第五章 佐剂
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
10%明矾溶液，加1%-2%
第五章
二 油乳佐剂
指一类由油类物质和乳化剂按一定比例混 合形成的佐剂。
1白油佐剂：制菌用的的白油应无多环芳烃化合 物，粘度低、无色、无味和无毒性。国内王明 俊等对采购多种白油剂乳化剂进行理化测定。 乳化剂作用及对动物毒性试验作比较，初步选 出杭州炼油厂 10 号白油与北京市石油化工合成 白油，上海大众制药厂的司本 -80 及吐温 -80 。 国外多用Marcol-52白油和 Arlaola乳化剂。
第五章 佐剂
内 容 简 介
第一节 概述 第二节 常规免疫佐剂 第三节 新型免疫佐剂
第一节 概述
一 概念
第五章
1 佐剂 (adjuvant) ：词来源于拉丁语，原为辅助之意。 在免疫学和生物制品学上又称为免疫佐剂 （immunologic adjuvant）。凡是可以增强抗原特异性 免疫应答的物质均称之为佐剂，也称免疫佐剂。 2特点 （ 1 ）能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱 导机体产生特异性免疫应答。 （ 2 ）用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体可 产生足够的免疫应答和高滴度的抗体。
种类多，根据使用目的的不同，可选择适当的乳化剂，通 常可根据用途依据乳化剂的HLB 值（亲水亲油平衡值）进行 选择。乳化剂的 HLB值与其在水中的溶解度相关，亲水行强 的在水中的溶解度大， HLB 值高，容易形成水包油型油乳剂 （即水为分散相，油为连续相， O/W）；亲油性的在水中溶 解度小，HLB 值低，易形成油包水型油乳剂。 已证明，HLB值为4~6 的乳化剂适用于制造 W/O型油乳剂； HLB 值在 8~18 的乳化剂适用于 O/W型油乳剂。制造油乳剂苗， 常用乳化剂司本-80（HLB值4.3，在水中溶解度低，不易在水 中分散，溶于多种有机溶剂，性质稳定，易形成 W/O 型油乳 剂）吐温 -80 ，其 HLB 值为 15.0 ，易溶于水，易形成 O/W型油 乳剂。
第五章
2非颗粒性佐剂
（1）肽类佐剂（peptides）：如分支杆菌中的胞壁 酰二肽，MDP）、脂肽、免疫调节多肽。
（2）表面活性分子佐剂（surface-active molecules）：硬脂酸铝（阳离子表面活性剂）、 Tween-80(非离子性表面活性剂)。能降低液体表 面张力。 （3）核酸及其衍生物类佐剂（nucleic acild derivatives）、CpG DNA。
第五章
（4）含硫复合物类佐剂：例如左旋咪唑 （5）细胞因子类：IL-1、IL-2 IL-4 IFNγ （6）碳水化合物高分子类佐剂：硫酸多糖、香 菇多糖 （7）脂质分子类佐剂：脂多糖（LPS）、脂溶 性维生素 （ 维生素A、维生素E） （8）其他：霍乱毒素（CT ）、大肠杆菌不耐 热肠毒素（ LT ）、 破伤风类毒素（ TT）
微生物及其组分 第五章 （二）生物性质 非微生物及其组分 贮存型 （三）体内存留时间
非贮存型
第二节 常规免疫佐剂
一 铝盐类佐剂
第五章
（一）氢氧化铝胶 又称铝胶，其佐剂活性与质量密切相关， 质优的铝胶分子细腻、胶体性良好、稳定，吸附力强，保存后 其吸附力不变。
1.铝粉加烧碱合成法： （1）2AL(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3.18H2O （2）Al2(SO4)3.18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
第五章
2.乳化剂
（1）概念： 将一种溶液或干粉分散成细小 的微粒，混悬于另一不相溶的液体中所形 成的分散体系，称为乳剂。被分散的物质 称为分散相（内相），承受分散相的液体 称连续相（外相），两相间的界面活性物 质称为乳化剂。
第五章
（2）种类
天然乳化剂：来自动植物，如阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄、炼乳
3弗氏佐剂
第五章
由美籍匈牙利细菌学家 Freund 于 1935 年研究 成功。包括弗氏不完全佐剂（ Freund’s incomplete
adjurant;FIA）和弗氏完全佐剂（ Freund’s complete
adjurant;FCA） 矿物油（液体石蜡） 75%~85% FIA 乳化剂（羊毛脂） 15%~25%
第五章
二 标准
WHO要求，生物制品的佐剂，在考虑其免疫增强 效果的同时，必须具有以下条件： 1.无致癌性 2.无毒性 3.化学纯 4.吸附力强 5.易于吸收 6.不含对人体或动物体有交叉反应的抗原物质 7.稳定
第五章
三 作用机理
佐剂加强免疫反应的机理非常复杂，至今尚未 完全清楚。 （一）对抗原的作用 1. 增加抗原表面积。某些佐剂可以吸附许多抗原， 使抗原表面积明显提高，特别是可溶性抗原或半 抗原，经胶体颗粒吸附后，表面积上升，抗原性 加强，所产生的抗体滴度明显提高， 2. 延长抗原在组织中的贮存时间，使抗原缓慢降解 和缓释。
2 .明矾加碳酸钠合成法 2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2 3.用三氯化铝与氢氧化钠合成 AlCl3+3NaOH →Al(OH)3↓+3NaCl
第五章
（二）明矾
AlCl 3有钾明矾[KAl(SO4)2.12H2O]和铵明 矾[AlNH2(SO4)2.12H2O]两种。作为佐剂用于 生物制品的主要是钾明矾（即硫酸铝钾）。
第五章
1颗粒型佐剂
（1）盐类佐剂 ： 包括氢氧化铝、磷酸铝、明矾 （2）油水乳剂佐剂：
弗氏完全佐剂（Freund׳s complete adjuvant,FCA） 弗氏不完全佐剂（Freund׳s incomplete adjuvant,FLA） 矿物油白油佐剂
（3）免疫刺激复合物（ISCOM）佐剂 （4）蜂胶(propolis) （5）脂质体佐剂（liposomes）
二 CpG DNA
三 基因工程减毒素：CT、LT、TT
四 免疫刺激复合物（ISCOM）
五 脂质体佐剂
源自文库 第五章 教学结束
思考题
1概念：免疫佐剂，乳化剂。 2佐剂的作用机理。 3常规免疫佐剂有哪些？
阴离子：碱肥皂、月桂酸 钠、十二烷基磺酸钠、硬
离子型 合成乳化剂 脂酸铝
阳离子：氯化苯甲烃铵
非离子型：山梨醇酯
第五章
制备油乳剂灭活苗，最常用的乳化剂 是：司本 -80 （去山梨醇单油酸酯）上海 大众制药厂生产；吐温-80（聚氧乙烯去山 梨醇单油酸酯）上海大众制药厂生产，硬 脂酸铝。
第五章
（3）乳化剂的选择
第五章
5油乳剂型检验：取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于 冷水中，观察疫苗是否分散。第一滴分散属正 常现象，以后各滴均应不分散。 稳定性：取疫苗装于试管内，以3000rpm离心15min 观察油相是否分层。 粘度测定：用1ml吸管（下口的口径1.2mm，上口内 径2.7mm）吸取25℃左右的疫苗1ml，垂直自然 流出，记录流出0.4ml所需的时间。3次平均值应 在10sec以下。
第五章
（二）对机体的作用
1.对单核巨噬细胞中：引起细胞浸润，促进细胞增 殖。 2.对T淋巴细胞的作用：促进T淋巴细胞增殖分化， 形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。 3.对B淋巴细胞的作用： 4.非特异性免疫增强作用：加强NK细胞和K细胞的 非特异性免疫性。
第五章
四 分类
颗粒型佐剂
（一）物理性质
非颗粒型佐剂
第五章
三 蜂胶佐剂
1.蜂胶是由蜜蜂上颚腺的分泌物和由密蜂采集 的天然有机物、无机物以及蜂蜡，花粉等组成。 研究证明，蜂胶有广谱的生物学特性，既能 引起特异性免疫应答，又能启动非特异性防御 机制。
2. 蜂胶佐剂为含50%蜂胶的蜂胶乙醇浸出液
第五章
第三节 新型免疫佐剂
一 细胞因子类佐剂
IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、IFNγ
FCA
杀死的结核分支杆菌或卡介苗 0.5mg/ml
第五章
缺点
1. 引起局部组织损伤，影响肉质 2. FCA含分枝杆菌，使结核菌素试验呈阳性反 应 3. 粘稠，注射比较费力 4. 可能致癌
第五章
4 乳化
油相： 94 份白油、6份司本-80 、2份硬脂
酸铝
水相：5%吐温-80 油：水=1~3 ：1 与吐温-80混合，之后加入已经准备好的油 乳剂中→W/O 2%吐温-80 、生理盐水+疫苗→双相乳剂 疫苗（水-油-水乳剂或称多型乳剂。优点：粘稠 度低，在注射部位易分散，局部反应轻微及佐剂 效应良好 。
第五章
二 油乳佐剂
指一类由油类物质和乳化剂按一定比例混 合形成的佐剂。
1白油佐剂：制菌用的的白油应无多环芳烃化合 物，粘度低、无色、无味和无毒性。国内王明 俊等对采购多种白油剂乳化剂进行理化测定。 乳化剂作用及对动物毒性试验作比较，初步选 出杭州炼油厂 10 号白油与北京市石油化工合成 白油，上海大众制药厂的司本 -80 及吐温 -80 。 国外多用Marcol-52白油和 Arlaola乳化剂。
第五章 佐剂
内 容 简 介
第一节 概述 第二节 常规免疫佐剂 第三节 新型免疫佐剂
第一节 概述
一 概念
第五章
1 佐剂 (adjuvant) ：词来源于拉丁语，原为辅助之意。 在免疫学和生物制品学上又称为免疫佐剂 （immunologic adjuvant）。凡是可以增强抗原特异性 免疫应答的物质均称之为佐剂，也称免疫佐剂。 2特点 （ 1 ）能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱 导机体产生特异性免疫应答。 （ 2 ）用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体可 产生足够的免疫应答和高滴度的抗体。
种类多，根据使用目的的不同，可选择适当的乳化剂，通 常可根据用途依据乳化剂的HLB 值（亲水亲油平衡值）进行 选择。乳化剂的 HLB值与其在水中的溶解度相关，亲水行强 的在水中的溶解度大， HLB 值高，容易形成水包油型油乳剂 （即水为分散相，油为连续相， O/W）；亲油性的在水中溶 解度小，HLB 值低，易形成油包水型油乳剂。 已证明，HLB值为4~6 的乳化剂适用于制造 W/O型油乳剂； HLB 值在 8~18 的乳化剂适用于 O/W型油乳剂。制造油乳剂苗， 常用乳化剂司本-80（HLB值4.3，在水中溶解度低，不易在水 中分散，溶于多种有机溶剂，性质稳定，易形成 W/O 型油乳 剂）吐温 -80 ，其 HLB 值为 15.0 ，易溶于水，易形成 O/W型油 乳剂。
第五章
2非颗粒性佐剂
（1）肽类佐剂（peptides）：如分支杆菌中的胞壁 酰二肽，MDP）、脂肽、免疫调节多肽。
（2）表面活性分子佐剂（surface-active molecules）：硬脂酸铝（阳离子表面活性剂）、 Tween-80(非离子性表面活性剂)。能降低液体表 面张力。 （3）核酸及其衍生物类佐剂（nucleic acild derivatives）、CpG DNA。
第五章
（4）含硫复合物类佐剂：例如左旋咪唑 （5）细胞因子类：IL-1、IL-2 IL-4 IFNγ （6）碳水化合物高分子类佐剂：硫酸多糖、香 菇多糖 （7）脂质分子类佐剂：脂多糖（LPS）、脂溶 性维生素 （ 维生素A、维生素E） （8）其他：霍乱毒素（CT ）、大肠杆菌不耐 热肠毒素（ LT ）、 破伤风类毒素（ TT）
微生物及其组分 第五章 （二）生物性质 非微生物及其组分 贮存型 （三）体内存留时间
非贮存型
第二节 常规免疫佐剂
一 铝盐类佐剂
第五章
（一）氢氧化铝胶 又称铝胶，其佐剂活性与质量密切相关， 质优的铝胶分子细腻、胶体性良好、稳定，吸附力强，保存后 其吸附力不变。
1.铝粉加烧碱合成法： （1）2AL(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3.18H2O （2）Al2(SO4)3.18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
第五章
2.乳化剂
（1）概念： 将一种溶液或干粉分散成细小 的微粒，混悬于另一不相溶的液体中所形 成的分散体系，称为乳剂。被分散的物质 称为分散相（内相），承受分散相的液体 称连续相（外相），两相间的界面活性物 质称为乳化剂。
第五章
（2）种类
天然乳化剂：来自动植物，如阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄、炼乳
3弗氏佐剂
第五章
由美籍匈牙利细菌学家 Freund 于 1935 年研究 成功。包括弗氏不完全佐剂（ Freund’s incomplete
adjurant;FIA）和弗氏完全佐剂（ Freund’s complete
adjurant;FCA） 矿物油（液体石蜡） 75%~85% FIA 乳化剂（羊毛脂） 15%~25%
第五章
二 标准
WHO要求，生物制品的佐剂，在考虑其免疫增强 效果的同时，必须具有以下条件： 1.无致癌性 2.无毒性 3.化学纯 4.吸附力强 5.易于吸收 6.不含对人体或动物体有交叉反应的抗原物质 7.稳定
第五章
三 作用机理
佐剂加强免疫反应的机理非常复杂，至今尚未 完全清楚。 （一）对抗原的作用 1. 增加抗原表面积。某些佐剂可以吸附许多抗原， 使抗原表面积明显提高，特别是可溶性抗原或半 抗原，经胶体颗粒吸附后，表面积上升，抗原性 加强，所产生的抗体滴度明显提高， 2. 延长抗原在组织中的贮存时间，使抗原缓慢降解 和缓释。
2 .明矾加碳酸钠合成法 2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2 3.用三氯化铝与氢氧化钠合成 AlCl3+3NaOH →Al(OH)3↓+3NaCl
第五章
（二）明矾
AlCl 3有钾明矾[KAl(SO4)2.12H2O]和铵明 矾[AlNH2(SO4)2.12H2O]两种。作为佐剂用于 生物制品的主要是钾明矾（即硫酸铝钾）。
第五章
1颗粒型佐剂
（1）盐类佐剂 ： 包括氢氧化铝、磷酸铝、明矾 （2）油水乳剂佐剂：
弗氏完全佐剂（Freund׳s complete adjuvant,FCA） 弗氏不完全佐剂（Freund׳s incomplete adjuvant,FLA） 矿物油白油佐剂
（3）免疫刺激复合物（ISCOM）佐剂 （4）蜂胶(propolis) （5）脂质体佐剂（liposomes）
二 CpG DNA
三 基因工程减毒素：CT、LT、TT
四 免疫刺激复合物（ISCOM）
五 脂质体佐剂
源自文库 第五章 教学结束
思考题
1概念：免疫佐剂，乳化剂。 2佐剂的作用机理。 3常规免疫佐剂有哪些？
阴离子：碱肥皂、月桂酸 钠、十二烷基磺酸钠、硬
离子型 合成乳化剂 脂酸铝
阳离子：氯化苯甲烃铵
非离子型：山梨醇酯
第五章
制备油乳剂灭活苗，最常用的乳化剂 是：司本 -80 （去山梨醇单油酸酯）上海 大众制药厂生产；吐温-80（聚氧乙烯去山 梨醇单油酸酯）上海大众制药厂生产，硬 脂酸铝。
第五章
（3）乳化剂的选择
第五章
5油乳剂型检验：取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于 冷水中，观察疫苗是否分散。第一滴分散属正 常现象，以后各滴均应不分散。 稳定性：取疫苗装于试管内，以3000rpm离心15min 观察油相是否分层。 粘度测定：用1ml吸管（下口的口径1.2mm，上口内 径2.7mm）吸取25℃左右的疫苗1ml，垂直自然 流出，记录流出0.4ml所需的时间。3次平均值应 在10sec以下。
第五章
（二）对机体的作用
1.对单核巨噬细胞中：引起细胞浸润，促进细胞增 殖。 2.对T淋巴细胞的作用：促进T淋巴细胞增殖分化， 形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。 3.对B淋巴细胞的作用： 4.非特异性免疫增强作用：加强NK细胞和K细胞的 非特异性免疫性。
第五章
四 分类
颗粒型佐剂
（一）物理性质
非颗粒型佐剂
第五章
三 蜂胶佐剂
1.蜂胶是由蜜蜂上颚腺的分泌物和由密蜂采集 的天然有机物、无机物以及蜂蜡，花粉等组成。 研究证明，蜂胶有广谱的生物学特性，既能 引起特异性免疫应答，又能启动非特异性防御 机制。
2. 蜂胶佐剂为含50%蜂胶的蜂胶乙醇浸出液
第五章
第三节 新型免疫佐剂
一 细胞因子类佐剂
IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、IFNγ
FCA
杀死的结核分支杆菌或卡介苗 0.5mg/ml
第五章
缺点
1. 引起局部组织损伤，影响肉质 2. FCA含分枝杆菌，使结核菌素试验呈阳性反 应 3. 粘稠，注射比较费力 4. 可能致癌
第五章
4 乳化
油相： 94 份白油、6份司本-80 、2份硬脂
酸铝
水相：5%吐温-80 油：水=1~3 ：1 与吐温-80混合，之后加入已经准备好的油 乳剂中→W/O 2%吐温-80 、生理盐水+疫苗→双相乳剂 疫苗（水-油-水乳剂或称多型乳剂。优点：粘稠 度低，在注射部位易分散，局部反应轻微及佐剂 效应良好 。