± cμ+
滤 泡 区 母 细 胞
中 心 母 细 胞
中 心 细 胞
边 缘 带 细 胞 边缘带 淋巴瘤
CD22+ CD5CD10CD23-
浆 细 胞
套细胞 淋巴瘤
CD5+ CD22+ sIg+ FMC7+ Cyclin D1+ CD23-
伯基特 淋巴瘤
CD22+ CD10+ sIg+ CD34TDT-
大B细胞 淋巴瘤
CD22+ bcl-6+ CD10 ± CD5 ± CD30 ±
B细胞淋巴肿瘤的抗原表达
CD5+ CD19+ CD20 CD22+ CD23 + sIg+ FMC7-
免疫母细胞 大B细胞 淋巴瘤
浆细胞样淋巴细胞 淋巴浆细 胞淋巴瘤
CD19+ CD20+ CD22+ CD38+ IgM++ sIg++
CLL/SLL
干 细 胞
早 前 B
TDT+ CD34+ cCD79a+ CD19+ CD20 ± CD10+ cμ-
CD41 CD42a/b CD61
白血病淋巴瘤免疫分型 ppt课件
血液研究所 卫生部 血栓与止血重点实验室
ppt课件
1
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
ppt课件
2
散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
25
白血病免疫分型
• 根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
• 根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
ppt课件
26
EGIL，1998年白血病积分系统
• 分值
B系
T系
髓系
•2
CD79a
CD3
MPO
•
ppt课件
54
淋系肿瘤WHO分类
ppt课件
55
淋巴瘤诊断的必查项目
• 根据淋巴结或骨髓活检进行诊断,至少需要对 一个肿瘤组织的石蜡块的所有切片进行血液 病理学检查.如果认为样本组织不能确诊,则 需要重新活检。
• 肿块细针穿刺（FNA）不宜作为淋巴瘤初始诊 断的依据。但是在某些情况下，FNA结合细胞 形态学和流式细胞学检查也可以为诊断提供 足够的信息，特别是在诊断CLL时。
白血病免疫分型讲课最终本
白血病免疫分型讲课最终本引言白血病是一种常见的血液系统恶性肿瘤，其发生与免疫系统的异常功能有着密切的联系。
免疫分型是指根据白血病细胞表面的免疫表型特征对其进行分类和鉴定的方法。
通过免疫分型，我们可以更好地理解白血病的发生机制，为个体化治疗提供参考依据。
本文将重点介绍白血病的免疫分型方法及其临床应用。
1. 白血病的免疫分型白血病的免疫分型是基于白血病细胞的免疫表型特征进行分类和鉴定的方法。
在临床上，常用的免疫分型方法主要包括免疫组织化学染色、流式细胞术和免疫基因重排检测等。
1.1 免疫组织化学染色免疫组织化学染色是一种通过对组织切片中的细胞进行特异性标记，以观察和分析细胞表面抗原表达情况的方法。
通过对白血病组织切片进行免疫组织化学染色，可以确定白血病细胞的免疫表型特征，从而进行免疫分型。
1.2 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪对细胞进行单个细胞的快速、准确地分析的方法。
通过标记白血病细胞表面的特定抗原，并利用流式细胞仪进行检测和分析，可以确定白血病细胞的免疫表型特征，进而进行免疫分型。
1.3 免疫基因重排检测免疫基因重排检测是一种通过检测白血病细胞中免疫相关基因的DNA或RNA重组情况，来确定白血病细胞的免疫表型特征的方法。
通过免疫基因重排检测，可以发现白血病细胞克隆性演变和克隆扩增的过程，为免疫分型提供重要依据。
2. 白血病免疫分型的临床应用白血病免疫分型在临床上有着重要的应用价值。
通过免疫分型，可以更准确地确定白血病的诊断和分型，为患者提供个体化的治疗方案。
此外，免疫分型还可以评估患者的预后风险和治疗反应，指导治疗方案的调整。
2.1 诊断和分型免疫分型可以通过确定白血病细胞的免疫表型特征，帮助医生更准确地进行白血病的诊断和分型。
不同类型的白血病具有不同的免疫表型特征，通过免疫分型可以将白血病分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性非淋巴细胞白血病（AML）等不同亚型，进而为患者提供合理的治疗方案。
流式细胞术免疫分型基础
流式细胞术免疫分型基础免疫分型组成系别相关标志干/祖细胞：CD34，CD38，HLA-DR，TdT髓系：CD33，CD13，CD15，CD11b，CD14，CD64，cMPO，CD117, CD11c, CD36红系：CD71，glyA巨核系：CD41，CD61B 细胞：CD10，CD19，CD20，CD22，CD23，k，λ, cCD79a,cIgM, (CD5, CD11c, CD103, CD25, FMC7)T细胞：CD2，CD3，CD5，CD7，CD4/8，cCD3, TCR NK细胞：CD16，CD56，（CD3 -/CD56+）浆细胞：CD138，CD38,c k，cλ原始细胞（Blast）早幼粒细胞（有颗粒原粒？）髓系幼稚细胞•幼稚细胞包括原粒、原单、原始巨核、幼单。
•异常单核不能算幼稚单核，在鉴别急性粒单细胞白血病、急性单核细胞白血病、慢性粒单细胞白血病中有重要作用。
•小的异常增生巨核和微巨核不能算幼稚细胞。
•在APL中，异常早幼粒也算幼稚细胞。
•原红一般不计在内，除非罕见的急性纯红细胞白血病。
髓系幼稚细胞免疫标志•原粒、原单：CD34、CD117、HLA-DR、CD13、CD33、MPO+/-•原始巨核:CD61、CD41a、CD9、CD36（不特异）•幼单：CD15dim、HLA-DRstr、CD64、CD11c、CD4dim、CD11b、CD33str、CD13、CD14-•APL：HLA-DR-、CD34-、CD117+、CD9+、CD15-/+、CD33str、CD64+、CD13dim淋系幼稚细胞•幼稚细胞包括原始淋巴、幼稚淋巴。
表型：•幼稚标志+泛B/T标志•幼稚标志：CD34、TdT、B系（CD10）T系（CD1a、CD99str)•泛B：CD19、cCD79a、CD22•泛T：胞浆CD3、CD7、CD2、CD5•不表达成熟标志：B系胞膜轻链；T系CD4、CD8、CD32008 WHO分类•偏成熟髓系疾病–髓系增殖性肿瘤(MPN)（包括肥大细胞增多症）–伴有嗜酸细胞增多和PDGFRA、PDGFRB、FGFR1异常的髓系和淋系肿瘤–MDS/MPN–MDS•急性髓系白血病和急性未定系列白血病•前体淋巴肿瘤•成熟淋巴增殖性疾病–B细胞淋巴瘤–T或者NK细胞淋巴瘤–何杰金氏淋巴瘤–免疫缺陷病•组织细胞和树突细胞肿瘤MPN（髓系增殖性肿瘤）•BCR-ABL1阳性慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia,CML)•慢性中性粒细胞白血病(CNL)•真性红细胞增多症(PV)•原发性骨髓纤维化(PMF)•特发性血小板增多症(ET)•慢性嗜酸性粒细胞白血病，NOS(CEL)•肥大细胞增多症(mastocytosis)•髓系增殖性肿瘤，不能分类的(MPN.U)CML加速期(Accelerated Phase,AP)•出现下述之一考虑CML AP：PB中嗜碱性粒细胞超过20%；（嗜碱性粒细胞识别：位置：CD45/SSC图，原粒的左上，表达CD9、CD123、CD203c、CD22dim）PB或者BM中髓系幼稚细胞为10-19%幼稚细胞克隆为非髓系。
免疫细胞分型方案
免疫细胞分型方案
免疫细胞分型方案主要包括以下步骤：
1. 淋巴细胞分型：淋巴细胞包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞。
T淋巴细胞可以分为αβ T 细胞和γδ T 细胞，B淋巴细胞可以分为B1和B2两个亚群。
2. 非淋巴细胞分型：非淋巴细胞是指除了T细胞、B细胞和NK细胞以外的免疫细胞，包括单核/巨噬细胞、DC、粒细胞、肥大细胞等主要参与非特异性免疫应答。
3. 细胞免疫分型：这是淋巴系肿瘤重要的辅助诊断工具，可以确定淋巴系肿瘤细胞的来源和分化程度。
4. 形态学分型：对于形态不典型、化学染色不特异的急性白血病，可结合细胞免疫分型，有助于诊断。
5. 其他检测：如检测微小残留病变等。
以上步骤仅供参考，具体分型方案需要根据具体情况制定。
如有需要，建议咨询专业医生或相关专家。
免疫细胞分型鉴定
免疫细胞分型鉴定
免疫细胞分型鉴定是指对免疫系统中的不同细胞类型进行鉴定和分类。
免疫细胞是组成免疫系统的关键组成部分，包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞等。
以下是一些常见的免疫细胞分型鉴定方法和指标：
1.免疫表型分析：利用流式细胞术（flow cytometry）等技术，
通过检测细胞表面的免疫标记物（抗原）来确定细胞的类
型。
例如，CD3、CD4和CD8用于T细胞的鉴定，CD19用
于B细胞的鉴定，CD56用于NK细胞的鉴定等。
2.细胞功能分析：通过测量细胞的功能，如细胞因子产生、
细胞毒性等，来鉴定细胞类型。
例如，T细胞可以通过检
测干扰素γ（IFN-γ）或白细胞介素-2（IL-2）产生来鉴定
Th1细胞；B细胞可以通过测量抗体产生来鉴定。
3.基因和蛋白质分析：使用分子生物学技术，如PCR和免疫
组化等，检测特定基因和蛋白质的表达来确定细胞类型。
例如，通过检测T细胞特异性基因编码的T细胞受体
（TCR）来鉴定T细胞子群。
4.细胞形态学分析：通过显微镜观察和分析细胞的形态和特
征来鉴定细胞类型。
例如，T细胞通常具有细的胞质、圆
形或椭圆形的细胞形态。
通过免疫细胞分型鉴定，可以对不同种类的免疫细胞进行准确的鉴定和分类，从而更好地了解免疫系统的功能和调节机制。
这对于研究免疫相关疾病的发病机制、制定免疫治疗策略以及评估免疫疫苗效果等有重要意义。
免疫组化 免疫细胞分型
免疫组化免疫细胞分型免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的免疫细胞分型技术，通过检测组织切片中特定抗原的表达情况，可以对免疫细胞进行鉴定和分类。
免疫细胞分型是研究免疫系统功能和疾病发生机制的重要手段之一，下面将介绍几种常见的免疫细胞分型方法及其应用。
1. T淋巴细胞分型T淋巴细胞是免疫系统中的关键细胞类型，根据表面标记物的表达差异，可以将其分为不同的亚群。
常用的T淋巴细胞分型标记物包括CD3、CD4和CD8等。
CD3是T淋巴细胞的通用标记物，CD4与CD8分别标记辅助性T细胞和细胞毒性T细胞。
通过免疫组化技术，可以观察到不同亚群T细胞在组织切片中的表达情况，进而研究其在免疫应答和疾病发生中的作用。
2. B淋巴细胞分型B淋巴细胞是体内产生抗体的主要细胞类型，其表面标记物主要有CD20和CD79a等。
CD20是B淋巴细胞的特异标记物，通过免疫组化技术可以定位和鉴定B细胞在组织中的分布情况。
免疫组化还可以进一步检测IgM、IgG等免疫球蛋白的表达，从而评估B细胞的功能状态和免疫应答能力。
3. 标记巨噬细胞巨噬细胞是免疫系统的重要成分，具有吞噬和清除病原体的功能。
常用的巨噬细胞标记物包括CD68和CD163等。
CD68是巨噬细胞的通用标记物，通过免疫组化技术可以定位和鉴定巨噬细胞在组织中的分布情况。
CD163是巨噬细胞的特异标记物，其表达水平与巨噬细胞的活化状态密切相关。
免疫组化技术可以用于评估巨噬细胞在免疫炎症反应和肿瘤微环境中的作用。
4. 标记浆细胞浆细胞是免疫系统中产生抗体的细胞，其表面标记物主要有CD138和MUM1等。
CD138是浆细胞的特异标记物，通过免疫组化技术可以定位和鉴定浆细胞在组织中的分布情况。
MUM1是浆细胞细胞核内的标记物，其表达水平与浆细胞的活跃程度相关。
免疫组化技术可以用于评估浆细胞在免疫应答和疾病发生中的作用。
5. 其他免疫细胞分型除了上述几种常见的免疫细胞分型方法，还有许多其他标记物可以用于免疫细胞的鉴定和分类。
免疫分型 基础介绍
近年来白血病得免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少得重要标准之一、早年曾用过得荧光显微镜或APAAＰ方法基本被废弃。
国际上公认得通用得方法就是流式细胞术(FCM)。
流式细胞术白血病免疫分型就是利用荧光素标记得单克隆抗体(McAb)作分子探针,多参数分析白血病细胞得细胞膜与细胞浆或细胞核得免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
ﻫ1、流式细胞仪诊断白血病得依据⑴FＣM能快速,多参数,客观得定性又定量测定细胞膜、浆、核得抗原表达ﻫ⑵至今尚未发现白血病得特异抗原。
ﻫ⑶能用正常血细胞得单抗来进行免疫分型就是基于白血病形成得分化阻断学说。
即白血病细胞基因异常,分化受阻于某阶段形成不同亚型得白血病、这群细胞充盈于骨髓。
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞得过程中,细胞膜、细胞浆或胞核抗原得出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞得分化发育阶段密切相关,而且表现出与细胞系列及其分化程度相关得特异性。
因此,这些抗原得表达与否可作为鉴别与分类血细胞得基础。
白血病就是造血系统得恶性肿瘤,在形态上变化虽相当大,但仍能表达正常血细胞所具有得抗原,因而仍可依据其抗原得表达谱对白血病进行免疫分型。
2、流式细胞仪诊断白血病得意义ﻫ⑴骨髓血细胞就是形态学分型得基础,FCＭ白血病免疫分型就是对形态学分型得重要补充与进一步深化,国际白血病MIＣ分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都就是必不可少得,对下列情况意义更大:①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源得白血病。
②形态学为急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
③混合性白血病。
④部分髓系白血病。
目前,免疫分型对粒细胞与单核细胞白血病得鉴别尚有一定困难。
⑤慢性淋巴细胞白血病。
⑥微小残留白血病、⑵临床预测;可根据抗原得表达情况预测病情得预后:如白血病患者有ＣD7+与CＤ3４+共表达,预后不好。
⑶疾病监测:可监测病程得发展,疗效,可进行微小残留白血病得检测。
急性白血病——免疫分型
细胞系列抗原的表达 ---B细胞系抗原
HLA-DR意义 在白血病分型中，HLA-DR特异性较差， 除B系外，HLA-DR在急非淋、成人T细胞白血
病亦表达，
但如DR+，加上CD5-、CD7-则99%为B系。90%B 系ALL表达CD10。
与AL预后有的抗原
1。CD34：
强表达者预后差，特别是复发时CD34增强是最有意义 的免疫学表型改变，CD34常与一些预后差的因素共存 时有相加的作用，与CD34与Pgp或DR共存的患者，比单 表达其中一个抗原的患者完全缓解率明显降低。
Pre-B4,B,T1,T2,T3 第三型：变异型-Pre-B1-4/My+,Pre-B1-
4/CD15+, PRE-B1-4/T+,T1-4/My+, T1-4/CD15+,T1-4/B+
第四型：多表型-Pre-B1-4/M+,T1-4/M, Pre-B+T,Pre-B+T+M.
ALL免疫分型
免疫学分型对ALL更重要。 免疫学与FAB分型可不一致。
细胞系列抗原的表达 ---B细胞系抗原
B细胞根据发育阶段可分为： B祖细胞 TdT、CD34、HLA-DR
前B细胞（可再分为前前B、前B）TdT、CD34、CD10、CD19、 CD24
未成熟B细胞 CD19、CD24、CD20、CyCD22
急性白血病的免疫分型急性白血病的免疫分型micmicmm分型细胞形态学细胞形态学包括细胞组化包括细胞组化为基础为基础细胞免疫学细胞免疫学免疫表型免疫表型为主体为主体细胞遗传学为辅助细胞遗传学为辅助分子生物学为补充的原则
急性白血病
免疫学分型
急性白血病的免疫分型
急性白血病免疫分型流程
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免疫分型标准
免疫分型标准免疫分型是指根据免疫系统的特定指标对个体的免疫状态进行分类和评估。
免疫分型标准通常基于免疫细胞的数量、功能、表面标志物等因素，以及体液免疫指标，如抗体水平。
这有助于更好地了解个体的免疫功能，为疾病预防、诊断和治疗提供有针对性的信息。
免疫分型的主要标准包括以下几个方面：免疫细胞数量和比例：淋巴细胞计数：包括T细胞、B细胞、NK细胞等。
通过流式细胞术等技术检测。
CD4+/CD8+T细胞比例：正常范围通常在1.0-2.5之间。
该比例可反映T细胞的免疫调节状态。
免疫细胞功能：淋巴细胞功能检测：如T细胞的增殖能力、B细胞的抗体产生功能等。
这些功能可以通过体外实验室技术进行评估。
免疫球蛋白水平：IgG、IgA、IgM水平：通过血清学检测，评估体液免疫的状况。
特定抗体水平：如疫苗接种后特定病原体的抗体水平，反映对该病原体的免疫记忆。
炎症标志物：C反应蛋白（CRP）、血沉等：反映机体炎症状态，对于炎症性疾病的评估有一定意义。
HLA分型：人类白细胞抗原（HLA）分型：通过检测HLA基因，了解个体对抗原的免疫反应差异，对器官移植、免疫相关疾病的研究有重要意义。
免疫功能评估：免疫球蛋白亚型：了解IgG的亚型分布，对免疫功能的细致评估提供信息。
细胞因子水平：如干扰素、白介素等，反映机体对病原体的免疫应答状态。
过敏和自身免疫标志物：IgE水平：过敏体质的评估。
自身抗体检测：检测自身抗体水平，帮助诊断自身免疫疾病。
免疫分型的意义：免疫分型有助于了解个体的免疫状况，为疾病的早期预防、诊断和治疗提供科学依据。
在移植手术前，免疫分型也对移植的配型和免疫抑制治疗方案的制定具有指导作用。
免疫分型的发展不仅在免疫学研究领域有着广泛应用，同时也推动了个体化医疗的发展。
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40-免疫分型教程(1)正常骨髓免疫分型上图是正常骨髓经CD45、CD71、CD33染色后组成的CD45/SSC、CD71/CD33双参数散点图；通过这两个组合，能够分辨骨髓的正常细胞、检查是否有异常细胞存在、评估细胞的成熟情况。
CD45/SSC图中可见：1，CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体）；2，中等强度的CD45表达，SSC信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色及红色细胞群体）；3，CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体）；4，CD45阴性，SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片；CD33/CD71图中可见：1，CD33表达最强的单核细胞群体（绿色）；2，粒细胞CD33表达较单核弱，不成熟粒表达CD71，成熟后不表达。
3，淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达CD33、CD71。
CD11B/CD15图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获得CD11B，粒细胞高表达CD15）：1，单核细胞（绿色）高表达CD11B，CD15中等到表达；2，粒细胞（蓝色及橘红色）高表达CD15，蓝色成熟粒CD11B表达较橘红色不成熟粒细胞强，幼稚髓细胞仅表达CD15而无CD11B。
3，T、B淋巴细胞不表达CD15、CD11B，NK细胞表达CD11B而无CD15（红色细胞）。
4，有核红细胞及碎片不表达CD15和CD11B。
根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞：R1门为成熟淋巴细胞；R2门为正常单核细胞位置；R3门正常粒细胞位置；R4门为幼稚淋巴细胞出现位置；R5门为有核红细胞或细胞碎片位置；R6门为幼稚髓细胞出现位置；白血病细胞通常会在R4、R6两门位置处出现。
M0免疫分型M0:急性髓细胞白血病微分化型原始细胞在光镜下类似L2型细胞,核仁明显,胞浆透明,嗜碱性,无嗜天青颗粒及Auer小体,髓过氧化酶(MPO)及苏丹黑B阳性细胞<3%;电镜下,MPO(+);CD33或CD13等髓系标志可呈(+),淋巴系抗原通常为(-),但有时CD7+,TdT+;部分急非淋白血病可表现CD7+,TdT。
形态学：幼稚细胞占骨髓有核细胞90%以上；肿瘤细胞不出现AUER小体；粒细胞缺少，MPO或苏单黑染色阴性。
遗传学：染色体常有复杂的异常，特别是5和7号染色体。
当病例伴T（9；22）时会出现淋系抗原。
幼稚细胞群体的FS和SS信号低，在CD45/SS点图中特征性地与幼稚淋巴细胞区域相连。
幼稚细胞至少表达一种骨髓抗原：CD13，CD33，但完全缺乏髓系成熟分化抗原：CD11B，CD15和CD16。
相当一部分病例TDT 阳性，但在肿瘤细胞上分布不均。
肿瘤细胞通常淋系抗原阴性，但有时也会表达CD7或CD4；HLA-DR通常阳性，CD34则为阴性。
有学者指出伴CD7和CD34同时表达的病人预后不佳。
检测胞浆内MPO比CD33/CD13联合检测更为敏感。
M0中MPO阳性率一般小于3%，如大于3%则要判定为M1。
M0:HLA-DR+,CD34+,CD13+/-,MPO+,CD14-,CD11b-,TdT-/+to+/-骨髓样本类似纯化的培养细胞，在CD45/SSC图中可见到数量占绝大多数的一群幼稚细胞群体。
这群异常细胞在的SSC信号较低，大小中等。
幼稚细胞CD19、CD34阴性，但同时表达CD13和CD33。
CD13表达稍弱，且抗原表达较CD33不均一。
白血病细胞占了所有细胞群体的96%。
HLA-DR在这些髓系细胞上不表达。
这些幼稚细胞表型的情况是：CD13阳性，CD33阳性，CD34阴性，HLA-DR阴性。
这个表型与AML-M3相以。
肿瘤细胞不表达CD71、CD117、CD18、CD11b和CD15。
CD64是阴性，但CD14表达。
CD14表达强度比较弱与CD13相似。
T细胞标志物CD2、CD5、CD3和CD7都不表达。
在图中可观察到残存的一些T细胞。
与阴性对照相比，CD4弱阳性表达。
诊断：AML微分化型，CD34和HLA-DR阴性。
实验室进一步诊断：MPO（免疫组化）阳性，NSE阴性，46XY，t(3;5)(q25;q34)重要说明：本例中白血病细胞免型表型为：CD34-、HLA-DR-，CD13+，CD33++，表面看与AML-M3相似。
在许多幼稚细胞胞浆内存在的颗粒会导致AML-M3的误诊。
但FCM的数据提供了一些有价值的信息避免这个错误。
具体总结如下：（1）表达CD14（克隆号leu-M3），尽管表达有所降低；（2）SSC信号降低并且相对分散。
这一点十分重要，因为AML-M3v的SSC信号比较集中，甚至M3v细胞中带有颗粒。
另一重要信息是CD13表达下降甚至缺失而CD33强阳性（一种异常的CD13/CD33表达模式）。
有时AML-M3可能会缺失表达CD13。
对于这些疑难病例需要借助分子遗传学和细胞遗传学诊断工具来建立正确的诊断。
其他标记物如：B cells (CD19, CD20, Kappa, Lambda), CD10(Calla), CD5 (T cells), CD41 (platelet)都是阴性。
光散射图中显示在前向散射光和表示颗粒度的侧向散射光有一群处于中间位置的细胞。
这与组织学检测结果相一致。
（暂无图）将光散射图中的异常细胞放置于CD45/CD14上显示发现CD45阳性并CD14阴性（99%）。
CD45表达强度低于成熟淋巴细胞，可能是由髓系细胞和未成熟幼稚细胞组成。
（暂无图）在HLADR/CD3等高图中发现其中大部分DR阳性（81%）并且CD3阴性（T细胞受体）。
这个表型可见于活化的T细胞和成熟B细胞（CD45强阳性）。
DR表达于绝大多数髓系细胞、B细胞和活化的T细胞。
CD34/CD38图中显示细胞CD34阴性并且CD38阳性。
CD38可见到浆细胞、前B细胞、单核细胞、ALL细胞和绝大多数AML细胞。
此处可排队浆细胞的可能性（CD45阴性），前B细胞还无法排除，单核细胞可排除（CD14阴性）。
CD13/CD15等高图中显示大部分细胞（63%）髓系抗原CD13/CD15阴性。
但此处提供了一丝线索，因为有些细胞（30%）表达低水平CD15。
绝大部分AML M1-M6细胞同时表达CD13和CD15。
从CD33/TdT图中可以肯定这些细胞源自髓系（CD33阳性）。
无细胞表达TdT。
这表明这些细胞是处于极早期的髓系细胞，可能AML-M0/M1。
CD11b/GPA双参数图中也证实了这些细胞早期髓系的属性。
GPA在这些细胞上弱表达。
这种情况可见于早期髓系干细胞。
CD11b可见于单核细胞、粒细胞，NK细胞不表达此抗原。
这些细胞还同时表达CD7。
这使人感觉有误，但现已知早期髓系白血病细胞可偶然同时表达CD7。
将这些结果综合来看支持M0或M1的诊断。
要用流式细胞仪来区分M0和M1现还有困难。
所以还要结合组织学检测的结论，如发现有MPO阳性则支持M1，如阴性则为M0。
M1免疫分型幼稚细胞成群，RALS信号弱。
M1与M0很难区分，但M1 细胞大小及颗粒度较M0稍大，与原粒细胞接近。
至少伴随一种髓系抗原：CD13或CD33。
高表达HLA-DR，CD34阳性但较M0弱,>3%的幼稚细胞表达MPO，较M0多。
不表达CD11B，CD15，CD16等。
M1:CD11B-/+,HLA-DR+,CD13+,CD33+,CD34+,CD14+,MPO+,TdT-/+to+/-M2免疫分型CD45/RALS图中细胞分布广泛与M1不同，这是因为M2细胞已进一步分化幼稚细胞减少，粒细胞增多并与BLAST WINDOWS区域内细胞相连。
因细胞没有明显分群，很难将异常细胞与正常相区分，故设立多个门进行分析检测其成熟度抗原的表达情况。
M2免疫表型与M1类似，HLA-DR，CD33，CD13阳性。
上图中可见幼稚细胞CD33与CD71表达均比成熟粒细胞强。
CD13表达强于CD33。
M2肿瘤细胞弱表达CD15与CD11B,说明细胞已分化。
CD34表达显著降低。
M2肿瘤细胞不表达CD5,CD7和TdT等抗原，如病例伴t(8;21),则经常表达CD19偶表达CD56。
一般肿瘤细胞MPO强阳性。
偶见形态为M2并伴t(8;21)，但CD13-，CD33-，CD14-，而MPO+。
细胞分布广泛，幼稚细胞较M1少。
CD13和CD33阳性，且CD13表达高于CD33。
HLA-DR阳性，CD15弱阳性。
M2肿瘤细胞伴t（8，21）CD19阳性。
M3免疫分型上图为M3V，少颗粒型早幼粒白血病细胞，细胞中颗粒少RALS信号低而集中，SS座标上出现大量肿瘤细胞。
肿瘤细胞大，FS信号强。
通过CD45/RALS双参图可辨别出M3与M3V。
下为经典M3多颗粒细胞的CD45/RALS和SS/FS图。
M3与M3V在免疫表型上无区别。
M3肿瘤细胞特征性地不表达髓系早期标志物CD34和HLA-DR；部分病例中CD9特征性地阳性，但不是完全特异。
CD2在M3与M3V中会出阳性表达，在HLA-DR阴性的病例中，与染色体t(15,17)异常相关。
肿瘤细胞CD33表达比正常粒细胞强与正常单核细胞相似， CD13表达多样。
肿瘤细胞不表达晚期髓细胞分化抗原CD15， CD16和CD11B。
肿瘤细胞完全不表达CD15，与正常早幼粒细胞表达CD15相区别；正常早幼粒细胞细胞周期中含高比例S期细胞，而肿瘤细胞中几乎不见细胞周期。
肿瘤细胞MPO阳性，上图中MPO与LACTOFERIN双染来区分成熟粒细胞。
肿瘤细胞除表达CD2外，很少表达T或B系抗原。
M3肿瘤细胞因其胞浆内多颗粒，细胞具有很强的自发荧光。
M3:CD33+,CD13+,MPO+,CD34-,HLA-DR-,CD11b-,CD14 -,CD15-,TdT-M4免疫分型典型的M4病例CD45/RALS图中会出现一群异常的单核细胞和一群骨髓幼稚细胞，肿瘤细胞较M0，M1细胞的FS和SS信号增强。
有时这两群细胞会相互叠加占据BLAST WINDOWS和成熟单核细胞位置，故难圈出独立成群的肿瘤细胞。
对于M4病例一般都设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据其成熟度的不同，表型也可能互不相同。
本例为M4EO，增多的嗜酸细胞RALS信号与早幼粒相似CD45信号与单核细胞相似，本例中为R4门中紫色细胞。
幼稚细胞群表达CD34，HLA-DR，而异常单核细胞则CD34阴性，HLA-DR阳性。
幼稚细胞CD33阳性，CD14阴性，而异常单核细胞则为CD33阳性，CD14，CD64阳性。
CD64表达如象本图中强阳性表达则为单核细胞特异性标志。
M4肿瘤细胞在CD11B/CD15图中会特征性分布如上，存在幼稚细胞及各期的粒细胞及单核细胞。