定量分析方法的特点

1.仪器为高效液相色谱仪。 色谱柱的填充剂和流动相的组分应 按各品种项下规定。常用的色谱柱填充 剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八 烷基硅烷键合硅胶最为常用。 Ch. P(2000)中，常以甲醇一水，或加有乙 睛、缓冲液、反离子物质等为流动相。 注样量一般为数微升。柱温一般为 室温，检测器为紫外吸收检测器。
本法特点为：
（1）灵敏度高，荧光分析法的灵 敏度一般较紫外分光光度法为高， 其灵敏度可达10-10g/ml一10-12g/ml （2）荧光分析法应在低浓度溶液 中进行 （3）空白试验
（4）对易被光分解的样品，为使仪器 灵敏度定标准确避免因激发光多次照射 而影响荧光强度，可选择一种激发光和 发射光波长与之近似而对光稳定的物质 配成适当浓度的溶液，作为基准溶液。 在测定供试品溶液时用基准溶液代替 对照品溶液校正仪器的灵敏度。 （5）荧光衍生化试剂 （6）取样少，方法快速
3）仪器价格较低廉，操作简单， 易于普及。 4）应用广泛。
2.朗伯一比耳定律： A=E l C 式中A一吸收度 l一液层厚度；C一 溶液浓度；E一吸收系数，即单位浓度、 单位液层厚度时的吸收度。 有两种表示方式：①摩尔吸收系 数：指在一定波长下，溶液浓度为1 mol/L，厚度为1cm时的吸收度，用ε表 示。②百分吸收系数：指在一定波长 下，溶液浓度为1%（W/V)，厚度为lcm时 1% 的吸收度，用 E 1cm 表示。两者之间的关 系为
1）标准曲线法：配制一系列已知浓 度的标准液，在同一操作条件下，按 同量注入色谱仪，测量其峰面积（或 峰高），作出峰面积（或峰高）与浓 度的标准曲线。然后在相同的条件 下，注入同量供试品，测得待测组分 的峰面积（或峰高），根据标准曲线 或它的回归方程，计算供试品中待测 组分的浓度。
2）外标一点法：各品种项下的规 定，精密称（量）取对照品和供试 品，分别配制成对照品溶液（CR） 和供试品溶液（Cx），分别精密取 一定量，注入仪器，记录色谱图， 测量对照品的峰面积（AR)和供试品 待测成分的峰面积（Ax）（或峰 高），按下式计算含量：
（4）拖尾因子：为保证测量精度，特 别当采用峰高法测量时，应检查待测峰 的拖尾因子（T）是否符合各品种项下 的规定，或不同浓度进样的校正因子误 差是否符合要求。 拖尾因子计算公式为：
T
=
W
0 . 05 h
2 d
1
除另有规定外，T应在0.95一1.05之间。
3.测定法 定量测定时，可根据供试品的 具体情况采用峰面积法或峰高法。 测定供试品中主成分含量时，常用 两种方法：
用本法测定时，应注意仪器的校 正和检定。
（3）计算分光光度法： 当吸收度处在吸收曲线的陡然 上升或下降的部位测定时，影响精 度的因素较多，故对照品和供试品 测试条件应尽可能一致。 若测定时不用对照品，如维生素 A测定法，则应在测定时对仪器作仔 细地校正和检定。
（二）荧光分析法 1. 某些物质受紫外光或可见光照射激发 后能发射出比激发光波长更长的荧光。 当激发光停止照射后，荧光随之消失。 同一种分子结构的物质，用同一波 长的激发光照射，可以发射相同波长的 荧光。 当激发光强度、波长、所用溶剂及 温度等条件固定时，物质在一定浓度范 围内，其荧光强度（也叫发射光强度） 与溶液中该物质的浓度成正比关系，可 以用作定量分析。
×100%
（2)回滴定法（剩余滴定法）：此 法是先加入定、过量的滴定液A， 使其与被测药物反应，待此反应进 行完全后，再用另一滴定液B来回 滴反应中剩余的滴定液A。
1）无空白实验
含量%=
(
V AF A V BF B
W
2）空白实验
−
)× T
× 100 %
× 100%
含量%=
B
(
V
BO
−
V
W
)× T B × F
在实际工作中，所配制的滴定 液的摩尔浓度与药典中规定的摩尔 浓度不一定恰好符合，此时就不能 直接应用药典上所给出的滴定度 （T），需乘以滴定液浓度校正因数 （F）即可换算成实际的滴定度 （T'），即 T'=T× F
式中F=
实际摩尔浓度 规定摩尔浓度
含量％＝
V ×T ' W
×100% =
V ×F ×T W
（三）色谱分析法 根据其分离原理可分为：吸附 色谱、分配色谱、离子交换色、柱色谱法、气相 色谱法、高效液相色谱法等。 色谱分析法具有高灵敏度（可 达10-12g/ml一10-15g/ml）、高选择 性、高效能、高速度及应用广泛等 特点。
（1）高效液相色谱法 高效液相色谱法是用高压输液 泵将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动 相泵入装有固定相的色谱柱，经进 样阀注入供试品，由流动相带入柱 内，在柱内各成分被分离后，依次 进入检测器，色谱信号由记录仪或 积分仪记录。
（2）分离度：定量分析时，为便 于准确测量，要求定量峰与其他峰 或内标峰之间有较好的分离度，分 离度（R）的计算公式为：
R=
2 (tR1 −tR 2 ) W1 + W 2
除另有规定外，分离度应大于1.5。
（3）重复性：取各品种项下的对照溶 液，连续进样5次，除另有规定外，其峰 面积测量值的相对标准偏差应不大于 2.0%。 也可按各品种校正因子测定项下， 配制相当于80%,100%和120%的对照品溶 液，加入规定量的内标溶液，配成3种不 同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均 校正因子，其相对标准偏差也应不大于 2.0%。
正文中各品种项下规定的条件除固 定相种类、流动相组分、检测器类型不 得任意改变外、其余如色谱柱内径、长 度、固定相牌号、载体粒度、流动相流 速、混合流动相、各组分的比例、柱 温、进样量、检测器的灵敏度等，均可 适当改变，以适应具体品种并达到系统 适用性试验的要求。一般色谱图20分钟 内记录完毕。
2.系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性 试验，两种方法： 2.1 用规定的对照品对仪器进行试验和调 整，应达到规定的要求； 2.2 规定分析状态下色谱柱的最小理论板 数、分离度、重复性和拖尾因子。
ε=
或
M 10
×
E
1% 1 cm
E
1% 1cm
ε× 10 = M
其中M是吸光物质的分子量（即摩尔 质量）。ε多用于研究分子结构，E 多用于定量测定。 ε值的大小反映了物质对某一波长 光的吸收能力，也反映测定反应的灵敏 度，摩尔吸收系数一般不超过105数量 级。 吸收系数ε或 E 都不能直接测得， 而必须采用适宜的已知准确浓度的稀溶 液测得吸收度A后计算求得。
二、光谱分析法 当物质与辐射能相互作用时， 物质内部发生能级跃迁。记录由能 级跃迁所产生的辐射能随波长的变 化所得的图谱称为光谱，利用物质 的光谱进行定性、定量和结构分析 的方法称为光谱分析法。 紫外一可见分光光度法、荧光 分析法、原子吸收分光光度法和红 外分光光度法等。
（一）紫外-可见分光光度法 1.特点紫外-可见分光光度法是根 据物质分子对波长为200nm 760nm这一范围的电磁波的吸收特 性所建立起来的光谱分析方法。主 要特点如下： 1）灵敏度高，可达10 -4g/ml一 10 -7g/ml 2）准确度高，相对误差为2%一5 ％。
3.百分含量计算 在测定药物含量时，常用直接 滴定法和回滴定法，其计算方法如 下。 （1)直接滴定法：此法是用滴定液 直接滴定，以求得被测药物的含 量。 V ×T × 100 % 含量％= W
药典收载的容量分析法都给出 了滴定度值，根据供试品取量 （W）、消耗滴定液的体积（V)和 滴定度（T），即可计算出被测药 物的百分含量。
第二节
定量分析方法特点
（一）容量分析法的特点 容量分析法是将已知浓度的滴 定液由滴定管滴加到待测药物的溶 液中，直到所加滴定液与被测药物 按化学计量反应完全为止，然后根 据滴定液的浓度和消耗的体积，就 可计算出被测药物的含量。
滴定终点与等当点不符---滴定误 差，需要选择合适的指示剂指示终 点。 通常用于测定高含量或中含量组 分，即被测组分的含量在1%以上。容 量分析法比较准确，一般情况下相对 误差可达0.2%以下。 容量分析法操作简便、快速、比 较准确，仪器普通易得。
1% 1cm
1%
1cm
3.仪器校正和检定 4.对溶剂的要求 测定供试品之前， 应先检查所用的溶剂在供试品所用的 波长附近是否符合要求。 5.测定法 测定时，须作波长校正。 并作空白吸收。 用于含量测定的方法一般有以下 几种：
（1）对照品比较法：按各品种项下 的方法，分别配制供试品溶液和对 照品溶液，对照品溶液中所含被测 成分的量应为供试品溶液中被测成 分标示量的100±10%，所用溶剂也 应完全一致，在规定的波长测定供 试品溶液和对照品溶液的吸收度 后，按下式计算供试品中被测溶液 的浓度：
式中Ax为供试品峰面积（或峰高）， Cx为供试品的浓度,f为校正因子,A’s和C’s 分别为内标物质的峰面积（或峰高）和浓 度。 当配制校正因子测定用的对照溶液和 含有内标物质的供试品溶液使用同一份内 标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必 精密称（量）取。
（2）外标法测定供试品中主成分 含量：外标法是以供试品的对照品 或标准品作对照物质，相比较以求 得供试品的含量，要求进样量准确 及操作条件稳定。 外标法可分为标准曲线法和外 标一点法。
C
X
AX = (
AR
)C
r
C x × D × 100 含量 % = W
式中Cx为供试品溶液的浓度,Ax为 供试品溶液的吸收度，Cr为对照品溶液 的浓度,Ar为对照品溶液的吸收度，D为 稀释倍数，W为供试品取样量。
（2）吸收系数法：按各品种项下 的方法配制供试品溶液，在规定的 波长处测定其吸收度，再以该品种 在规定条件下的吸收系数计算含 量。 1% ( E 1 cm ) x × 100% 1% 含量％= ( E 1 c m ) r
式中As为内标物质的峰面积 （或峰高）,AR为药物对照品的峰面 积（或峰高），Cs为内标物质的浓 度，CR为药物对照品的浓度。 再取各品种项下含有内标物质 的供试品溶液，注入仪器，记录色 谱图，测量供试品中待测成分和内 标物质的峰面积或峰高，按下式计 算含量：