第五章 佐剂
医学知识之免疫佐剂
免疫佐剂免疫佐剂：与抗原同时或预先注射于机体能增强机体免疫应答或改变免疫应答类型的辅助物质称为免疫佐剂。
（一）佐剂种类1.具备免疫原性的佐剂：如卡介苗、枯草分枝杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、脂多糖、细胞因子等。
2.不具备免疫原性的佐剂：如氢氧化铝佐剂、磷酸铝、磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、藻酸钙、多聚核苷酸、胞壁肽等。
应用最多的是福氏佐剂、细胞因子佐剂。
（1）福氏佐剂：分完全福氏佐剂（石蜡油+羊毛脂+卡介苗）、不完全福氏佐剂（石蜡油+羊毛脂）两种。
福氏完全佐剂可提高佐剂效能，但注射后易产生局部持久性溃疡和肉芽肿，宜注意。
（2）细胞因子佐剂：细胞因子佐剂与抗原合用，可有效激发机体的免疫功能。
IL-2、IL-1、IFNγ、IL-12、GM-CSF皆较常应用；细胞因子佐剂还被广泛应用于肿瘤基因治疗中。
（二）免疫佐剂的作用应用佐剂的目的是为了增强抗原对机体的免疫原性，从而提高体液免疫应答和细胞免疫应答水平。
1.增强免疫原性。
2.增加抗体的滴度。
3.引起或增强迟发型超敏反应。
（三）佐剂增强免疫应答的机制1.改变抗原物理性状，使抗原在体内缓慢释放，延长抗原与免疫细胞作用时间。
2.抗原在佐剂的辅佐作用下，更易被巨噬细胞吞噬和有效加工处理及呈递。
3.刺激单核／巨噬细胞活化，释放细胞因子调节和增强淋巴细胞免疫应答能力。
4.刺激淋巴细胞增生、分化，从而增强和扩大免疫应答能力。
【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
医疗卫生专业知识免疫学知识点-佐剂的作用机制
医疗卫生专业知识：免疫学知识点-佐剂的作用机制佐剂:一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥辅助作用，这类物质统称为佐剂。
按其作用原理又可将佐剂分为储存佐剂和中枢作用佐剂两类。
储存佐剂的作用是保护抗原，延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时促进局部吞噬细胞反应，如果将其与抗原分开，即失去作用。
例如铝胶佐剂、油包水乳化佐剂都属此类。
中枢作用佐剂的作用是直接刺激免疫活性细胞，若与抗原分开注射，仍具有免疫刺激作用。
例如细菌内毒素、腊质D等都属于此类抗原等。
佐剂的作用机制
(一)对抗原的作用
1增加抗原的表面积：佐剂吸附抗原，增加抗原与免疫细胞的接触表面积，尤其是小分子可溶性抗原或半抗原，经胶体颗粒吸附后免疫动物，可提高抗体产量。
2提高抗原的免疫原性：佐剂抗原被吞噬细胞吞噬后，经加工处理，其免疫原性得到加强。
3延长抗原在局部组织内的滞留时间，以较少的免疫次数即可提高体液中的抗体含量。
4保护抗原(尤其是DNA、RNA)免受体内酶的分解。
(二)对机体的作用
1引起局部肉芽肿，促进局部炎症反应，增强吞噬细胞的活性。
2促进巨噬细胞和淋巴细胞的增殖与分化，增加T、B淋巴细胞的协同作用。
3增强淋巴细胞膜的活性并促进分泌辅助因子。
4引起佐剂病，有些动物(如大白鼠)因注射弗氏完全佐剂引起关节和关节周围发生炎症病变，该病又称为佐剂关节炎。
佐剂及乳化工艺简述
（1）佐剂与抗原配比为：体积比1:1； （2）抗原滴加时温度为28℃，佐剂温度为 28 ℃，抗原滴加速度为420万ml/小时 ，滴 加时搅拌速度为150转/分； （3）剪切转数3300转/分。剪切流量为 7000ml/时剪切后温度为 28.3℃，分装前不 降温。
钝化操作规程
• • • • • • • • • • • • • • 1.目 的：建立乳化间罐体管道钝化规程，保证工艺卫生和产品质量。 2.适用范围：适用于乳化间的罐体及管道钝化工作。 3.责 任 人：乳化间人员、班长。 4.程 序： 4．1清洗 4．1．1所有罐体依次用纯水清洗3遍，注射水清洗1遍 4．1．2用罐接纯水适量打压0.1Mpa后,打开所有管道阀门冲洗3次；同样注 射水冲洗1次。 4．2钝化 4．2．1所有罐体用浓度为1%的NaoH溶液（30-50℃），经罐顶清洁球喷淋 罐体内壁30min 4．2．2用罐接浓度为1%的NaoH溶液（30-50℃），打开所有管道阀门排尽 空气，浸泡30min 4．2．3排尽NaoH溶液，用纯水冲洗罐体及管道，冲净待用。 4．2．4所有罐体用浓度为8%的HNO3，经罐顶清洁球喷淋罐体内壁30min 4．2．5用罐接浓度为8%的HNO3打开所有管道阀门排尽空气，浸泡30min 4．2．6排尽HNO3溶液，用纯水冲洗罐体及管道，冲净后关闭所有阀门。
• 现阶段206佐剂乳化工艺： （1）佐剂与抗原配比为：质量比1:1； （2）滴加时将水相和油相温度调整合适， 抗原滴加速度为160万ml/小时 ，滴加时搅拌 速度为80转/分； （3）乳化过程中均质压力调整合适的低压, 高压。一般均质后温度为29 ℃，分装前降温 至15 ℃
50V佐剂的乳化工艺
乳化操作规程
• • • • • • • • • • • • • • 目的：建立乳化的操作规程，确保乳化效果，以便生产合格产品。 适用范围：乳化的操作。 责任人：操作人员、班长、生产负责人。 程序： 4.1佐剂入1号乳化罐： 4.1.1准备工作： 4.1.1.1根据毒液量计算所抽取佐剂量。 4.1.1.2按所需量把佐剂推入白油间待抽。 4.1.1.3关闭1号乳化罐罐底阀门，打开呼吸器阀和罐进料阀，电话通知白油间 打白油。完毕后，2号同样操作。 4.1.2抽取操作过程 4.1.2.1开启油佐剂包装桶盖，抽出佐剂进称量，并取样保存，确保称量准确 后开启油泵进行抽取，直到抽完后。 4.1.2.2把所有的油相液体抽完以后，先关闭抽油佐剂阀门，后关闭1号乳化罐 进料阀门，并补压。完毕后，2号同样操作。 4.1.2.3做好抽取油相量的记录。将样瓶放到固定位置并作标记。 4.2油佐剂高压灭菌操作：
佐剂的分类及作用
2-2 副作用
皮下注射时，可在注射部位引起强烈的炎症和溃疡
2-3其他油性佐剂
佐剂-65 在体内可被代谢或分泌,用于人的流感疫苗,证明
安全有效.
白油Span佐剂
是用轻质矿物油(白油)作油相,用Span-80 或Span-85及Tween-80作为乳化剂制成的油乳佐剂,是当前 兽用生物品中最常用最有效的佐剂之一。
1-2 铝盐佐剂的种类
铝化合物沉淀疫苗
铝化合物吸附疫苗
1-3铝盐佐剂存在的缺点
1 主要刺激 Th2 相关抗体的产生，不能刺激 Th1 的细胞活性, 也不加强 CD8+细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）的活性,即只能增 强体液免疫，不能增强细胞免疫。 2 会诱导产生 IgE 抗体，增加发生超敏反应的危险
免疫佐剂
一 佐剂的发现及其概念
1926年，Glenny 等发现明矾沉淀白喉毒素能产生 一种微粒，极大地增强机体对抗原的特异性免疫应 答，从而拉开了佐剂使用的序幕。
与抗原同时或预先应用，能够增强机体针 对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反 应类型的制剂
1 为什么要使用佐剂？
可溶性纯化蛋白质疫苗或蛋白质 亚单位疫苗的免疫激活作用通常 较弱，不足以刺激机体产生足够 的抗体，因此通常在疫苗制剂中 加入佐剂
位暴露于免疫细胞，将抗原有效地递呈给抗原提呈细胞，由于抗原递 呈细胞的内体小泡和胞质溶胶的双重作用，含 ISCOM 的疫苗可以通 过 MHC-Ⅰ和 MHC-Ⅱ两种途径将抗原递呈给免疫系统，同时激活 CD4+T细胞和CD8+T细胞
3 作用特点
ISCOM 可以显著提高 T 细胞的增殖、分化，并诱导多种亚
与单独应用抗原相比，抗原与佐 剂联合应用所需的抗原量较少， 机体产生的抗体量较多，并且还 可以减轻免疫耐受
佐剂
5、在动物体内易降解不宜长时期留存而诱发组织损伤。 6、不含与动物有交叉的抗原以避免诱发自身免疫反应，防止 发生自身免疫性疾病。 7、不应诱发自身超敏性也不应与抗体结合形成有害的免疫复 合物。 8、应性质稳定 佐剂抗原混合物储存1年以上，必须不分解、不变质和不产生 不良物质。
三、常见的兽用免疫佐剂
佐剂
主讲人
佐剂是免疫学和生物制品学中的 一个重要内容
是指与抗原物质混合或先于抗原或同时注 入动物体内，能非特异性地增强机体对抗原物 质的免疫应答的一类物质。
一、研究历史
1、起始阶段
1916年Moignae最早用羊毛脂与石蜡油制成伤寒沙门氏菌乳 剂苗；继后Prevet用羊毛脂加琼脂为佐剂制出炭疽菌苗。 1925年，Gaston Ramon证明了明矾的佐剂作用。
生产中以粘度测定与稳定性测定为主：
粘度测定
最简易的方法是用内径为1.2mm的吸管，在室温下吸乳 剂lmL，垂直放出0.4mL所需的时间作为粘度单位，以2~6s为合 格，不得>10装油乳剂,3000rpm 离心10~15min不分层，相当于可保存1年以上不破乳。
矿物油佐剂
佛氏不完全佐剂是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组 成的一种贮藏性佐剂。 佛氏完全佐剂 在不完全佐剂的基础上加一定量的分支杆菌而成。虽然具 有一定的副作用，但其佐剂活性是其它物质难于相比的。 特点： 可使在正常状态下缺乏免疫原性的物质成为免疫原。先作 用于Th1细胞，后是Th2细胞，并能启动细胞免疫而发挥作用。
五、油乳佐剂疫苗
单相乳化型 分为 双相乳化型
单相乳化型 （1）油包水（W/O） 较粘稠，在机体内不易分散；但佐剂活性 优良，为生物制品所采用的主要剂型
（2）水包油（O/W） 较稀薄，在机体内易于分散；但佐剂活性很低，生物制品中 不采用
第五章免疫佐剂
疫力优于铝佐剂。 – 可诱导体液和细胞免疫应答 – 目前，正在健康志愿者中进行I期临床试验。
第五章免疫佐剂
4.细胞因子和其他免疫调节剂
IL-12：
➢最有希望进入临床试验的细胞因子佐剂之一;
5. CpG-ODN
➢ 具有很好的耐受性，稳定且生产成本低廉， 并可用于黏膜途径。
➢ 能激活巨噬细胞，诱导B细胞增殖，诱生较强 的Th1应答。
➢ 其效果能达到弗氏完全佐剂的水平，可用于 治疗性疫苗并能与其他佐剂(如铝盐)协同作用。
第五章免疫佐剂
三、免疫佐剂对免疫系统的影响
1. 佐剂的作用机理
（1）储存作用
IFN-γ 细胞因子
IL-2
SAP
第五章免疫佐剂
二、临床研究中的新型佐剂
第五章免疫佐剂
1. 乳化佐剂
（1）MF59
– 用Span85和吐温80稳定的水包鲨烯乳剂 – 获得批准的新型人用佐剂
Span85：山梨醇酐三油酸酯 吐温80：聚氧乙烯山梨醇酐三油酸酯 鲨烯：3碳6烯
第五章免疫佐剂
1. 乳化佐剂
第五章免疫佐剂
2. 皂苷和免疫刺激复合物( ISCOM)
QS21
• 疟原虫sp£66肽疫苗试验(哥伦比亚)
➢抗体:
– 疫苗+QS21+（铝盐） > 疫苗+铝盐
– 第3针接种后：
– 两名受试者出现严重不良反应(过敏性休克)
• 尚不清楚这些反应是不是佐剂依赖性？
第五章免疫佐剂
2. 皂苷和免疫刺激复合物( ISCOM)
可能性。
第五章免疫佐剂
佐剂及其功能和作用机制
佐剂及其功能和作用机制作者：李夏莹黄晓冬刘肃来源：《安徽农业科学》2015年第02期摘要：介绍了佐剂的分类、功能及作用机制，其作用机制主要包括：作为疫苗在体内的贮存库;诱导并调节免疫应答;改变免疫应答方式;延长活化的免疫细胞存活时间。
关键词：佐剂;分类;功能;作用机制中图分类号 S852.4 文献标识码A 文章编号 0517-6611（2015）02-062-02Adjuvant and Its Function and Action MechanismLI Xia-ying1， HUANG Xiao-dong2， LIU Su2* （1.Development Center of Science and Technology， MOA， Beijing 100122; 2.Institute of Vegetables and Flowers of Chinese Academy of Agricultural Sciences/Vegetable Quality Supervision and Testing Center of Ministry of Agriculture，Beijing 100081）Abstract The classification， function， action mechanism of adjuvant were introduced.The action mechanism mainly includes： as a storage of vaccine in vivo， inducing and adjusting immune response， changing immune response way， prolonging activation of immune cell survival time.Key words Adjuvant; Classification; Function; Mechanism of action作者简介李夏莹、黄晓冬为并列第一作者;李夏莹（1986- ），女，云南玉溪人，助理研究员，博士，从事病原与宿主相互作用机制研究;黄晓冬（1984-），男，江西九江人，实习研究员，硕士，从事农产品农药残留研究。
佐剂的生物学功能
佐剂的⽣物学功能
佐剂的⽣物功能
⽬前在⽩⽻⾁鸡养殖过程中，依据免疫程序进⾏疫苗免疫，⼤多数的灭活疫苗都是乳化⽩油制成，通过注射进⼊机体之后，能够帮助疫苗起到更好的免疫效果，那么佐剂的⽣物功能是如何的呢？今天我们探讨⼀下佐剂的⽣物学功能。
1. 抗原物质混合佐剂注⼊机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作⽤时间；
2. 佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表⾯积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；
3. 佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；
4. 佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作⽤；
5. 可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产⽣抗体。
故免疫佐剂的作⽤可使⽆免疫原性物质变成有效的免疫原；
6. 可提⾼机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；
7. 改变抗体的产⽣类型以及产⽣迟发型变态反应，并使其增强。
尽管⽩油佐剂有如此⼤的作⽤，但是由于⽩油佐剂进⼊机体之后，不能给予完全吸收，在⼀定程度上给⾷品安全带来了⼀定的隐患。
那么研制新型⽆油佐剂在⽣物制品⾏业是⼀个趋势。
⽬前市场上没有运⽤⽩油制成的可注射型疫苗有北京华夏兴洋的抗原佐剂复合物疫苗，北京华都诗华的抗原抗体复合物疫苗，其中主要的原理在于疫苗佐剂的缓释作⽤，从⽽能不断的刺激机体产⽣免疫反应。
疫苗佐剂课件
• 2、油水乳剂佐剂： • （1）、弗氏完全佐剂：石蜡油（矿物油）、羊毛脂（乳化剂）
和杀死的分枝杆菌（能增强抗体效价），多用于实验动物免疫。
• （2）、弗氏不完全佐剂：石蜡油和羊毛脂组成 • （3）、疫苗用油水乳剂佐剂： • 白油（矿物油）、司本-80（乳化剂）、吐温-80（乳化剂）、
• (6)可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度； • (7)改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。
四、佐剂的类型
• 1、不溶性铝胶盐类佐剂（无机化合物佐剂）：氢氧化 铝胶，明矾等
• 与抗原混合注射可显著提高抗体滴度，这是由于液体的 蛋白质与此类佐剂混合后成为凝胶状态，可较长时间存 留在体内，持续释放抗原并发挥刺激作用。
硬脂酸铝（乳化剂）组成。
• 3、蜂胶佐剂：主要有树脂、蜂蜡、花粉及 其它一些有机与无机物的一种天然物质。
• 4、微生物及其代谢产物佐剂 • (1)、某些死菌的菌体成分与抗原一起注射，具有明显的佐剂效应 • 结核杆菌，百日咳杆菌，绿脓杆菌，布氏杆菌，短小棒状杆菌，
链球菌，葡萄球菌，酵母菌。 • (2)、革兰氏阴性菌外膜脂多糖（细菌的内毒素）：作用• (4)、蛋白毒素：霍乱毒素。
• 五、免疫增强剂 • 免疫增强剂(immune potentiator):不需与抗原一起
应用,即能引起机体发生短暂的,而又是广泛的免疫增 强作用。
• 胸腺肽，卡介苗，干扰素，白介素，多糖（灵芝多 糖，黄芪多糖，）中草药（人参，党参，当归等）， 促旋咪唑
佐剂
佐剂
• 一、佐剂的概念 • 佐剂（adjuvant）： • 当其与抗原一起注射或预先注射入机体
时，可增强机体对抗原的免疫应答，发 挥其辅佐的作用。属非特异性免疫增强剂 ，增强免疫细胞对抗原的应答。
佐剂的作用与制备-免疫学实验技术-生物秀论坛『中国生物科学论坛』-Powere...
佐剂的作用与制备-免疫学实验技术-生物秀论坛『中国生物科学论坛』-Powere...佐剂的作用概念佐剂（adjuvant）是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质，应用时可与抗原同时或预先注射于机体。
佐剂本身可以有免疫原性，也可以没有免疫原性。
应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性，从而提高抗体的效价。
颗粒性抗原（如细菌、细胞）因具有较强的免疫原性，一般情况下不使用佐剂即可取得较好的免疫效果。
对于可溶性大分子量的蛋白质免疫原、人工抗原，初次免疫时必须使用佐剂才能取得较好的免疫效果。
另外，一般不连续两次使用完全弗氏佐剂，以免导致动物严重反应。
免疫佐剂的作用归纳起来有：（1）延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，佐剂可延长抗原在体内滞留时间，避免频繁注射，有利于高亲和力抗体的产生；（2）活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T和B细胞的相互作用，从而对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用；（3）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；（4）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；（5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。
故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；（6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；（7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。
由于佐剂常混有微量的其他物质，这些物质进入机体后也可引起抗体的产生，影响抗体的特异性。
注射完全佐剂可引起局部炎症反应，使局部组织坏死佐剂的制备具备条件佐剂的条件作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件：（1）增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性；（2）佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，减低抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体；（3）佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能；（4）良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。
兽用疫苗保护剂和佐剂讲解
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤；
② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力；
③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
二、影响保护剂效能的因素
1、保护剂种类: 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH 值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
乳化剂
1. 天然乳化剂：阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄以及炼乳 2. 人工合成乳化剂 ? 离子型
阴离子类乳化剂：十二烷基磺酸钠和硬脂酸铝 阳离子类乳化剂：氯化苯甲烃铵、溴化十六烷三甲基 ? 非离子型：月桂酸聚甘油脂、山梨醇脂和单油酸脂、
司本-80、吐温-80
白油佐剂
国内外常用白油：Drakocel-6VR、Marcol-52和Lipolul-4 7号或10号白油
质量标准: ? 无色无味 ? 50℃运动粘度7m2／s左右 ? 紫外吸收A250-350＜0.1％，紫外消光系数＜12×108； ? 单环芳烃与双环芳烃含量低于0.5％，无多环芳烃； ? 小鼠腹腔注射0.5ml或家免皮下注射2.0ml白油，观察60d， 表现正常。
乳剂配方与乳化方法
（1）剂在水中法：
（一）颗粒性佐剂
免疫佐剂及其应用
三．分枝杆菌及其组分
四．CpG 寡核苷酸(CpG ODN)
○ 微粒抗原递送体系
五．脂质体（LIP）
六．免疫刺激复合物(ISCOM）
七．细胞因子
○ 天然来源佐剂
八．蜂胶佐剂
九．中药免疫佐剂
铝盐佐剂
铝盐佐剂
铝盐佐剂是一类含Al3+的无机盐,主要包含氢氧化铝胶、磷酸铝和明矾等， 通过运用氢氧化铝或磷酸铝,抗原被结合到一个不溶的凝胶样沉淀剂上,或者 通过相互电作用形成直径0.1～1μm的凝胶粒子，已有70多年的应用历史， 是现在唯一被FDA批准的人、兽均可应用的佐剂。
铝盐佐剂
优点与不足
优点：①良好的吸附作用，能够将可溶性抗原吸附于铝佐剂分子表面； ②良好的沉淀剂，可以浓缩抗原，减少注射剂量；③成本低廉、使用 方便、安全无毒，是兽医生物制品中应用最广的一种佐剂。 不足：①铝盐佐剂仅能诱导体液免疫,不能产生细胞免疫；②通过皮下 或皮肤内注射而不是肌肉内注射的路径时通常会产生肉芽肿；③能增 加了 IgE 的产生、变态反应和可能的神经毒性
不应诱发自 身超敏反应
无致癌性
不含与动物有 交叉反应的抗
原物质
纯度高、稳 定性好
在动物体内能 被降解吸收
有一定的吸附 力
佐剂的作用机制
抗原贮存库效应 促进局部的炎症反应
增加抗原表面积
佐剂的分类
物理性质
生物学性质 体内停留的时
间
• 颗粒型佐剂，如铝盐类佐剂 • 非颗粒型佐剂，如CpG序列
• 微生物及其组分，如LPS • 非微生物物质,如中药免疫佐剂佐剂
白细胞介素 12(IL-12)、IL-2、IFN-γ、粒细胞 - 巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 等，在增强细胞毒性 CTL、自然杀伤细胞活性和募集抗原提呈等方面有着重要作用， 是促进 CTL 免疫应答的最佳细胞因子环境。
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第五章
（二）对机体的作用
1.对单核巨噬细胞中：引起细胞浸润，促进细胞增 殖。 2.对T淋巴细胞的作用：促进T淋巴细胞增殖分化， 形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。 3.对B淋巴细胞的作用： 4.非特异性免疫增强作用：加强NK细胞和K细胞的 非特异性免疫性。
第五章
四 分类
颗粒型佐剂
（一）物理性质
非颗粒型佐剂
第五章 佐剂
内 容 简 介
第一节 概述 第二节 常规免疫佐剂 第三节 新型免疫佐剂
第一节 概述
一 概念
第五章
1 佐剂 (adjuvant) ：词来源于拉丁语，原为辅助之意。 在免疫学和生物制品学上又称为免疫佐剂 （immunologic adjuvant）。凡是可以增强抗原特异性 免疫应答的物质均称之为佐剂，也称免疫佐剂。 2特点 （ 1 ）能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱 导机体产生特异性免疫应答。 （ 2 ）用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体可 产生足够的免疫应答和高滴度的抗体。
第五章
三 蜂胶佐剂
1.蜂胶是由蜜蜂上颚腺的分泌物和由密蜂采集 的天然有机物、无机物以及蜂蜡，花粉等组成。 研究证明，蜂胶有广谱的生物学特性，既能 引起特异性免疫应答，又能启动非特异性防御 机制。
2. 蜂胶佐剂为含50%蜂胶的蜂胶乙醇浸出液
第五章
第三节 新型免疫佐剂
一 细胞因子类佐剂
IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、IFNγ
第五章
二 标准
WHO要求，生物制品的佐剂，在考虑其免疫增强 效果的同时，必须具有以下条件： 1.无致癌性 2.无毒性 3.化学纯 4.吸附力强 5.易于吸收 6.不含对人体或动物体有交叉反应的抗原物质 7.稳定
第五章
三 作用机理
佐剂加强免疫反应的机理非常复杂，至今尚未 完全清楚。 （一）对抗原的作用 1. 增加抗原表面积。某些佐剂可以吸附许多抗原， 使抗原表面积明显提高，特别是可溶性抗原或半 抗原，经胶体颗粒吸附后，表面积上升，抗原性 加强，所产生的抗体滴度明显提高， 2. 延长抗原在组织中的贮存时间，使抗原缓慢降解 和缓释。
微生物及其组分 第五章 （二）生物性质 非微生物及其组分 贮存型 （三）体内存留时间
非贮存型
第二节 常规免疫佐剂
一 铝盐类佐剂
第五章
（一）氢氧化铝胶 又称铝胶，其佐剂活性与质量密切相关， 质优的铝胶分子细腻、胶体性良好、稳定，吸附力强，保存后 其吸附力不变。
1.铝粉加烧碱合成法： （1）2AL(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3.18H2O （2）Al2(SO4)3.18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
3弗氏佐剂
第五章
由美籍匈牙利细菌学家 Freund 于 1935 年研究 成功。包括弗氏不完全佐剂（ Freund’s incomplete
adjurant;FIA）和弗氏完全佐剂（ Freund’s complete
adjurant;FCA） 矿物油（液体石蜡） 75%~85% FIA 乳化剂（羊毛脂） 15%~25%
第五章
2非颗粒性佐剂
（1）肽类佐剂（peptides）：如分支杆菌中的胞壁 酰二肽，MDP）、脂肽、免疫调节多肽。
（2）表面活性分子佐剂（surface-active molecules）：硬脂酸铝（阳离子表面活性剂）、 Tween-80(非离子性表面活性剂)。能降低液体表 面张力。 （3）核酸及其衍生物类佐剂（nucleic acild derivatives）、CpG DNA。
10%明矾溶液，加1%-2%
第五章
二 油乳佐剂
指一类由油类物质和乳化剂按一定比例混 合形成的佐剂。
1白油佐剂：制菌用的的白油应无多环芳烃化合 物，粘度低、无色、无味和无毒性。国内王明 俊等对采购多种白油剂乳化剂进行理化测定。 乳化剂作用及对动物毒性试验作比较，初步选 出杭州炼油厂 10 号白油与北京市石油化工合成 白油，上海大众制药厂的司本 -80 及吐温 -80 。 国外多用Marcol-52白油和 Arlaola乳化剂。
第五章
1颗粒型佐剂
（1）盐类佐剂 ： 包括氢氧化铝、磷酸铝、明矾 （2）油水乳剂佐剂：
弗氏完全佐剂（Freund׳s complete adjuvant,FCA） 弗氏不完全佐剂（Freund׳s incomplete adjuvant,FLA） 矿物油白油佐剂
（3）免疫刺激复合物（ISCOM）佐剂 （4）蜂胶(propolis) （5）脂质体佐剂（liposomes）
FCA
杀死的结核分支杆菌或卡介苗 0.5mg/ml
第五章
缺点
1. 引起局部组织损伤，影响肉质 2. FCA含分枝杆菌，使结核菌素试验呈阳性反 应 3. 粘稠，注射比较费力 4. 可能致癌
第五章
4 乳化
油相： 94 份白油、6份司本-80 、2份硬脂
酸铝
水相：5%吐温-80 油：水=1~3 ：1 与吐温-80混合，之后加入已经准备好的油 乳剂中→W/O 2%吐温-80 、生理盐水+疫苗→双相乳剂 疫苗（水-油-水乳剂或称多型乳剂。优点：粘稠 度低，在注射部位易分散，局部反应轻微及佐剂 效应良好 。
阴离子：碱肥皂、月桂酸 钠、十二烷基磺酸钠、硬
离子型 合成乳化剂 脂酸铝
阳离子：氯化苯甲烃铵
非离子型：山梨醇酯
第五章
制备油乳剂灭活苗，最常用的乳化剂 是：司本 -80 （去山梨醇单油酸酯）上海 大众制药厂生产；吐温-80（聚氧乙烯去山 梨醇单油酸酯）上海大众制药厂生产，硬 脂酸铝。
第五章பைடு நூலகம்
（3）乳化剂的选择
第五章
2.乳化剂
（1）概念： 将一种溶液或干粉分散成细小 的微粒，混悬于另一不相溶的液体中所形 成的分散体系，称为乳剂。被分散的物质 称为分散相（内相），承受分散相的液体 称连续相（外相），两相间的界面活性物 质称为乳化剂。
第五章
（2）种类
天然乳化剂：来自动植物，如阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄、炼乳
2 .明矾加碳酸钠合成法 2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2 3.用三氯化铝与氢氧化钠合成 AlCl3+3NaOH →Al(OH)3↓+3NaCl
第五章
（二）明矾
AlCl 3有钾明矾[KAl(SO4)2.12H2O]和铵明 矾[AlNH2(SO4)2.12H2O]两种。作为佐剂用于 生物制品的主要是钾明矾（即硫酸铝钾）。
二 CpG DNA
三 基因工程减毒素：CT、LT、TT
四 免疫刺激复合物（ISCOM）
五 脂质体佐剂
第五章 教学结束
思考题
1概念：免疫佐剂，乳化剂。 2佐剂的作用机理。 3常规免疫佐剂有哪些？
第五章
（4）含硫复合物类佐剂：例如左旋咪唑 （5）细胞因子类：IL-1、IL-2 IL-4 IFNγ （6）碳水化合物高分子类佐剂：硫酸多糖、香 菇多糖 （7）脂质分子类佐剂：脂多糖（LPS）、脂溶 性维生素 （ 维生素A、维生素E） （8）其他：霍乱毒素（CT ）、大肠杆菌不耐 热肠毒素（ LT ）、 破伤风类毒素（ TT）
第五章
5油乳剂型检验：取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于 冷水中，观察疫苗是否分散。第一滴分散属正 常现象，以后各滴均应不分散。 稳定性：取疫苗装于试管内，以3000rpm离心15min 观察油相是否分层。 粘度测定：用1ml吸管（下口的口径1.2mm，上口内 径2.7mm）吸取25℃左右的疫苗1ml，垂直自然 流出，记录流出0.4ml所需的时间。3次平均值应 在10sec以下。