血红蛋白的提取和分离(优质课)
血红蛋白的提取和分离经典ppt课件.ppt

(A为正面,B为剖面) 1:样品胶pH6.7 2:浓缩胶pH6.7 3:分离胶pH8.9 4:电极缓冲液pH8.3
10
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
①琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需要事先 处理;电泳后区带易染色,样品极易洗脱,便于定量测定。 ②测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳, 这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小,而非所 带电荷的性质和分子的大小、形状。
实验操作
(一)蛋白质提取和分离步骤 红细胞的洗涤
样品处理 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
粗分离:透析—去除样品中分子量较小的杂质
纯化:用凝胶色谱法除去相对分子质量较大的
杂质
纯度鉴定 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(二)操作过程
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
原理:
当不同的蛋白质通过凝胶时
相对分子质量较小 容易进入
凝胶内部的通道
相对分子质量较大
无法进入凝胶 内部的通道
只能在凝胶外部移动
路程较长 移动速度较慢
路程较短 移动速度较快
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的,因此,篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统
电泳槽
迷你双垂直电泳槽
卧式电泳槽
等电聚焦多用电泳槽
9
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
血红蛋白的提取和分离教案

血红蛋白的提取和分离教案教案一: 血红蛋白的提取和分离教学目标:- 理解血红蛋白的结构和功能。
- 学习血红蛋白的提取和分离方法。
- 掌握实验室中分离血红蛋白的步骤和操作技巧。
教学步骤:引入活动:在开始实验之前,首先向学生介绍血红蛋白的结构和功能,以及为什么需要提取和分离血红蛋白。
1. 血红蛋白的提取:a. 实验材料准备:- 鲜血样本- 磷酸缓冲溶液(pH 7.4)- 离心管- 离心机- 冷藏器b. 实验步骤:1) 将鲜血样本取出,用磷酸缓冲溶液稀释。
2) 将稀释后的样本置于离心管中,离心10分钟。
3) 将离心后的上清液转移至新的离心管中,置于冷藏器中。
2. 血红蛋白的分离:a. 实验材料准备:- 血红蛋白样本- 离心管- pH 4.7缓冲溶液- pH 5.2缓冲溶液- pH 6.0缓冲溶液- pH 7.0缓冲溶液b. 实验步骤:1) 将血红蛋白样本转移到离心管中。
2) 分别加入pH 4.7、pH 5.2、pH 6.0和pH 7.0缓冲溶液,使其达到不同的酸碱度。
3) 转动离心管,使其充分混合。
4) 将混合溶液置于冰箱中冷藏一段时间。
5) 通过离心,收集上层液体,然后分别加入酸、碱溶液,使其达到酸碱中和。
6) 重复以上步骤,直到获得纯净的血红蛋白。
实验注意事项:- 实验过程中要注意安全,佩戴实验室衣物和手套。
- 实验器材要严密封闭,避免反应物外泄。
- 实验后要彻底清理实验场地。
教学总结:通过本次实验,学生可以了解血红蛋白的结构和功能,并掌握了提取和分离血红蛋白的方法。
同时,学生也了解了实验室实验的注意事项和操作技巧。
高中生物5-3血红蛋白的提取和分离优秀课件

方法:缓慢搅拌、低速短时离心
2、血红蛋白的释放:目的:红细胞
血红蛋白溶液
试剂:蒸馏水、甲苯
3、别离血红蛋白溶液: 方法:充分搅拌、高速长时间离心、过滤、分液
分层:
有机溶剂 无色透明的甲苯层 脂类物质 白色脂溶性物质 血红蛋白溶液 红色透明液体
红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物
〔二〕粗别离: 透析 :除去小分子杂质
加样
收集得到的纯化后的蛋白
3.红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成。我们可以选用猪、牛、羊等 动物的血液进行实验,来提取和别离血红蛋白,请答复以下有关问题:
〔1〕实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先参加柠檬酸钠,取血回来,马上进行离 心,收集血红蛋白溶液。
①其中参加柠檬酸钠的目的是____防__止__血__液__凝__固_____。 ②此过程即是样品处理,它应包括红细胞洗涤、____血__红__蛋__白_、的别释离放血红蛋白溶液。
带电分子产生不同的迁移速度
3.类型: 琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳
迁移率取决于净电荷的多少和分子的大小
SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳
迁移率只取决于分子的大小
SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳
阳
阴
极
A
B
C
极
分子的大小: A<B<C
二、实验操作:
〔一〕样品处理
1、红细胞的洗涤: 目的:血液
红细胞
试剂:生理盐水
C.凝胶装填在色谱柱内要均匀,不能有气泡 存在
D.蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较大的 移动速度慢
2、在蛋白质的提取和别离中,关于对样品处理过程中,分 析正确的选项是
A.洗涤过程选用0.1%的生理盐水 B.透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 C. 洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐 D. 洗涤时离心速度过低时间过短,白细胞等会沉淀,达 不到别离的效果.
生物:5.3《血红蛋白的提取和分离》课件(新人教版选修1)

超级记忆法--故 事法
• 鲁迅本名:周树人 • 主要作品:《阿Q正传》、、 《药》、 • 《狂人日记》、《呐喊》、《孔 乙己》 • 《故乡》、《社戏》、《祝福》(图。片来自网络)
• 阿Q吃错了药,发狂地喊着孔乙
超级记忆法-记忆 方法
TIP1:NPC代入,把自己想成其中的人物,会让自己的记忆过程更加有趣 (比如你穿越回去,成为了岳飞的母亲,你会在什么背景下怀着怎样的心情在 背 上刺下“精忠报国”四个字);
1.实践是检验真理的唯一标准。前面你可能觉得自己学的都还不错, 那么最 后这步帮你再次验证,也帮你进一步加深理解;
2.把你学到的内容分享给别人; 3.如果别人通过你的语言能比较容易的理解,说明你掌握的还不错; 4.如果你觉得费了九牛二虎之力,别人却依然搞不懂, 除去语言表达等方面的问题,很大的原因是你自己还没搞清楚这个知识;
如何利用规律实现更好记忆呢?
超级记忆法-记忆
规律
记忆后
选择巩固记忆的时间 艾宾浩斯遗忘曲线
超级记忆法-记忆 规律
TIP1:我们可以选择巩固记忆的时间! TIP2:人的记忆周期分为短期记忆和长期记忆两种。 第一个记忆周期是 5分钟 第二个记忆周期是30分钟 第三个记忆周期是12小时 这三个记忆周期属于短期记忆的范畴。
2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中, 关于蛋白质的叙述,正确的是
A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相 对分子质量较大的蛋白质
B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相 对分子质量较大的蛋白质
C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相 对分子质量较大的蛋白质
D 二者根本无法比较
3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中,不同 蛋白质的电泳迁移率完全取决于
《血红蛋白的提取和分离》【公开课教案】设计

专题5 DNA与蛋白质技术课题5.3 血红蛋白的提取和分离一、【课题目标】(一)知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理(二)过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求,注意按照操作提示进行相关步骤(三)情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式,发展科学素养和人文精神二、【课题重点】凝胶色谱法的原理和方法三、【课题难点】样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】(一)引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者,是细胞内含量最高的有机化和物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢?(二)进行新课1.基础知识蛋白质的物化理性质:形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别,由此提取和分离各种蛋白质。
1.1凝胶色谱法(分配色谱法):(1)原理:(图5-13a)分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部,路程长,流动慢。
(2)凝胶材料:多孔性,多糖类化合物,如葡聚糖、琼脂糖。
(3)分离过程:(图5-13b)混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子*洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。
1.2缓冲溶液(1)原理:由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如H2CO3-NaHCO3,HC-NaC,NaH2PO4/Na2HPO4等),调节酸和盐的用量,可配制不同pH的缓冲液。
(2)缓冲液作用:抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
1.3凝胶电泳法:(1)原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
(2)分离方法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。
《血红蛋白的提取和分离》课件

粗分离
通过离心或过滤去除细胞碎片 和杂蛋白。
鉴定
通过电泳、质谱等技术鉴定纯 度。
PART 04
血红蛋白的应用
血红蛋白在医学上的应用
诊断疾病
血红蛋白可用于检测和诊断各种贫血、血红蛋白病以及与血液相 关的疾病。
输血治疗
血红蛋白可用于制备红细胞输血制剂,为贫血患者提供治疗。
药物研发
血红蛋白作为药物载体,可用于药物的定向输送和释放。
感谢观看
KEEP VIEW
REPORTING
食品工业
血红蛋白可作为天然色素和营养强化剂,用于 食品加工和生产。
农业领域
血红蛋白可作为植物生长调节剂,促进植物生长和提高抗逆性。
PART 05
总结与展望
血红蛋白提取和分离的研究成果总结
血红蛋白提取和分离技术不断完善
随着科技的发展,血红蛋白的提取和分离技术不断得到优化,提高了分离效率和纯度。
血红蛋白结构与功能关系研究取得进展
血红蛋白在生物工程中的应用
生物传感器
血红蛋白可用于生物传感器制造,检测环境中的有害 物质。
生物燃料
血红蛋白可应用于生物燃料的合成,提高燃料的能量 转化效率。
生物制药
血红蛋白可用于药物的分离和纯化,提高药物的纯度 和产量。
血红蛋白在其他领域的应用
水体和土壤。
血红蛋白的提取
血红蛋白提取的方法和原理
血红蛋白提取的方法
硫酸铵分级沉淀法、离子交换法、层 析法等。
血红蛋白提取的原理
基于不同条件下蛋白质的溶解度不同 ,通过改变溶液的pH值、离子强度等 条件,将血红蛋白从其他蛋白质中分 离出来。
血红蛋白提取的实验材料和试剂
实验材料
讲课—血红蛋白的提取和分离课件

特别提醒
底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮
塞的凹穴底面,否则难以铺实尼龙网,还
会导致液体残留,蛋白质分离不彻底。
(2)凝胶色谱柱的装填(本实验使用的凝胶是交联 葡聚糖凝胶) ①固定:将色谱柱垂直固定在支架上
②装填:将凝胶悬浮液一次性装填入色谱柱内
③洗涤:用磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12 h
(3)样品的加入和洗脱 ①调整缓冲液面:与凝胶面平齐
b.加样:用吸管小心地将1 mL透析后的样品加到 色谱柱的顶端,注意不要破坏凝胶面。 c.加样后:打开下端出口,使样品渗入凝胶床内. ②洗脱:加入____________,打开下端出口,进行 磷酸缓冲液 洗脱。 4.纯度鉴定:在鉴定的方法中,使用最多的是 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。 五、操作提示 离心速度 1.红细胞的洗涤:洗涤次数、________与离心时 间十分重要。洗涤次数过少,无法除去血浆蛋白: 白细胞 离心速度过高和时间过长会使_______等一同沉淀, 达不到分离效果。
2.色谱柱填料的处理:商品凝胶使用前需直接 放在洗脱液中膨胀,可以将加入其中的湿凝胶用 沸水浴 ________加热,加速膨胀。 3.凝胶色谱柱的装填:在装填凝胶柱时,不得 有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱 次序,降低分离效果。 均匀一致 4.蛋白质的分离:如果红色区带__________地 移动,说明色谱柱制作成功。
重点回顾: 血红蛋白的提取和分离
蛋白质的提取和分离一般分四步: 样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定。 1.样品处理 (1)红细胞的洗涤 ①采集血样→②低速短时间离心→③吸取血浆→④ 生理盐水洗涤→⑤低速离心→⑥重复④⑤步骤三次。 特别提醒 (1)洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白,以利于后续 步骤的进行。 (2)离心时转速要低,时间要短,一般为500 r/min, 离心2 min。 (3)洗涤三次后,如上清液仍有黄色,可增加洗涤 次数。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
50cm高
(3)样品加入与洗脱
①调节缓冲液面:打开下端出口,使柱内缓冲液缓慢下降 到与凝胶面平齐,关闭出口。 ②滴加透析样品:吸管吸1ml样品加到色谱柱的顶端,滴加 样品时,吸管管口贴着管壁环绕移动加样,同时注意不要破坏 凝胶面。 ③样品渗入凝胶床:加样后打开下端出口,使样品渗入凝 胶床内,等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口。 ④洗脱:小心加入pH=7.0 的20mmol/l的磷酸缓冲液到适当 高度,连接缓冲液洗脱瓶,打开下端出口进行洗脱。 ⑤收集:待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,用试管收集 流出液,每5ml收集一试管,连续收集。(在分离过程中,如 果红色区带均匀一致的移动,说明色谱柱制作成功) ⑥注意:正确的加样操作:1、不要触及并破坏凝胶面。2、 贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。
血红蛋白是有色蛋白,因此在凝胶色谱分离时可以通过 观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋 白的分离过程非常直观,大大简化了实验操作。
实验结果分析与评价
1、你是否完成了对血液样品的处理?你能 描述处理后的样品发生了哪些变化吗?
观察处理的血液样品离心后是否分层,如果分层 不明显,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原 因。 此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和 淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后 续血红蛋白的提取纯度。
凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
基础知识
(二)缓冲溶液 1.概念:
在一定的范围内,凡是能够抵制外加少量 强酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不 变的混合溶液。
2.作用:
能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影 响,维持PH基本不变。
基础知识
(二)缓冲溶液 3.缓冲溶液的配制:
通常由1-2 种缓冲剂溶解于水中配制而 成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同 PH范围内使用的缓冲液。
水 分
血 液
固体物质: 血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等 白细胞 两个α-肽链 血细胞 血小板 红细胞 血红蛋白 两个β一肽链 (最多) (90%) 四个亚铁血红素基团
血红蛋白的特点:
血红蛋白 两个α-肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团
每个肽链环绕一个亚铁血红素基团, 此基团可携带一分子O2或一分子CO2,
(一)蛋白质提取和分离步骤
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
(二)操作过程
1.样品处理:
可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的 血液来分离血红蛋白。
1.提问:用鸡的红细胞提取DNA,用猪、牛、羊的 红细胞提取血红蛋白的原因是什么? 鸡的红细胞具有细胞核,含有DNA,便于进行DNA 的提取;人的红细胞无细胞核,结构简单,血红蛋 白含量丰富,便于提取血红蛋白。 2.提问:血液有哪些成分? 血浆
(1)红细胞的洗涤:
①目的: 去除杂质蛋白,利于后续血红蛋白的分离纯化. ②操作: 1、采集血样 2、低速短时间离心(速度越高和时间越长,会使白细 胞等一同沉淀,达不到分离的效果) 3、吸取血浆:上层透明的黄色血浆。 4、盐水洗涤:下层暗红色的红细胞+五倍体积的0.9% 的NaCl溶液洗涤,搅拌10min 5、低速短时间离心: 6、重复3、4、5步骤三次 上清液中已没有黄色:红细胞洗涤干净。
2.凝胶色谱操作:
(2)凝胶色谱柱的装填
①凝胶的选择: A、材料:交联葡聚糖凝胶(G-75)。 B、代表意义:“G”表示凝胶的交联程度,膨胀程度 及分离范围。 75表示凝胶的得水值,即每克凝胶膨 胀时吸水7.5克。 ②凝胶的前处理: 配置凝胶悬浮液: 计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中 充分溶胀后,配成凝胶悬浮液。
洗涤次数过少,无法除去血浆蛋白。
(2)血红蛋白的释放:
加蒸馏水到原血液体积, 加40%体积的甲苯 (溶解细胞膜)
置于磁力搅拌器搅拌10min(加速细胞破裂)
红细胞破裂,释放出血红蛋白
(3)分离血红蛋白溶液:
①过程:将搅拌好混合液转移到离心管内,以2000r/min的速 度离心10 min。
②试管中溶液层次:
①当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时, 相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通 道,路程较长,移动速度较慢;②而相对分子量 较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对 分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。③依 据的特性是:蛋白质分子量的大小。
4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程
③凝胶色谱柱的装填方法: A、固定:将色谱柱装置固定在支架上。 B、装填:将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱 内,装填时轻轻敲动色谱柱,使凝胶填装均匀 注意:
1、装填时尽量紧密:降低凝胶颗粒之间的空隙。
2、装填凝胶柱时不得有气泡存在:因为气泡会搅 乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。
(2)凝胶色谱柱的装填
(3)样品加入与洗脱
注意:正确的加样操作是:1、不要触及并破坏凝胶面。 2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。
收集得到的纯化后的蛋白
思考下面的问题:
1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓 冲液处理的目的是什么? 让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持结构和 功能正常。 2、与其他蛋白质相比,血红蛋白有什么特点? 这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示?
丙烯酰胺和交联剂
N,N’-亚甲基双丙烯酰胺(形成交联)
N,N’-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应
2.原理:
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取于 它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。
3. SDS作用机理:
SDS能使蛋白质发生完全变性。解聚成单 条肽链,因此测定的结果只是单条肽链的分 子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS 复合物,SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白 质分子原有的电荷量。因而掩盖了不同种蛋 白质间的电荷差别,使电泳迁移率完全取决 于分子的大小。
4.提问:在本课题中使用的缓冲液是:____ , 其目的是: 磷酸缓冲液
利用缓冲液模拟细胞内的PH环境,保证血 红蛋白的正常结构和功能,便于观察(红色)和 科学研究(活性)
(三) 电泳:
2.原理:
基础知识
1.概念:带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
①许多重要的生物大分子,如多肽、核酸 等都具有可解离的基团,在一定的PH下,这些 基团会带上正电或负电。②在电场的作用下, 这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极 移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带 电性质的差异以及分子本身的大小,形状的不 同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实 现样品中各种分子的分离。
(4)透 析:
①过程: 取1ml的血红蛋白溶液装 入透析袋中,将透析袋 放入盛有300ml的 20mmol/l的磷酸缓冲液 中(pH为7.0),透析 12h
1mL
20mmol/L磷酸缓冲液
②目的: 除去样品中分子量较小的杂质和离子。 或用于更换样品的缓冲液。
透析过程动画演示
利用透析袋透析
2.凝胶色谱操作:
(1)凝胶色谱柱的制作:
①取长40厘米,内径1.6厘米的玻璃管,两端磨平。 ②底塞的制作: 打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网,再用 100目尼龙纱包好,插到玻璃管的一端。注意事项:玻璃管的 上部不得超出橡皮塞的凹穴底面,否则难以铺实尼龙网,还 会导致液体残留,蛋白质分离不彻底。 ③顶塞的制作:打孔→安装玻璃管。 ④组装:将上述三者按相应位置组装成一个整体。 ⑤安装其他附属结构。
(3)样品加入与洗脱
注意:正确的加样操作是:1、不要触及并破坏凝胶面。 2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。
三、实验结果分析与评价
1、你是否完成了对血液样品的处理?你能描述处 理后的样品发生了哪些变化吗?
观察你处理的血液样品离心后是否分层(见教科书图518),如果分层不明显,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋 白的原因。此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋 巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白 的提取纯度。
3、提取分离方法
凝胶电泳法
基础知识
(一) 凝胶色谱法(分配色谱法) 1.概念:
根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小, 利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来进行 分离。
2.凝胶:
大多数凝胶是由多糖类化合物(如葡聚糖或 琼脂糖)构成的多孔小球体,内部有许多贯穿的 通道。
基础知识
(一) 凝胶色谱法(分配色谱法) 3.凝胶色谱法的原理
第1层(最上层):甲苯层(无色透明); 第2层(中上层):脂溶性物质沉淀层(白色薄层固体); 第3层(中下层):血红蛋白的水溶液层(红色透明液体); 第4层(最下层):杂质沉淀层(暗红色)。 ③分离: 滤纸过滤:除去脂溶性沉淀层, 分液漏斗中静置:分出下层的红色透明液 体。
试管中溶液层次
甲苯层(无色透明) 白色薄层固体 红色透明液体 杂质沉淀层(暗红色)
血红蛋白的提取与分离
基础知识
1.分离生物大分子的基本思路:
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物 理或化学性质的生物大分子。
2.蛋白质分离和提取的原理:
根据蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和 大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质 和对其他分子的亲和力等等,可以用来分离不同种 类的蛋白质。 凝胶色谱法
2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生?你 的色谱柱装填得成功吗?你是如何判断的?
1、由于凝胶是一种半透明的介质,因此可以在凝 胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯,检查凝胶是 否装填得均匀。 2、加入大分子的有色物质,例如蓝色葡聚糖— 2000或红色葡聚糖,观察色带移动的情况。如果色 带均匀、狭窄、平整,说明凝胶色谱柱的性能良好。
(2)凝胶色谱柱的装填
④洗涤平衡:装填完毕后, 立即用缓冲液洗脱瓶,在 50cm高的操作压下,用300ml 的20mmol/l的磷酸缓冲液 (pH为7.0)充分洗涤平衡12 小时。注意:1、液面不要低 于凝胶表面,否则可能有气 泡混入,影响液体在柱内的 流动与最终生物大分子物质 的分离效果。2、不能发生洗 脱液流干,露出凝胶颗粒的 现象。