高效液相色谱讲解ppt

实
（1）单浓度点测定
验
（2）多浓度点测定
原
（3）标准曲线法测定
理 （4）吸收系数比值法
（1）和（2）法较为简捷，可以快捷地量化特定杂质与主成 分紫外吸收特征的差异。
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
本实验中，测定校正因子后，取含有内标物的待测组分溶液
进样，记录色谱图，根据内标物（土霉素）与待测溶液色谱
验
染，如腹腔、消化道、女性生
原 理
殖系、下呼吸道、皮肤及软组
织等部位的厌氧菌感染，还可
甲硝唑
用于口腔厌氧菌感染。
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离 检测未知样品中甲硝唑的含量。
实Байду номын сангаас验 反相高效液相色谱 RP-HPLC 原 理
固定相：非极性，例如十八烷基键合硅胶 流动相：极性，例如甲醇和乙腈 目前是液相色谱最主要的分离模式
仪器分分析析实化验学实验
东北大学 化学系
高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 • 熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能 验 • 了解流动相的选择依据及配制方法 目 的 • 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
甲硝唑，主要用于治疗或预
实
防厌氧菌引起的系统或局部感
验
数
根据该数据计算未知浓度的甲硝唑溶液的浓度
据
实验报告中需展示计算过程,并完成思考题。
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
将虚拟仿真平台提供的数据截图或保存
实 将数据的图片插入实验报告中
验
数
根据该数据计算未知浓度的甲硝唑溶液的浓度
据
实验报告中需展示计算过程。
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实
验
仪
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 验 仪 器
紫外检测器 21
高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 验 仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 验 仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 验 仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 验 仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
① C18色谱柱能成分分离甲硝唑和土霉素的原理
实
剂定容至刻线，摇匀，获得1mg/ml的内标物储备液。
验 对照品储备液的配制 步
骤
分析天平准确称取0.0250g甲硝唑，转移至烧杯后加入10ml甲醇
试剂溶解。溶解后转移至25ml容量瓶（#2容量瓶），用甲醇试
剂定容至刻线，摇匀，获得1mg/ml的对照品储备液。
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
甲硝唑定性分析
用于校正因子的测定。后续实验步骤请在做完虚拟仿真试验后，
在撰写实验报告时补充完整）
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
样品测定
分别准确移取待测移取1ml 土霉素储备液（#1容量瓶）及1ml未
知浓度的甲硝唑待测溶液 ，转移至25ml容量瓶（#5容量瓶) ，加
实
超纯水定容至刻线，摇匀。（后续实验步骤请在做完虚拟仿真试
相对校正因子，即通常所讲的校正因子。
f = As/ms Ar/mr
其中：
As：为内标物的峰面积或峰高 Ar：为对照品的峰面积或峰高 ms：为内标物的量（土霉素） mr：为对照品的量（甲硝唑）
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
对照品
实 验 原 理
甲硝唑
内标物
土霉素
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
校正因子的测定方法
验
烧杯、玻璃棒。。。（实验报告里，请依据虚拟仿真试验实际
仪
情况补充完整）
器
与 实验试剂：
试 剂
土霉素，甲硝唑，甲醇、超纯水。。。（实验报告中请补充完整）
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
内标物储备液的配制
分析天平准确称取0.0250g土霉素，转移至烧杯后加入10ml甲醇
试剂溶解。溶解后转移至25ml容量瓶（#1容量瓶），用甲醇试
思 是什么？ 考 ② 紫外检测器是否能分离所有的有机物质？ 题
③ 实验中，若获得的色谱峰面积太小，应该如何 改善实验条件？
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验后，在撰写实验报告时补充完整）
验
色谱操作条件的制定
步
骤
流动相：
流动相比例
流速：
检测波长：
柱温：
进样量：
请在最终的实 验报告中，请 根据虚拟仿真 平台的设定将 以上色谱操作 条件补充完整
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
将虚拟仿真平台提供的数据截图或保存
实 将数据的图片插入实验报告中
打印机
电脑
器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
流动相
实 验 仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
真空脱气机
实 验 仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实
输液系统，四元泵
验
仪 器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实
验
仪
器
自动进样器
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实 验 仪 器
柱温箱，色谱柱固定相
移液枪移取1ml 甲硝唑储备液（浓度为1mg/mL ）于25mL容量
瓶（#3)，加超纯水定容至刻线，摇匀，用于定性分析。（后续实
实 验步骤请在做完虚拟仿真试验后，在撰写实验报告时补充完整）
验 校正因子的测定
步
骤
移液枪分别移取1ml 土霉素储备液（#1容量瓶）及1ml对照液
（#2容量瓶）于25mL容量瓶（#4)，加超纯水定容至刻线，摇匀，
正相色谱：极性固定相和弱极性流动相所组成
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
校正因子
HPLC定量测定中，物质的检测量m与色谱响应值（峰面积等）
实
A之间的比值称为绝对校正因子，即单位响应值（峰面积等） 所对应的被测物质的量（浓度或质量）
验
原 相对校正因子，f
理
某物质r与所选定的参照物质s的绝对校正因子之比，即为
实
峰的响应值，计算待测组分的含量。
验
原 理
f = As/ms Ar/mr
mi = f X
Ai As/ms
其中： As：为内标物的峰面积或峰高 Ai：为待测物的峰面积或峰高 ms：为内标物的量（土霉素） mi：为待测物的量（未知浓度的甲硝唑）
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高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实验仪器及材料：
实
高效液相色谱仪、C18色谱柱、分析天平、胶头滴管、移液枪、