苯丙氨酸和酪氨酸的紫外
末梢血苯丙氨酸及酪氨酸的测定及临床应用
摘要
中文摘要
目的：建立一种简单、快速的反相高效ห้องสมุดไป่ตู้相色谱一紫外检测法测
定末梢血液中的苯丙氨酸与酪氨酸，并探讨该方法用于苯丙酮尿症筛 查的可行性。
方法：末梢血标本与等量５％（ｖⅣ）高氯酸溶液混合处理去除 蛋白后离心取上清液２０９ｌ直接进样分析。用Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ８色谱柱（６．０ｍｍ ×３００ｒａｍ，１０ｂｔｍ）分离；流动相为乙腈一水（体积比５：９５）；流速 １．５ｍｌ／ｍｉｎ；紫外检测波长２１０ｎｍ；室温下测定，１０分钟内完成分析 测定。Ｐｈｅ和Ｔｙｒ峰采用峰保留值比较法和叠加法定性分析，用外标 法测峰面积进行定量分析。同时对蛋白沉淀剂的影响、抗凝剂的选择、 标本采集与保存等分析前期各因素对测定结果的影响进行了探讨。
１２５０９ｍｏｌｆＬ ｆｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９８．８％，ｔｈｅ ｉｎｔｒａ－ａｎｄ ｉｎｔｅｒ－ａｓｓａｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ（ＣＶ）ｗｅｒｅ ２．６％ａｎｄ ４．６％
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｌｏｗｅｒ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ １．０９ｍｏｌ／Ｌ．Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｏｐｔｉｍａｌ ａｓｓａｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｓｕｃｈ
ａｓ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｏｒ，ａｎｔｉｃｏｇｕｌａｎｔ，ｍｅａｎｓ ｏｆｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｉｎｇ ｓａｍｐｌｅｓ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｇｏｏｄ ｔｍｅａｒｉｔｙ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ６ ７～ １５１２９ｍｏｌ／Ｌ ｆｏｒ ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ，ｔｈｅ ｌｏｗｅｒ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ
酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸荧光激发波长
酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸荧光激发波长酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸荧光激发波长1. 引言在生物化学和药物研究领域中，对于酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的荧光特性和激发波长有着重要的研究价值。
这三种氨基酸在生物大分子的结构和功能中起着关键作用，其荧光性质的了解对于理解生物学过程、药物研发和生命科学研究具有重要意义。
本文将从简到繁，由浅入深地探讨这三种氨基酸的荧光特性，帮助读者更深入地理解它们的重要性和应用价值。
2. 酪氨酸的荧光特性在氨基酸中，酪氨酸是一种含有芳香环的氨基酸，它具有较强的荧光性质。
研究表明，酪氨酸的荧光激发波长主要集中在280nm附近，这一特性使得酪氨酸在蛋白质结构和功能研究中具有重要应用。
在蛋白质荧光光谱分析中，酪氨酸的荧光信号可以提供关于蛋白质构象和环境的重要信息，为生物大分子研究提供了重要的手段和方法。
3. 色氨酸的荧光特性与酪氨酸类似，色氨酸也是一种含有芳香环的氨基酸，其荧光特性与酪氨酸有所不同。
色氨酸的荧光激发波长主要集中在近320nm处，相对较长的波长使得色氨酸在蛋白质荧光分析和蛋白质-核酸相互作用研究中具有独特的应用优势。
通过检测色氨酸的荧光信号，可以揭示蛋白质的折叠状态、构象变化以及与其他生物大分子的相互作用情况，为生物学研究提供了重要的实验手段。
4. 苯丙氨酸的荧光特性苯丙氨酸是另一种含有芳香环的氨基酸，其荧光特性也备受关注。
苯丙氨酸的荧光激发波长主要集中在近290nm处，其荧光信号与酪氨酸和色氨酸有所不同，但同样具有重要的生物学意义。
苯丙氨酸作为一种荧光探针，可以用于研究蛋白质的结构和功能，对于生物大分子的荧光标记和活性检测具有重要的应用价值。
5. 总结和展望在本文中，我们对酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的荧光特性和激发波长进行了全面的讨论。
这三种氨基酸在生物大分子研究中具有重要的应用价值，其荧光特性为生物学和药物研发提供了重要的实验手段和方法。
在未来的研究中，我们可以进一步探索这些氨基酸的荧光特性对生物学过程的影响，深化对它们在生物大分子中作用机制的理解，为生命科学研究和药物开发提供更多的科学依据和技术支持。
常用紫外分光光度法测定蛋白质含量
6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。
高效液相色谱-荧光法测定血清苯丙氨酸和酪氨酸
高效液相色谱-荧光法测定血清苯丙氨酸和酪氨酸洪敏;唐爱国【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2004(29)1【摘要】目的:建立高效液相色谱-荧光法测定血清苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)含量.方法:血清标本经高氯酸溶液去蛋白质后,不需要荧光衍生,取上清液20μl直接进样,用Hypersil C8色谱柱(6.0mm×300mm,10μm)分离,流动相为乙腈-水(体积比10:90),流速1.0ml/min,在激发光波长210nm,发射光波长303nm的条件下定量测定Phe和Tyr.结果:Phe线性范围为12.2～1220.0μmol/L,最低检测限为3μmol/L,批内变异系数(CV)为4.07%,批间CV为7.17%,平均回收率102.5%;Tyr 线性范围为5.5～550.0μmol/L,最低检测限为0.8μmol/L,批内CV为2.99%,批间CV为5.23%,平均回收率102.2%.色氨酸、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸等物质不干扰实验.整个分析过程可在30min内完成;测定结果与HPLC-紫外法比较,两者有很好的相关性.结论:HPLC-荧光法能同时测定血清Phe和Tyr浓度,且简便、快速、特异性好.【总页数】5页(P67-71)【作者】洪敏;唐爱国【作者单位】中南大学湘雅二医院检验科,长沙 410011;中南大学湘雅二医院检验科,长沙 410011【正文语种】中文【中图分类】O657.72【相关文献】1.高效液相色谱法快速直接测定血清苯丙氨酸和酪氨酸 [J], 唐爱国2.高效液相色谱-荧光法测定苯丙酮尿症患者血清苯丙氨酸和酪氨酸 [J], 秦立新;洪敏;唐爱国;莫喜明3.高效液相色谱-紫外法测定指血中苯丙氨酸与酪氨酸浓度 [J], 莫喜明;唐爱国4.同步扫描-导数荧光法测定饮料中苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸 [J], 张忆华;郑衍生;姚新华5.高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸 [J], 陈永波;饶斌;覃兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
生物化学(第三版)课后习题详细解答
生物化学（第三版）课后习题详细解答第三章氨基酸提要α-氨基酸是蛋白质的构件分子，当用酸、碱或蛋白酶水解蛋白质时可获得它们。
蛋白质中的氨基酸都是L型的。
但碱水解得到的氨基酸是D型和L型的消旋混合物。
参与蛋白质组成的基本氨基酸只有20种。
此外还有若干种氨基酸在某些蛋白质中存在，但它们都是在蛋白质生物合成后由相应是基本氨基酸（残基）经化学修饰而成。
除参与蛋白质组成的氨基酸外，还有很多种其他氨基酸存在与各种组织和细胞中，有的是β-、γ-或δ-氨基酸，有些是D型氨基酸。
氨基酸是两性电解质。
当pH接近1时，氨基酸的可解离基团全部质子化，当pH在13左右时，则全部去质子化。
在这中间的某一pH（因不同氨基酸而异），氨基酸以等电的兼性离子（H3N+CHRCOO-）状态存在。
某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质pH称为该氨基酸的等电点，用pI表示。
所有的α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应。
α-NH2与2,4-二硝基氟苯（DNFB）作用产生相应的DNP-氨基酸（Sanger反应）；α-NH2与苯乙硫氰酸酯（PITC）作用形成相应氨基酸的苯胺基硫甲酰衍生物（Edman反应）。
胱氨酸中的二硫键可用氧化剂（如过甲酸）或还原剂（如巯基乙醇）断裂。
半胱氨酸的SH基在空气中氧化则成二硫键。
这几个反应在氨基酸荷蛋白质化学中占有重要地位。
除甘氨酸外α-氨基酸的α-碳是一个手性碳原子，因此α-氨基酸具有光学活性。
比旋是α-氨基酸的物理常数之一，它是鉴别各种氨基酸的一种根据。
参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。
核磁共振（NMR）波谱技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。
氨基酸分析分离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极性大小。
常用方法有离子交换柱层析、高效液相层析（HPLC）等。
习题1.写出下列氨基酸的单字母和三字母的缩写符号：精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。
在近紫外区有光吸收的氨基酸
在近紫外区有光吸收的氨基酸
在近紫外区光吸收的氨基酸是许多生物化学和分子生物学研究中的
重要组成部分。
这些氨基酸的光谱特性使得它们可以被用来研究蛋白
质结构和功能的各个方面。
以下列出了几种常见的在近紫外区有光吸
收的氨基酸：
1. 色氨酸（Trp）：色氨酸是一种芳香族氨基酸，具有荧光特性。
在近
紫外区（约300-350纳米）的波长下，色氨酸分子可以吸收光线，并发射出荧光光子。
2. 酪氨酸（Tyr）：酪氨酸也是一种芳香族氨基酸，它在较大波长范围
内吸收光线（约270-290纳米），并具有一定的荧光特性。
3. 苯丙氨酸（Phe）：苯丙氨酸是一个具有疏水性的芳香族氨基酸，在
近紫外区（约260-280纳米）也能吸收部分光线。
4. 组氨酸（His）：组氨酸是一种含氮碱性氨基酸，它在近紫外区也能
吸收部分光线。
除了上述几种，在近紫外区也有其他几种氨基酸能够吸收和散发光线，但它们的光谱特性可能略有不同。
研究员们经常利用这些氨基酸的吸
收和散发光线特性来研究蛋白质的结构和功能，从而更好地了解生命
的本质。
生物化学王镜岩(第三版)课后习题解答
第三章氨基酸提要α-氨基酸是蛋白质的构件分子，当用酸、碱或蛋白酶水解蛋白质时可获得它们。
蛋白质中的氨基酸都是L型的。
但碱水解得到的氨基酸是D型和L型的消旋混合物。
参与蛋白质组成的基本氨基酸只有20种。
此外还有若干种氨基酸在某些蛋白质中存在，但它们都是在蛋白质生物合成后由相应是基本氨基酸（残基）经化学修饰而成。
除参与蛋白质组成的氨基酸外，还有很多种其他氨基酸存在与各种组织和细胞中，有的是β-、γ-或δ-氨基酸，有些是D型氨基酸。
氨基酸是两性电解质。
当pH接近1时，氨基酸的可解离基团全部质子化，当pH在13左右时，则全部去质子化。
在这中间的某一pH（因不同氨基酸而异），氨基酸以等电的兼性离子（H3N+CHRCOO-）状态存在。
某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质pH称为该氨基酸的等电点，用pI表示。
所有的α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应。
α-NH2与2,4-二硝基氟苯（DNFB）作用产生相应的DNP-氨基酸（Sanger反应）；α-NH2与苯乙硫氰酸酯（PITC）作用形成相应氨基酸的苯胺基硫甲酰衍生物（ Edman反应）。
胱氨酸中的二硫键可用氧化剂（如过甲酸）或还原剂（如巯基乙醇）断裂。
半胱氨酸的SH基在空气中氧化则成二硫键。
这几个反应在氨基酸荷蛋白质化学中占有重要地位。
除甘氨酸外α-氨基酸的α-碳是一个手性碳原子，因此α-氨基酸具有光学活性。
比旋是α-氨基酸的物理常数之一，它是鉴别各种氨基酸的一种根据。
参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。
核磁共振（NMR）波谱技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。
氨基酸分析分离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极性大小。
常用方法有离子交换柱层析、高效液相层析（HPLC）等。
习题1.写出下列氨基酸的单字母和三字母的缩写符号：精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。
[见表3-1]表3-1 氨基酸的简写符号名称三字母符单字名称三字单字号母符号母符号母符号丙氨酸(alanine) Ala A亮氨酸(leucine)LeuL精氨酸(arginine) Arg R赖氨酸(lysine)LysK天冬酰氨(asparagine s) Asn N甲硫氨酸(蛋氨酸)(methionine)MetM天冬氨酸(aspartic acid) Asp D苯丙氨酸(phenylalanine)PheF半胱氨酸(cysteine) Cys C脯氨酸(praline)ProP谷氨酰氨(glutamine) Gln Q丝氨酸(serine)SerS谷氨酸(glutamic acid) Glu E苏氨酸(threonine)ThrT甘氨酸(glycine) Gly G色氨酸(tryptophan)TrpW组氨酸His H 酪氨酸Ty Y(histidine) (tyrosine) r 异亮氨酸(isoleucine ) Ile I缬氨酸(valine)ValVAsn和/或Asp Asx B Gln和/或GluGlsZ2、计算赖氨酸的εα-NH3+20%被解离时的溶液PH。
氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
zuozhe
一、 实验目的
（1）掌握紫外–可见分光光度计的工作原理与基本操作。 （2）学习紫外–可见吸收光谱的绘制及定量测定方法。 （3）了解氨基酸类物质的紫外吸收光谱的特点。
二、 实验原理
紫外-可见分光光度法属于吸收光谱法，分子中的电子总是处在某一种运动状 态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。电子由于受到光、热、 电等的激发，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。当这些电子吸收了外来 辐射的能量，就从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。物质对不 同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的入射光的波 长，并纪录该物质在每一波长处的吸光度（A）,然后以波长为横坐标，以吸光度 为纵坐标作图，这样得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。 当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度 I0 与透过光强度 It 之比的 对数与该物质的浓度 c 及厚度 b 成正比。其数学表达式为：
312.87
图 7 对待测波长处的放大图像 根据峰值绘制标准曲线：
仪器分析实验报告
图12 酪氨酸溶液的4阶导数标准曲线 然后带入未知样品在峰值处的一阶导数强度，可以得出c=82.4mg/L。
六、
思考题
（1）本实验是采用紫外吸收光谱中最大吸收波长进行测定的，是否可以在波长较短的吸 收峰下进行定量测定，为什么？ 答：不可以，因为在波长较短的吸收峰处很窄的波长范围内随λ的变化改变很大， 此工作条件难于控制准确一致，将会影响测定结果的精密度和准确度。 （2）被测物浓度过大或过小对测量有何影响？应如何调整？调整的依据是什么？ 答：浓度过大容易超出线性范围，浓度过小则会造成较大的误差。应当在粗略估 计待测浓度之后将其稀释或浓缩至工作曲线浓度范围内后再进行测量。 （3）思考紫外-可见分光光度法应用于蛋白质测量的依据，并设计相应的实验方案，测 定奶粉中蛋白质的含量。
绘制吸收光谱及测定摩尔吸光系数
实验一绘制吸收光谱及测定摩尔吸光系数一.实验目的通过紫外吸收光谱的绘制和摩尔吸光系数的测定，掌握Agilent8453 UV-Vis的使用方法。
学习导数光谱计算方法及特点。
二.实验原理1．本实验用Agilent8453型分光光度计绘制氨基酸（苯丙氨酸，色氨酸）的紫外吸收光谱，找出它的吸收峰波长并计算摩尔吸光系数。
CH2CHCOOHNH2CNHCH2CHCHCOOHNH2苯丙氨酸色氨酸紫外分光光度法是利用物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，波长范围为200-400nm的紫外光谱。
各种分子都有其特征的吸收光谱，即吸光度与摩尔吸光系数随波长的变化而变化的规律。
吸收光谱的形状与物质的特征有关，以此进行定性分析。
为了清楚地描述各种物质对紫外区域电磁辐射的选择性吸收的情况，往往需绘制吸收光谱曲线，即吸光度对波长的曲线。
在吸收光谱曲线上可以找到最大吸收峰波长。
根据比尔定律：A = εb c式中A—吸光度ε—摩尔吸光系数b—液槽厚度，单位：cmc—摩尔浓度，单位：mol/l摩尔吸光系数可按下式计算：Abc ε=2．导数分光光度法：利用紫外-可见分光光度计软件系统带有的数学处理功能，对吸收光谱进行处理，可以获得导数光谱。
利用导数光谱进行分光光度测定，称为导数分光光度法。
通常可以获得1-4阶导数光谱。
在各阶导数光谱中，吸光度对波长的微分值与溶液中组分的浓度c保持线性关系：ssd Acdλ∝。
其中s为导数的阶数。
因此，可以利用导数光谱进行定量测定。
导数光谱可用于放大图谱间差别，定性分析中分辨重叠谱带，而且还可以减少定量分析中来自散射、基体、及其它吸收物的干扰影响。
由于导数光谱灵敏度高，因此对于试样纯度检验，多组分混合物的测定，消除共存杂质的干扰和背景吸收，测定混合式样都具有特殊的优越性。
三.实验仪器和试剂1.Agilent8453 UV-Vis分光光度计;2.移液枪(德国BRAND公司生产);3.50ml容量瓶2支; 废液池（烧杯）一只；4.氨基酸储备液：色氨酸0.400 g/l，苯丙氨酸2.00 g/l;5.去离子水四.实验步骤1.吸收光谱的测定（1）用氨基酸储备液及去离子水在50ml容量瓶中配置氨基酸溶液，色氨酸浓度为40mg/l, 苯丙氨酸800mg/l；（2）分别取上述溶液，用1cm石英比色皿，以水作参比溶液，在波长范围为190nm—400nm 间测定他们的吸收光谱。
氨基酸的简介
2、苯异硫氰酸酯(PITC)与氨基得反应。 (Edman试剂,测定氨基酸序列)
3、丹磺酰氯与氨基酸得反应(生成荧光 性强和稳定得磺胺衍生物,常用于蛋白质 和氨基酸得微量分析)
非极性氨基酸(八种)
不带电何得极性氨基酸(八种)
带负电荷得氨基酸(2种)
带正电荷得氨基酸(2种)
1、2、3 不常见蛋白质氨基酸和非蛋白质氨基 酸
有些蛋白质中还含有少数特殊得氨基酸,称为蛋 白质得稀有氨基酸。这些氨基酸都就是正常氨 基酸得衍生物,如弹性蛋白和胶原蛋白中得4-羟 基脯氨酸和5-羟基赖氨酸;肌球蛋白和组蛋白中 含有6-N-甲基赖氨酸;凝血酶原中存在γ-羧基谷 氨酸;酪蛋白中存在磷酸丝氨酸;哺乳动物得肌肉 中存在N-甲基甘氨酸等。蛋白质中得稀有氨基 酸在遗传上就是特殊得,因为她们没有三联体密 码,所有已知得稀有氨基酸都就是在蛋白质合成 后,在常见得氨基酸得基础上经过化学修饰而形 成得。
氨基酸的简介
1、1 氨基酸得一般结构 1、2 氨基酸得分类 1、3 氨基酸得酸碱化学 1、4 氨基酸得特征化学反应 1、5 氨基酸得光学活性和光谱性质 1、6 氨基酸混合物得分离分析
1、1 氨基酸得一般结构
特征: α-碳(与羧酸相邻得碳,Cα )上都有一个氨 基( α-氨基酸 ),此外, Cα 还结合着一个H原子和 一个侧链基团(R)
甘氨酸得解离与等电点——滴定曲线
当甘氨酸在酸性溶液中,她就是以带净得正电荷得形 式存在得,可以看作就是一个二元弱酸,具有两个可 解离得H＋,即－COOH和-NH3+上得H＋。根据上述 甘氨酸得解离方程可得到:
K1、K2为解离常数,当达到等电点时, [Gly+ ]＝ [Gly－ ],即:
则:K1K2=[H+]2 方程两边取负对数: pH=1/2*(PK1+PK2)
常用紫外分光光度法测定蛋白质含量
6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。
酪氨酸色氨酸苯丙氨酸λ=280nm光吸收蛋白质分子中含有芳香
第十二章 蛋白质化学
50
蛋白质颗粒表面的水化膜和电荷
2019/12/20
第十二章 蛋白质化学
51
5.蛋白质的变性与复性
变性：理化因素影响→蛋白质空间构象破坏→蛋
白质理化性质改变，生物学活性丧失
理化因素：加热、紫外线、强酸强碱、有机溶
剂、重金属盐等
可逆变性（复性）：去除变性因素，蛋白质构
COCOOHOH
CHCOHO
COCOOOHH
H2NH2NC CH H HOHO C C H H H H CC NNHH2 2
RR
CHC2HO2 HOH
RR
L-α L-氨-α基-氨酸基 酸
L-甘L-油甘醛油醛
D-Dα-α-氨-氨基基酸酸
人体 内氨基酸均为 ：L-氨基酸
2019/12/20
第十二章 蛋白质化学
第十二章 蛋白质化学
2
（一）氨基酸的结构
氨基酸的共同结构
α-碳原子为手性碳原子 都为L-α-氨基酸（甘氨酸、 脯氨酸除外）
H+H2HHN223NC—N HCC||HC--HO—NO2—HCC—CHαOCC||CO-—OHH_OH2HHH
甘氨脯酸氨R酸
2019/12/20
第十二章 蛋白质化学
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氨基酸的构型也以甘油醛为标准：
第十二章 蛋白质化学
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五、维持蛋白质构象的主要作用力
氢键
范德华力
离子键
疏水键
二硫键
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第十二章 蛋白质化学
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？ 蛋白质一级结构的作用键 ？ 二级结构的作用键 ？ 三级结构的作用键 ？ 四级结构的作用键
氨基酸的五种分类
氨基酸的五种分类
1. 碱性氨基酸：包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸，它们的侧链带有正电荷，具有碱性的特性。
2. 酸性氨基酸：包括天冬氨酸和谷氨酸，它们的侧链带有负电荷，具有酸性的特性。
3. 芳香氨基酸：包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，它们的侧链都含有芳香环结构，有强烈的吸收紫外线的能力。
4. 疏水氨基酸：包括丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、天冬氨酸和酪氨酸等，它们的侧链中没有极性基团，对水相亲和力较小，容易聚集以形成蛋白质的水不溶性核心结构。
5. 极性氨基酸：包括赖氨酸、色氨酸、组氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸和鸟氨酸等，它们的侧链中含有极性基团，与水相互作用力强，容易溶于水，通常在蛋白质的表面出现。
L-酪氨酸和L-苯丙氨酸在732树脂上的吸附平衡
动力学的数学 建模 与数值模拟研 究。 关键词 ： －酪氨酸 ； － Ｌ Ｌ 苯丙氨酸 ； ３ 树脂 ； ７２ 吸附平衡
中图分类号 ： Ｑ ２ Ｔ ９２ 文献标识 码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ７ ５ ０ ｛ ０ ６ １ — ０ ３ ０ １０ — ５Ｘ ２０ ）１ ０８ － ３
收 稿 日期 ：０ ６ Ｏ — ７ ２ ｏ 一 ８ ２
作者简 介： 刘静 １ １ ８ 一 ）女， ￣（９ １ ， 福建福州人 ， 研究生 ， 研究方 向 ： 生化分离。
维普资讯
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２７ｍ下测吸光值 ， ５ｎ 求得溶质的平衡浓度 Ｃ（ｍ ｌ） ｅ ｏＬ。平衡吸附量 以 ｑ（ ｍ ｌ ） ， ｍ ／ ｅｍ ｏｇ表示 并由下式计 算 ： ／ ｑ Ｃ Ｃ）／ （ ） 中： （ ｃ Ｍ １ 式 Ｖ Ｃ 为溶质的初始浓度 ， ｍ ｌ ； ｏ ｍ ｏＬ Ｖ为溶液体积 ， ； ／ ＬＭ为树脂重量 ， ｇ 。
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第 ｌ期（ １ 总第 ２ ０期） １ Ｎ ｌｃ ｒ ｌ １ ） ｏ １ｓ ｉ № １ ｅａ
Ｔ ｅＬｇｔ＆ Ｔ ｘ ｌ Ｉｄ ｓｉｓｏ ｕｉ ｈ ｉ ｈ 福 ｅ建ｅ 轻 ｕｔｅ ｆＦ ｊ ｎ ｔ ｎ 纺 ｉ ｒ ａ
２０ ０ ６年 ｌ 月 １
味精工业是 我国的污染大户之一 ， 每年需要排放大量 的高浓度有机废液 ， 味精废液中有相当数量 的氨基 酸 而在 被排放 ， 这是极大 的资源浪费【 ｌ 】 。目前分离提纯 味精废液 中各种氨基酸还是 味精废液处理 中的一个盲点 。 传统上 Ｌ － 酪氨酸和 Ｌ 苯丙氨酸的制备 方法主要有提取法 、 一 发酵法 和酶转化法等 ， 中离 子交换法因具有高选择性 和操作 简 其 便 的优势而具有 广阔的应用前 景Ｉ， ２ ２７ 型阳离子交换树脂（ １３ 简称为 ７２ ３ 树脂 ） 于提 取氮基酸 。本文研究 了 Ｌ一 常用 酪氨酸和 Ｌ一 苯丙氨酸在 ７２ ３ 树脂上 的吸附平衡 ， 察 了料液初始 ｐ 考 Ｈ值的变化对吸 附量 的影 响 ， 并探讨 了分别 应
仪器分析实验 氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定开课实验室：环境资源楼312【实验目的】1、 掌握紫外分光光度法的分析原理与基本操作，熟悉紫外分光光度计的结构及特点，掌握其使用方法；2、 学习紫外–可见吸收光谱的绘制及定量测定方法；3、了解氨基酸类物质的紫外吸收光谱的特点。
【基本原理】• 原理概述：紫外光谱等物质的吸收光谱可以反映物质在不同的光谱区域内吸收能力的分布情况，不同的物质因分子结构不同，吸收光谱也不同，可以从波形、波峰的强度、位置及其数目反映出来，因此，吸收光谱带有分子结构与组成的信息。
• 紫外分光光度法：类型：吸收光谱法；原理：电子的跃迁：电子由于受到光、热、电等的激发，从一个能级转移到另一个能级的现象。
这是因为分子中的电子总是处在某一种运动状态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。
当这些电 子吸收了外来辐射的能量，就从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。
作图原理：物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的入射光的波长，并纪 录该物质在每一波长处的吸光度A ,然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，这样得到 的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线；定量关系：当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度I 0与透过光强度I t 之比的对数与该物质的浓度 c 及厚度b 成正比。
其数学表达式，即Lambert-Beer 定律，为：0log log t I A T kbc I ==−=这是是分光光度法定量分析的基础，T 为透光率（比）。
仪器构造：图1 紫外分光光度计仪器简图• 氨基酸：定义：含有氨基和羧基的有机物，是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位；光学性质：对光有吸收作用。
20种氨基酸在可见光区域均无光吸收，在远紫外区（<220 nm ）均有光吸收，在（近）紫外区（220 nm—300 nm ）只有三种氨基酸有光吸收能力（苯丙氨酸（Phe ）、酪氨酸（Tyr ）、色氨酸（Try ）），因为它们的结构均含有含有苯环共轭双键系统。
紫外法测定蛋白质
紫外法测定蛋白质下面介绍四种紫外吸收法:1.280nm的光吸收法因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收，且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm 处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。
测定时，将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中，用配制蛋白质溶液的溶剂(水或缓冲液)作空白对照，在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值A280。
蛋白质浓度可控制在0.1~1.0mg/ml左右。
通常用1cm光径的标准石英比色皿，盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时，A280约为1.0左右。
由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。
许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值(A1%1cm)有文献数据可查，根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。
下式列出了蛋白质浓度与(A 1%1cm)值(即蛋白质溶液浓度为1%，光径为1cm时的光吸收值)的关系。
文献值A1%1cm，λ称为百分吸收系数或比吸收系数。
蛋白质浓度= (A280´10 )/ A1%1cm，280nm (mg/ml)(Q 1%浓度»10mg/ml)例:牛血清清蛋白: A1%1cm=6.3 (280nm)溶菌酶: A1%1cm=22.8 (280nm)若查不到待测蛋白质的A1%1cm值，则可选用一种与待测蛋白质的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白质作为标准蛋白质，用标准曲线法进行测定。
标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0mg/ml。
常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。
标准曲线的测定:取6支试管，按下表编号并加入试剂:管号1 2 3 4 5 6 BSA(1.0mg/ml)0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 H2O 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0 A280用第1管为空白对照，各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度A2 80，以A280为纵座标，各管的蛋白质浓度或蛋白质量(mg)为横座标作图，标准曲线应为直线，利用此标准曲线，根据测出的未知样品的A280值，即可查出未知样品的蛋白质含量，也可以用2至6管A280值与相应的试管中的蛋白质浓度计算出该蛋白质的A1%1cm，280nm2.280nm和260nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260nm处的吸收更强，其吸收高峰在260nm附近。
苯丙氨酸和酪氨酸的关系
1.苯丙氨酸在体内一般先转变为酪氨酸由苯丙氨酸羟化酶（phenylalamine hyolroxylase）催化引入羟基完成，其辅酶为四氢生物嘌呤。
反应生成的二氢生物喋呤，由二氢叶酸还原酶催化，借助NADPH+H还原为四氢化合物。
苯丙氨酸羟化酶所催化反应不可逆，体内酷氨酸不能转变为苯丙氨酸。
2.儿茶酚胺与黑色素的合成酪氨酸经酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase）催化生成3，4二羟苯丙氨酸（3，4dihydroxyphenylalanineL－DOPA）（多巴）。
此酶也是以四氢生物喋呤为辅酶的加单氧酶，多巴经多巴脱羧酶催化生成多巴胺（dopamine）。
多巴胺在多巴胺β－氧化酶（dopamine βoxidase）催化下使β碳原子羟化，生成去甲肾上腺素（norepinephrine）。
而后由SAM提供甲基使去甲肾上腺素甲基化生成肾上腺素（epinephrine）。
多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素统称为儿茶酚胺（catecholamine）。
酪氨酸羟化酶是儿茶酚胺合成的限速酶，受终产物的反馈调节。
在黑色素细胞中，酪氨酸在酪氨酸酶催化下羟化生成多巴，多巴再经氧化生成多巴醌而进入合成黑色素的途径。
所形成的多巴醌进一步环化和脱羧生成吲哚醌。
黑色素即是吲哚醌的聚合物。
人体若缺乏酪氨酸酶，黑色素合成障碍，皮肤、毛发发“白”，称为白化病（albinism）。
3.酪氨酸是生糖兼生酮氨基酸酪氨酸经转氨基作用生成对羟基苯丙酮酸，进一步分解则生成乙酰乙酸和延胡索酸，所以是生糖兼生酮氨基酸。
4.代谢障碍已知在苯丙氨酸和酪氨酸代谢中，有许多代谢性疾患。
最重要的是苯丙酮酸尿症（phenylketonuria，PKV），因缺乏苯丙氨酸羟化酶所致。
苯丙氨酸不能正常地转变为酪氨酸，体内苯丙氨酸蓄积，并由转氨基作用生成苯丙酮酸（一部分还原为苯乙酸）并从尿液中排出。
苯丙酮酸的堆积对中枢神经系统有毒性，故本病伴发智力发育障碍。
A280(nm)紫外光吸收法测定蛋白浓度
[转载]A280(nm)紫外光吸收法测定蛋白浓度已有 683 次阅读 2011-4-11 12:37 |系统分类:科研笔记|关键词:在线预测蛋白质平均值•原理：蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm 波长处有最大吸收峰，其光吸收值与蛋白质浓度成正比，故可以用280nm 波长吸收值大小来测定蛋白质含量。
优点：1. 快速；2. 对蛋白质无破坏性。
缺点：1. 不是严格的定量方法。
因为此法是根据酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）残基的强吸收值来测定的，不同的蛋白质具有不同的消光系数。
另外，当蛋白质分子中不含Tyr、Phe或Trp残基时，该方法就不能检出蛋白。
（此法用于测粗提总蛋白浓度较为适宜）2. 核酸可引起强烈干扰。
灵敏度：0.2 mg/ml ~ 2 mg/ml；比色杯最小测量体积为0.1 ml。
注意事项：1.实验室通常认为用1cm的比色杯所测光吸收值为1.0时，蛋白浓度约为1mg/ml，这是非常不精确的。
2.如果实验所用的缓冲液和水有较高的光吸收值，说明缓冲液中有干扰物质存在。
测量方法和计算公式：o对于不含核酸污染的蛋白溶液（如果样品光吸收值大于2.0，应将样品稀释至光吸收值小于2.0）：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm波长处的光吸收值，一般来说， 1 A280 Unit ≈1mg/ml (说明：此处默认蛋白的A280消光系数为1；对于浓度位于0.02 mg/ml ~ 3 mg/ml范围之内的蛋白样品而言如此，对于浓度小于0.1 mg/ml的蛋白样品，可以采用以下的方法估算：蛋白浓度≈ A205/31）o对于存在核酸污染（A280/A260<0.6）蛋白溶液：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm和260 nm波长处的光吸收值，或280nm和205 nm波长处光吸收值，按照以下公式计算：蛋白浓度（mg/ml）= [1.55 × A280] －[0.76 × A260]蛋白浓度（mg/ml）= A205 ÷ (27 ＋A280/A205) •目的：测量纯化出来的已知蛋白的浓度（或成分不明的蛋白混合液）•步骤：1、到ProtParam tool网站在线预测该蛋白质的消光系数；2、用蛋白buffer作对照调零后，根据经验，将蛋白溶液稀释至合适的浓度，使其280 nm处光吸收值位于0.5 ~ 1.0区间之内（通常试一次就能找到恰当的稀释比例）；3、做三次平行的测量，记录280 nm光吸收值。
生物化学题库及答案大全
《生物化学》题库习题一参考答案一、填空题1 蛋白质中的苯丙氨酸、酪氨酸和__色氨酸__3种氨基酸具有紫外吸收特性，因而使蛋白质在280nm处有最大吸收值。
2 蛋白质的二级结构最基本的有两种类型，它们是_α-螺旋结构__和___β-折叠结构__。
前者的螺距为0.54nm，每圈螺旋含_3.6__个氨基酸残基，每个氨基酸残基沿轴上升高度为__0.15nm____。
天然蛋白质中的该结构大都属于右手螺旋。
3 氨基酸与茚三酮发生氧化脱羧脱氨反应生成__蓝紫色____色化合物，而脯氨酸与茚三酮反应生成黄色化合物。
4 当氨基酸溶液的pH = pI时，氨基酸以两性离子离子形式存在，当pH > pI时，氨基酸以负离子形式存在。
5维持DNA双螺旋结构的因素有：碱基堆积力；氢键；离子键6酶的活性中心包括结合部位和催化部位两个功能部位，其中前者直接与底物结合，决定酶的专一性，后者是发生化学变化的部位，决定催化反应的性质。
72个H+或e经过细胞内的NADH和FADH2呼吸链时，各产生 3 个和 2 个ATP。
81分子葡萄糖转化为2分子乳酸净生成______2________分子ATP。
糖酵解过程中有3个不可逆的酶促反应，这些酶是己糖激酶；果糖磷酸激酶；丙酮酸激酶9。
10大肠杆菌RNA聚合酶全酶由σββα'2组成；核心酶的组成是'2ββα。
参与识别起始信号的是σ因子。
11按溶解性将维生素分为水溶性和脂溶性性维生素，其中前者主要包括V B1、V B2、V B6、V B12、V C，后者主要包括V A、V D、V E、V K（每种类型至少写出三种维生素。
）12蛋白质的生物合成是以mRNA作为模板，tRNA作为运输氨基酸的工具，蛋白质合成的场所是核糖体。
13细胞内参与合成嘧啶碱基的氨基酸有：天冬氨酸和谷氨酰胺。
14、原核生物蛋白质合成的延伸阶段，氨基酸是以氨酰tRNA合成酶•GTP•EF-Tu三元复合体的形式进位的。
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苯丙氨酸和酪氨酸的紫外-可见光谱分析
一、实验目的
1、了解紫外可见分光光度法的基本原理，掌握紫外可见分光光度计的基本操作。
2、了解苯衍生物的紫外吸收光谱及鉴定方法。
3、掌握紫外可见吸收光谱的绘制和定量测定方法。
二、实验原理
紫外-可见分光光度法属于吸收光谱法，分子中的电子总是处在某一种运动状态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。
电子由于受到光、热、电等的激发，吸收了外来辐射的能量，从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。
物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的入射光的波长，并纪录该物质在每一波长处的吸光度（A）,可得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。
当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度I0与透过光强度I t之比的对数与该物质的浓度c及厚度b成正比。
其数学表达式为：A=lg(I0/I t)= －lg T＝kbc, （1）
式（1）为Lambert-Beer定律，是分光光度法定量分析的基础
其中T为透光率(透射比）。
物质的吸收光谱反映了它在不同的光谱区域内吸收能力的分布情况，不同的物质，由于分子结构不同，吸收光谱也不同，可以从波形，波峰的强度、位置及其数目反映出来，因此，吸收光谱带有分子结构与组成的信息。
芳香族化合物π π*跃迁到近紫外产生3个特征吸收带，苯的特征吸收带为184nm,204nm,254nm.当苯上有取代基时，会对其3个特征吸收带产生强烈影响。
在相同条件下比较待测物和已知纯化合物的吸收光谱，与标准谱图比较鉴定待测物的结构。
三、实验仪器及试剂
仪器：UV-2401紫外－可见分光光度计（狭缝宽度1.0nm,参比溶液：去离子水），100-1000μL移液枪，10ml试管
试剂：4mg/100ml酪氨酸，1.6mg/100ml色氨酸，20mg/100ml苯丙氨酸，20mg/100ml 酪氨酸，去离子水
四、实验步骤
A. 绘制苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸溶液的紫外光谱曲线
1. 打开紫外分光光度计和计算机，预热，对紫外分光光度计进行仪器初始化。
2. 选择测量参数，扫描记录三种溶液的紫外吸收光谱。
B. 绘制标准曲线，求未知浓度酪氨酸溶液浓度。
1. 酪氨酸系列标准溶液，待用。
2. 选择测量参数,绘制标准曲线。
3. 在同样条件下，测量待测样的吸光度，通过标准曲线，计算待测样浓度。
五、实验结果分析
1、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸的紫外吸收光谱
根据实验所得数据可得三种物质的紫外吸收光谱曲线
A b s
wavelength/nm
A b s
wavelength/nm
A b s
wavelength/nm
由所得的紫外吸收光谱中可读得，酪氨酸的最大吸收波长λmax 为223.20nm ，色氨酸的λmax 为218.90nm ，苯丙氨酸的λmax 为216.20nm 。
苯的特征吸收带为184nm ，204nm,254nm,实验中三种物质的最大吸收波长在220nm 附近，波形相近，由于苯
环上取代基的存在，酪氨酸分子式，色氨酸：，
苯丙氨酸：，三种氨基酸均为芳香族化合物，苯环上取代不同基团，
酪氨酸上为苯酚上取代氨基酸特征基团，羟基极性强，π-π*跃迁红移，λmax 增大，色氨酸双键与苯环共轭增大π-π*跃迁几率，苯丙氨酸取代基较少，相对λmax 较小。
2、 酪氨酸紫外吸收标准工作曲线 根据不同浓度的酪氨酸紫外吸收得
拟合得:Abs=0.00713*10*C+0.009
未知浓度的酪氨酸溶液测得吸光度为0.2186，故可求得未知浓度酪氨酸溶液的浓度为2.94mg/100ml ，理论所配得的溶液浓度为3.00mg/100ml,相对误差为2%，由于配制溶液时误差的存在及比色皿润洗、仪器固有误差的存在，该方法测得的溶液浓度相对较准确。
六、 思考题
紫外吸收光谱分析中为什么要用最大吸收波长值进行定量工作曲线的绘制？ 答：因为紫外吸收光谱为一宽峰，不同取代基团或溶剂等外界环境对最大吸收波长有较大影响，一般不同物质有特征的最大吸收波长，在进行定量工作曲线绘制时，设定最大吸收波长在合适的发射波长下吸光度最大，且每种浓度该物质在此条件下吸收较为均一，故选择最大吸收波长。
c/*10mg/ml。