阵发性睡眠性血红蛋白尿症的实验室诊断

阵发性睡眠性血红蛋白尿症的实验室诊断【关键词】血红蛋白尿；实验室；诊断

［关键词］血红蛋白尿；实验室；诊断

Laboratory Diagnosis of A hair sleep Hemoglobin Urine Disease

Key words:Hemoglobin urine; Laboratory; Disgnosis 阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)是一种后天获得性造血干细胞基因突变引起的溶血性疾病,异常血细胞因缺乏一组通过糖肌醇磷脂连接在细胞表面的膜蛋白(GPI),导致性能发生变化。临床可表现为血管内溶血、栓塞、全血细胞减少，有时可出现骨髓衰竭［1］。由于大多数 PNH患者病态细胞与正常细胞同时存在，使得本病的诊断比较困难。近年来，随着对PNH的发病机制的深入研究，检测技术取得了突破性的进展。现就PNH的实验室诊断技术综述如下。

1 初筛试验

1.1 尿含铁血黄素试验(Rous试验)

PNH属于血管内溶血，所以造成大量血红蛋白随尿液排出，当这些尿液经过肾脏滤过时，部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮细胞，当细胞脱落时,随尿排出即成为含铁血黄素尿。这些铁离子可与亚铁氰化钾作用产生沉淀反应，Rous试验是通过此原理检测含铁血黄素尿。Rous试验阳性可提示慢性血管内溶血，且无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内溶血，本试验结果均呈阳性。但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，但上皮细胞内尚未形成可检出的含铁血黄素，

此时试验呈阴性反应［2］。

1.2 热溶血试验

本实验是将患者的红细胞与自身含补体血清，在37 ℃下孵育。由于葡萄糖分解产酸而使血清酸化，使对补体敏感有内在缺陷的红细胞溶解，此试验方法简便，易行。保温6 h其溶血常超过500 mg ／100 ml血液。正常人无溶血发生，其他溶血性贫血患者溶血少于100 mg／100 ml血液，一般低于50 mg／100 ml血液。自身免疫性溶血性贫血此试验也可阳性，但阳性率比PNH低［3］。

1.3 糖水试验

PNH患者的红细胞在低离子强度的蔗糖溶液中对补体敏感性增强,经孵育,补体与红细胞膜结合增强,蔗糖溶液进入红细胞内,从而导致渗透性溶血。本实验敏感性高，约有88％的PNH呈阳性反应。日本学者认为该试验是最好的初筛试验。但本实验的特异性稍差，在自身免疫性溶血性贫血和巨幼细胞性贫血时可出现假阳性反应［4］。

2 传统确证试验

2.1 酸化血清溶血试验(Ham试验)

1937年Ham建立的酸化血清溶血试验曾一度被国外作为PNH 的唯一确诊试验。该试验原理是由于PNH病态红细胞在pH 6.4的条件下易被替代途径激活的补体溶解，而正常红细胞不被溶解，无溶血现象。本实验有较强的特异性［5］。但球形红细胞会出现Ham试验假阳性。张之南等［6］通过研究发现,不能因Ham试验的一次结果而否定诊断,因为同一患者初次及随后Ham试验检查结果可以不同。在作者所

研究的病例中,只有一部分患者Ham试验持续阳性。对于Ham试验阴性者,有作者［7］认为除青壮年外,其他溶血的原因找不到缺铁原因的要反复检查Ham试验,还要结合其他诊断方法。

2.2 蛇毒因子(CoF)试验

是用从眼镜蛇中提出的一种蛇毒因子，它本身没有溶血作用，但可在血清成分的协同下通过替代途径激活补体，在这种体系中PNH 的异常红细胞被溶解［8］。有作者通过研究提示CoF溶血试验可作为地中海贫血、自身免疫性溶贫、缺铁性贫血与PNH的鉴别诊断试验之一。此试验在某种程度上比Ham试验敏感，比糖水试验特异性强。该试验操作简便、经济。对某些临床上表现为溶血，而Ham试验阴性的病例，是一种有助于提高诊断的好方法。

2.3 补体溶血敏感试验

用冷凝集素或抗人红细胞膜抗体致敏红细胞，通过经典途径激活补体，观察能使红细胞溶解所需要的补体量，判断红细胞对补体的敏感程度，可将PNH红细胞分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。每例PNH患者的三型细胞，其比例不一，而且同一患者在病程的不同时期此三型红细胞的比例也不同，因此通过测定这三型红细胞所占的百分率，来了解患者病情的发展及治疗效果。本实验敏感性和特异性较高，但操作较繁琐［9］。

3 新型确证试验

以上所介绍的为传统的PNH诊断方法,这些方法仅限于测定红细胞对补体的敏感度。只有在PNH患者外周血中受累的红细胞达到

一定比例时,这些方法才为阳性。这样就造成部分PNH患者难以确诊。下面介绍的是近些年发展完善的诊断方法。

3.1 衰变加速因子(CD55)和反应性溶血膜抑制物(CD59)的检测

PNH溶血发作的主要原因是红细胞膜表面缺乏补体调节蛋白，如CD55和CD59［10］。使红细胞对补体敏感，且CD55，CD59存在于所有系列的血细胞中，并与临床表现关系密切。随着流式技术的发展，我们可以运用双色荧光技术检测PNH及其他血液病患者红细胞CD55和CD59。当PNH患者的CD59阴性细胞占3％时即可检出，较前所述方法敏感性高。在PNH患者的外周中CD59阴性红细胞所占的比例较CD55阴性细胞要高，故CD59单抗比CD55单抗在诊断时更敏感［11］。在PNH克隆的发展过程中，首先累及的是粒细胞，其次为单核细胞和红细胞，最后为淋巴细胞。因此粒细胞CD59阴性最早检出，故粒细胞CD59的检测对PNH有早期诊断的价值，这比Ham试验阳性为早。另外，异常中性粒细胞的数量受输血的影响也较少。由于PNH的异常细胞起源于造血干细胞，当外周血尚无CD59阴性细胞时，骨髓中可能已经有CD59阴性细胞，因此检测骨髓比外周血更有意义［12］。此试验方法虽特异性高，但流式细胞仪及CD55、CD59抗体价格较高。 3.2 嗜水氧单胞菌毒素(HEC)溶血试验

其原理是利用HEC毒素能特异性与细胞膜上GPI锚连接蛋白结合并立即聚合成多聚体，插入细胞膜的脂质双层，在膜上形成孔洞细胞使渗透压改变而使细胞溶解［13］。由于PNH患者细胞膜上缺乏