微生物的分离纯化 ppt课件
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实验二微生物的分离纯化_图文_图文
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
实验二微生物的分离纯化_图文_图文.ppt
内容提要
• 分离 • 纯化 • 形态观察
（1）接种
• 半固体培养基：穿刺接种 • 液体培养基接种 • 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜
面划线接种 • 浅盘固体接种
划线接种注意要点
• 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
（4）菌种保藏
• 最常见的保藏方法：斜面 • 细菌的保藏：甘油保藏 • 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏
菌种保藏的方法
菌 种 保 藏 方 法
连续在培养基上（内）移种
生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
固体斜面
湿法 半固体琼脂柱
真菌分离
• 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落 分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是 利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此 限制真菌的迁涉生长。
• 一般采用PDA培养基 • 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分
离。 • 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分
离培养时应加以考虑。
（2）纯化
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l 、2天。
3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应 调节到与试样的生态系统参数值相近。
现代食品微生物ppt整理
微生物的分离与纯化:从自然界或混有杂菌的培养体中将所需要的微生物提纯出来的获得纯培养的方法。
分离：从存在于自然界的混合菌群中分离出一种微生物，并加以培养。
选择培养分离：通过抑制大多数微生物的生长或者造成有利于该菌生长的环境，再通过稀释平板方法进行微生物纯培养的分离技术。
生长曲线：将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的液体培养基中，在适宜条件下培养，定时取样，测菌量。
以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。
代时：单个细胞完成一次分裂所需要的时间。
产量常数：表示微生物对基质利用效率的高低，Y=菌体干重/消耗营养物质的浓度。
恒浊培养：在恒浊器内，调节培养基流速，使细菌培养液浊度保持恒定的连续培养方法。
恒化培养：以恒定流速使营养物质浓度恒定而保持细菌生长速率恒定的方法。
细胞固定化:是通过包埋法、微胶囊法、吸附法等将细胞固定在载体的内部或表面，加入营养液及合适的培养条件，得到代谢产物。
优点：可提供高密度的细胞；减少细胞的流失，反复利用；简化细胞与代谢产物的分离工艺。
缺点：成本高；易污染；物质传递阻力大；只能用于细胞分泌型产物的发酵。
同步培养法：能获得处于同一生长阶段的群体细胞的培养方法。
同步生长：运用同步培养技术，控制微生物生长，使之处于同一生长阶段并同时分裂。
高密度培养：指微生物在液体培养基中细胞群体密度超过常规培养10倍以上时的生长状态或培养技术。
选取最佳培养基成分和各成分含量;补料;提高溶解氧的浓度;防止有害代谢产物的生成。
灭菌：采用任何强烈理化因素使物体内外部的一切微生物永远丧失生长繁殖能力的措施。
杀菌：菌体虽死，形体尚存。
溶菌：菌体被杀死以后，细胞自溶、裂解而消失。
消毒：采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分的病原菌，而对被消毒的对象基本无害。
防腐：采用某种理化因素完全抑制微生物的生长繁殖（制菌作用）化学治疗：指具有高度选择力（对病原菌具高度选择力而对其宿主基本无毒）的化学物质来抑制宿主体内的病原微生物的生长繁殖，达到治疗宿主疾病的目的的一种措施。
土壤中微生物的分离_PPT幻灯片
• 实验目的：
1、学会倒平板 2、了解土壤中微生物分离方法 3、学会稀释涂布平板计数法对微生物计数
微生物的分离及稀释平板法计数
（1）倾注平板法 (混合平板法)
（2）涂布平板法
稀释到适量浓度
倾注或涂布平板
培养
菌落计数
实验安排
• 10-710-610-5 稀释度为细菌培养,肉汤蛋白胨 培养基
• 10-5
• 10-510-410-3 稀释度为真菌培养,马丁氏培养 基
每个梯度3个平行，所以每种菌需要9块平板, 注意标记
• 培养 将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于28度培养箱 中培养3-5d；统计所长出的菌落数；
• 挑菌（纯化） 将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进 行观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离， 培养，检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜 涂片染色镜检是否是单一的微生物），如有杂菌需 进一步纯化、分离。
一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示原 样品中的细胞数。
三、作业
• 利用涂布平板法对土壤样品进行活菌计数
菌落计数 ：
稀
10-4
释
度
10-5
10-6
平板中的 细 1 2 3 平 1 2 3 平 1 2 3 平
CFU数 菌
均
均
均
放 线 菌
真 菌
• 每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数× 10 ） 含菌样品克数
《微生物纯培养技术》课件
纯培养技术可用于病原微生物的分离、鉴 定和药物敏感性试验，为临床诊断和治疗 提供依据。
微生物纯培养技术
02
的基本原理
微生物的分离与纯化
微生物的分离
通过选择合适的培养基和培养条件， 将混合的微生物群体分离成单一的微 生物个体。
微生物的纯化
通过反复划线、稀释接种等方法，获 得纯培养的微生物，即同一菌种或纯 种微生物的培养。
微生物的培养基
培养基的组成
培养基是由水、碳源、氮源、无机盐 等组成，根据不同微生物的需求，培 养基的成分和比例会有所不同。
培养基的制备
根据配方和操作步骤，将各种成分混 合在一起，经过灭菌处理后，制成适 合微生物生长的培养基。
微生物的培养条件
温度
不同微生物对温度的需求不同，适宜的 温度可以促进微生物的生长和代谢。
生理生化特性分析
测定微生物的生理生化特性，如氧化酶试验 、糖发酵试验等。
应用前景探讨
探讨微生物纯培养技术在生产、科研等领域 的应用前景和潜在价值。
微生物纯培养技术04Fra bibliotek的应用实例
在医学领域的应用
抗生素生产
01
微生物纯培养技术用于分离和培养具有抗生素产生能力的菌株
，为医学领域提供大量抗生素。
疾病诊断
《微生物纯培养技术》 ppt课件
目 录
• 微生物纯培养技术概述 • 微生物纯培养技术的基本原理 • 微生物纯培养技术的实验操作 • 微生物纯培养技术的应用实例 • 微生物纯培养技术的挑战与展望
微生物纯培养技术
01
概述
微生物纯培养技术的定义
01
微生物纯培养技术是指通过一定 的物理、化学手段，将自然界中 混杂的微生物群体分离出来，获 得纯种微生物的技术。
实验十二---土壤中微生物的分离纯化-PPT
三、实验器材
1、土壤样品（自带） 2、培养基：淀粉琼脂培养基（高氏Ⅰ号培养基），牛 肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基。 3、溶液和试剂：10％酚，链霉素，盛9ml无菌水的试 管，盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶。 4、仪器和其他用品：无菌玻璃涂棒，无菌吸管，无菌 培养皿等。
四、操作步骤
五、实验报告
１、将培养后菌落计数结果填入表格（实验教材P34表II-5） ２、你所做的涂布平板法是否较好地得到了单菌落？如果不 是，请分析其原因。 ３、在３种不同的平板上你分离得到那些类群的微生物？简 述它们的菌落形态特征。
六、思考题
1、如何确定平板上单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。 2、如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样，分离培养基有何 特点？说明理由。 3、怎样判断稀释涂布平板计数数据是否可靠？需要掌握哪几个关键？ 4、为什么高氏Ⅰ号培养基和马丁氏琼脂培养基中要分别加入酚和链霉 素？如果用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基分离一种对青霉素具有抗性的细 菌，你认为应如何做？ 5、某单位希望检测一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2种可行 的检测方法。
2、稀释土样
制备土壤稀释液称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠 的三角烧瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用 一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液注入盛有9ml无菌水的试管中， 吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取 1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、103、10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤溶液。
由于土壤具备了各种微生物生长发育所需要的营养、水分、空气、 酸碱度、渗透压和温度等条件，所以成了微生物生活的良好环境。可以 说，土壤是微生物的“天然培养基”，也是它们的“大本营”因此，土壤是 微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可与从 中分离、纯生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。 因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征 等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征 （产酸产气情况、染色情况、营养要求、氧气需求、酸碱度、渗透压和温度等） 鉴定方能得到。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过 程称为微生物的分离与纯化。
微生物的分离与纯化
过滤
矫正pH〔7.0-
7.6〕
分装过滤
灭菌〔121.3℃，20-30
分钟〕
鉴定是否有菌
放入冰
箱冷藏备用
2、因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫 正pH时应比所需的pH高
3、鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养 24小时，然后观察
枯燥箱
细菌过滤器
用于滤过除菌的各式滤器
坐
手提式灭菌锅
式
灭
〔3〕溶解 向烧杯内参加所需的水量，将牛肉膏用 水洗下后，取出硫酸纸弃去。加热搅拌全溶后稍 放冷。
〔4〕调pH值 用酸度计或精细pH试纸测定其pH值， 并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸 或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为 高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
〔5〕分装 根据不同需要，可将配好的培养基分装 入配有棉塞的试管或三角瓶内〔附图1-1〕
养基的一般方法和步骤； 3、了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具
体操作方法； 4、了解土壤微生物的别离纯化的根本原理； 5、学习并掌握微生物别离纯化技术方法。
一、培养基的制备与灭菌
培养基是人工配制的微生物生活环境， 其主要用途是繁殖及别离接种微生物， 传代或保存微生物，鉴别微生物的类属， 研究微生物的生理及生化特性，制造菌 苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养 成分包括微生物生长所需要的水分、碳 源、氮源、无机盐及某些生长因子〔维 生素、辅酶〕等。
3.培养基、无菌水、器皿的灭菌
1.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内， 湿热灭菌。
2.灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。 3.器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。
二、土壤微生物的别离、纯化
土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同 类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物 通过别离进展纯培养，并能对特定类群进展数量 测定。
《生物分离与纯化》课件
阻色谱等。
精细分离的效果取决于目标物质 的性质、分离方法和分离条件的 选择，需根据实际情况进行调整
。
纯化与鉴定
纯化与鉴定的目的是进一步去除杂质，提高目标物质的纯度和鉴定其性质 。
常用的纯化方法有超滤、结晶和电泳等。鉴定方法包括光谱分析、质谱分 析和免疫分析等。
纯化与鉴定的效果取决于目标物质的性质、纯化和鉴定方法的选择以及实 验条件，需根据实际情况进行调整。
离心法
离心法
利用不同物质在离心力场中的沉降速度不同 ，将悬浮液中的物质进行分离的方法。
速率区带离心法
利用不同颗粒在离心力场中的运动轨迹不同 ，将颗粒按大小和密度进行分离。
差速离心法
通过逐渐增加离心力，将不同大小的颗粒分 离开。
密度梯度离心法
在离心管中加入密度梯度介质，使不同密度 的颗粒在离心力场中分离。
实验效率的提高
提高实验效率是生物分离与纯化的关 键，可以缩短实验时间并降低成本。
优化实验流程，如减少样品处理时间 、提高自动化程度等，也可以提高实 验效率。
选择高效的分离方法，如高效液相色 谱、快速色谱等，可以显著提高实验 效率。
06
生物分离与纯化的未来发展
新技术的应用
1 2
人工智能与机器学习
初步分离的目的是将破碎后的细胞混合物分离成 各个组分，如蛋白质、核酸和脂质等。
常用的初步分离方法有离心分离、过滤分离和沉 淀分离等。
初步分离的效果取决于分离方法和分离条件的选 择，需根据实际情况进行调整。
精细分离
精细分离的目的是从初步分离后 的组分中进一步分离出目标物质
，如蛋白质、酶和核酸等。
常用的精细分离方法有亲和色谱 、离子交换色谱、凝胶色谱和排
电泳法
精细分离的效果取决于目标物质 的性质、分离方法和分离条件的 选择，需根据实际情况进行调整
。
纯化与鉴定
纯化与鉴定的目的是进一步去除杂质，提高目标物质的纯度和鉴定其性质 。
常用的纯化方法有超滤、结晶和电泳等。鉴定方法包括光谱分析、质谱分 析和免疫分析等。
纯化与鉴定的效果取决于目标物质的性质、纯化和鉴定方法的选择以及实 验条件，需根据实际情况进行调整。
离心法
离心法
利用不同物质在离心力场中的沉降速度不同 ，将悬浮液中的物质进行分离的方法。
速率区带离心法
利用不同颗粒在离心力场中的运动轨迹不同 ，将颗粒按大小和密度进行分离。
差速离心法
通过逐渐增加离心力，将不同大小的颗粒分 离开。
密度梯度离心法
在离心管中加入密度梯度介质，使不同密度 的颗粒在离心力场中分离。
实验效率的提高
提高实验效率是生物分离与纯化的关 键，可以缩短实验时间并降低成本。
优化实验流程，如减少样品处理时间 、提高自动化程度等，也可以提高实 验效率。
选择高效的分离方法，如高效液相色 谱、快速色谱等，可以显著提高实验 效率。
06
生物分离与纯化的未来发展
新技术的应用
1 2
人工智能与机器学习
初步分离的目的是将破碎后的细胞混合物分离成 各个组分，如蛋白质、核酸和脂质等。
常用的初步分离方法有离心分离、过滤分离和沉 淀分离等。
初步分离的效果取决于分离方法和分离条件的选 择，需根据实际情况进行调整。
精细分离
精细分离的目的是从初步分离后 的组分中进一步分离出目标物质
，如蛋白质、酶和核酸等。
常用的精细分离方法有亲和色谱 、离子交换色谱、凝胶色谱和排
电泳法
微生物的分离纯化
纯 化
也不要使菌体沾污管壁或其它地方。
技 术
3.划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接
触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂。
4.划线要密而不重复，充分利用平板的表面，
划线应占满平皿。
— 1—
食品微生物检验技术
三次便可获得纯种微生物。
— 1—
微生物分离纯化方法
1.稀释平板法 2.涂布平板法 3.平板划线分离法
— 2—
• 微生物分离纯化方法
微
生
物 的 分
1.稀释平板法 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如1:10、1:100、
离 纯 化
1:1000、1:10000…)，然后分别取不同稀释液少许，与已熔 化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过
离 纯 化
成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使 一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其
技
生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是
术
涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒 无菌平
皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释
度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌
液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。
— 1—
• 微生物分离纯化方法
微
生
3.平板划线分离法
物 的 分
把混杂在一起的微生物或同一微生物群体 中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，
离 纯 化
通过分区划线稀释而得到较多独立分布的 单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，
技
通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯
术
种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁
最新微生物分离与纯化技术PPT课件
法，从而获
得若干种微生物纯培养技能。
平板制作的操作注意：
➢融化培养基时不要溢出烧瓶或糊底 ➢无菌操作下，打开培养皿的操作 ➢一根１mL移液管多次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。 移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无菌的。 ➢为什么培养皿要倒置培养
(二)平板划线分离法（以分离细菌为例）
➢ 每组准备两套无菌培养皿,在皿底菌名、班级、组别。 ➢融化培养基，在45-50℃ 恒温水浴锅中备用 ➢制备平板：无菌操作下，打开培养皿，倒入45-50℃融化的 细菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上，培养 基冷凝后即成平板。
➢ 平板划线:无菌操作下,用接种环挑取一环10-1土壤悬浊液, 在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)划线的方式可取下图
➢恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养１-２天后观 察细菌菌落形态。 ➢转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至 纯化
平板划线的操作注意：
➢ 接种换环的使用 ➢ 分区域划线，划完第一个区域，烧掉接种环上的剩余物，
接种环冷却后，通过第一次划线部分，做第二次划线，依 次类推，目的是稀释微生物浓度，使长成单个菌落。
结束语
谢谢大家聆听！！！
13
得若干种微生物纯培养技能。
平板制作的操作注意：
➢融化培养基时不要溢出烧瓶或糊底 ➢无菌操作下，打开培养皿的操作 ➢一根１mL移液管多次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。 移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无菌的。 ➢为什么培养皿要倒置培养
(二)平板划线分离法（以分离细菌为例）
➢ 每组准备两套无菌培养皿,在皿底菌名、班级、组别。 ➢融化培养基，在45-50℃ 恒温水浴锅中备用 ➢制备平板：无菌操作下，打开培养皿，倒入45-50℃融化的 细菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上，培养 基冷凝后即成平板。
➢ 平板划线:无菌操作下,用接种环挑取一环10-1土壤悬浊液, 在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)划线的方式可取下图
➢恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养１-２天后观 察细菌菌落形态。 ➢转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至 纯化
平板划线的操作注意：
➢ 接种换环的使用 ➢ 分区域划线，划完第一个区域，烧掉接种环上的剩余物，
接种环冷却后，通过第一次划线部分，做第二次划线，依 次类推，目的是稀释微生物浓度，使长成单个菌落。
结束语
谢谢大家聆听！！！
13
《发酵产物分离纯化》课件
其他领域
除上述领域外，发酵产物分离纯化还广泛应用于 环保、生物能源等领域。例如，通过分离纯化技 术处理废水中的有害物质，以及从废弃物中提取 生物质能等。
02
发酵产物分离纯化的基本原理
发酵产物的分类与特性
发酵产物分类
初级代谢产物、次级代谢产物
发酵产物特性
化学组成、物理性质、生物活性
发酵产物分离纯化的基本方法
《发酵产物分离纯化》ppt课件
目录 CONTENTS
• 发酵产物分离纯化概述 • 发酵产物分离纯化的基本原理 • 发酵产物分离纯化的工艺流程 • 发酵产物分离纯化的设备与操作 • 发酵产物分离纯化的案例分析
01
发酵产物分离纯化概述
发酵产物分离纯化的定义与重要性
定义
发酵产物分离纯化是指在发酵过程中产生的代谢产物经过提 取、分离、纯化等步骤，得到单一组分的工艺过程。
重要性
发酵产物分离纯化是实现微生物资源利用的重要手段，对于 制药、食品、农业等领域具有重要意义。通过分离纯化，可 以得到高纯度、高质量的产物，满足下游应用的需求。
发酵产物分离纯化的历史与发展
历史
发酵产物分离纯化的历史可以追溯到古代酿造业，如酱油、醋、酒等产品的生 产。随着科技的发展，现代发酵产业逐渐兴起，分离纯化技术也不断进步，出 现了多种分离纯化方法和设备。
利用物质分子量、沸点等性质的差异分离物 质
03
发1
02
03
去除杂质
通过离心、过滤等方法去 除发酵液中的固体杂质和 悬浮物。
调节pH值
根据发酵产物的性质，将 发酵液的pH值调节至适宜 范围，以提高提取和纯化 的效果。
降低黏度
通过加热、稀释等方法降 低发酵液的黏度，有利于 后续处理。
除上述领域外，发酵产物分离纯化还广泛应用于 环保、生物能源等领域。例如，通过分离纯化技 术处理废水中的有害物质，以及从废弃物中提取 生物质能等。
02
发酵产物分离纯化的基本原理
发酵产物的分类与特性
发酵产物分类
初级代谢产物、次级代谢产物
发酵产物特性
化学组成、物理性质、生物活性
发酵产物分离纯化的基本方法
《发酵产物分离纯化》ppt课件
目录 CONTENTS
• 发酵产物分离纯化概述 • 发酵产物分离纯化的基本原理 • 发酵产物分离纯化的工艺流程 • 发酵产物分离纯化的设备与操作 • 发酵产物分离纯化的案例分析
01
发酵产物分离纯化概述
发酵产物分离纯化的定义与重要性
定义
发酵产物分离纯化是指在发酵过程中产生的代谢产物经过提 取、分离、纯化等步骤，得到单一组分的工艺过程。
重要性
发酵产物分离纯化是实现微生物资源利用的重要手段，对于 制药、食品、农业等领域具有重要意义。通过分离纯化，可 以得到高纯度、高质量的产物，满足下游应用的需求。
发酵产物分离纯化的历史与发展
历史
发酵产物分离纯化的历史可以追溯到古代酿造业，如酱油、醋、酒等产品的生 产。随着科技的发展，现代发酵产业逐渐兴起，分离纯化技术也不断进步，出 现了多种分离纯化方法和设备。
利用物质分子量、沸点等性质的差异分离物 质
03
发1
02
03
去除杂质
通过离心、过滤等方法去 除发酵液中的固体杂质和 悬浮物。
调节pH值
根据发酵产物的性质，将 发酵液的pH值调节至适宜 范围，以提高提取和纯化 的效果。
降低黏度
通过加热、稀释等方法降 低发酵液的黏度，有利于 后续处理。
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讨论
2. 以免接种环温度太高，杀死菌种。
讨论
2. 以免接种环温度太高，杀死菌种。
3. 划线后，线条末端细菌的数目比线条起 始处要少，每次从上一次划线的末端开始， 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐 步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来 的菌落。
2.稀释涂布法
2.稀释涂布法
（1）系列稀释操作：
实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
（二）接种纯化大肠杆菌
实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
（二）接种纯化大肠杆菌 接种方法有：
实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
（二）接种纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法
模块2 微生物的纯培养技术 2 微生物的分离纯化
概念
在自然界中，微生物呈混合状态存在，要想获 得所需菌种，则必须把它们从中分离出来并加 以纯化培养。
分离：将特定的微生物个体从群体中或从混杂 的微生物群体中分离出来的技术叫作分离。
纯化：在特定环境中只让 1种来自同一祖先的 微生物群体生存的技术叫作纯化。
概念
分离技术主要是稀释和选择培养。
稀释：是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群 体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使 此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为平板划线 法和稀释涂布法。
选择培养：如果所要分离的微生物在混杂的微生物群 体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时，需要 结合使用选择培养法，即选用仅适合于所要分离的微 生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体，改变 群体中各类微生物的比例，以达到分离的目的。
1.平板划线接种法：
➢ 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成 单个菌落，以获得纯菌。
➢ 方法 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本
菌落
当单个或少数细菌在固 体培养基上大量繁殖时， 便会形成一个肉眼可见 的、具有一定形态结构 的子细胞群体，叫做菌 落。
分区划线生长现象
实验原理
稀释平板分离法：
将待分离样品做系列稀释，使样品中的微生物细胞充 分分散。取合适稀释度的样品与培养基混合，培养 出现菌落。如稀释度适合在培养基平板上即可出现 的单个菌落。
平板划线分离法：
用无菌接种环挑取待分离材料，在平板培养基表面划 线稀释而获得单菌落的方法。
细菌的接种工具
接种针
接种环
涂布器
37℃倒置培养
按浓度捆成一摞
恒温37℃培养
平板菌落计数
讨论
连续划线生长现象
1.平板划线法
讨论
每次使用接种环之前都要进行灼烧， 为什么？
讨论
1.操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上 可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧 接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残 留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直 接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的 增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便 得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死 接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染 操作者。
2.稀释涂布法
（1）系列稀释操作： 依次1mL，注意更换移液管
充分混匀
（2）涂布平板操作
稀释涂布平板法
系列稀释
得10-1
10-2, 10-3的菌悬液
1ml
25g或25mL 样品
1个225mL无菌水
2个9ml无菌水
2.稀释涂布法
倒平板，待平板冷却凝固后再加样
2.稀释涂布法
取菌悬液
将菌液均匀涂布分散