实验2凝集反应-ELISA(双抗原夹心法)

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实验报告
玻片凝集反应-ABO血型鉴定
酶联免疫吸附试验（双抗原夹心ELISA）
免 疫 学 实 验 课
贵阳医学院免疫学教研室
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实验内容
1、ABO血型鉴定--玻片凝集反应（1份/1人） 2、乙型肝炎病毒表面抗体检测--ELISA法(1份/1人）
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（一）玻片凝集反应
已知抗血清与未知颗粒性抗原置于 清洁玻片上，在一定的条件下，若两者 相对应，则会发生凝集。本方法主要用 于抗原的定性分析，如菌种鉴定、ABO 血型鉴定等。
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ABO血型鉴定的判断
抗A型标准血清 抗B型标准血清 抗A型标准血清 抗B型标准血清
B 型 A 型
示 意 图
抗A型标准血清 抗B型标准血清 抗A型标准血清 抗B型标准血清
O 型
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AB 型
注意事项
用牙签研磨时，注意防止将抗A血清带到抗 B血清中，反之亦然。
如果凝集现象不太明显时，可用显微镜观察。
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【 步 骤 】
无菌采血，离心2000rpm,3min，取上清作为待测标本(见玻片凝集实验) 反应板中各加入待测标本2滴，同时设阴性、阳性、空白对照孔(NS) （反应板已用纯化HBsAg包被 ） 每孔加入酶标记抗原1滴，37℃孵育30min 手工洗板，弃液拍干，重复5次 每孔加入显色剂A液、B液各1滴，置37℃孵育15分钟 每孔加入终止液1滴，混匀 目测法：与阳性和阴性对照比较，观察颜色深浅判断结果
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乙型肝炎病毒表面抗体的检测 ——双抗原夹心ELISA法
测定原理 采用纯化乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg） 包被反应板，加入待检标本，当标本中存在抗HBs时，该抗体与包被HBsAg结合，再加入辣根 过氧化物酶标记乙型肝炎病毒表面抗原 （ HBsAg –HRP），最后形成HBsAg-抗HBs-酶 标记抗原复合物，加入底物产生显色反应。
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ABO血型系统
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ABO血型鉴定步骤
红细胞悬液的制备（用于血型鉴定及ELISA实验） 1. 取EP管1支，加入5滴生理盐水 2. 消毒耳垂或手指皮肤 3. 用采血针采1-2滴血，加入盛有生理盐水的EP管中混匀 4. 2000rpm，离心3min
取上清用于ELISA实验
5. 取红细胞悬液用于ABO血型鉴定 6. 取已加有抗A血清与抗B血清载玻 片 1张，分别加入待测抗原各 1 滴， 并用牙签混匀。 7. 置室温5 分钟左右观察结果。