转基因成分PCR定性检测技术

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转基因技术简单介绍
转入的基因
调控元件：启动子、终止子、内含子、增强子等； 标记基因：hpt基因，NptII基因，GUS基因等； 目的基因：抗虫性状的cry系列基因、
抗除草剂性状的EPSPS基因、PAT基因、 BAR基因等。
Mon810玉米
P35S
Terminator Intron HSP - CryAb
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6ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
转基因技术简单介绍
❖ 植物转基因方法
农杆菌介导转化法
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自 然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生 冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌的细胞中分别含有Ti质 粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细 胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天 然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的TDNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整 合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。
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转基因技术简单介绍
基因枪介导转化法
利用火药爆炸或高压气体加速(这一加速设备被称为基因枪)， 将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物 组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出 其中转基因阳性植株即为转基因植株。
花粉管通道法
在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开 花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞， 并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成 为带转基因的新个体。该方法于20世纪80年代初期由我国学者周光 宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道 法培育出来的。
2)基因特异性PCR检测:以插入外源基因的特异性DNA片段 作为目的检测片段，例如常用的Cry 1Ac , Cry lAb和CP4-EPSPS 等基因。目前商业化种植的转基因产品的外源目的基因基本都己 建立了这种检测方法。但是，该法不能特异性的区分具有相同农 艺性状的转基因植物及其品系。
❖转基因生物
是指遗传物质基因被改变的生物，其基因改变的方式是 通过转基因技术，而不是以自然增殖或自然重组的方式产生。 简称：GMOs
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转基因技术简单介绍
非转基因油菜
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喷施草甘膦前
抗草甘膦油菜RT73
喷施草甘膦后 返回
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转基因技术简单介绍
中国培育的转基因抗虫水稻Bt63
据“农业生物技术应用国际服务组织（ISAAA）”2011年3月7日发 布的年度报告称：2010年，共有29个国家种植了1.48亿公顷转基因作 物；1996年到2010年，全球转基因作物累计种植面积超过10亿公顷。
2010年中国种植转基因作物面积达350万公顷，排名世界第六， 其中转基因棉花330万公顷，其余是转基因木瓜，转基因番茄，转基 因辣椒等。截止目前，中国共批准发放7种转基因植物的农业转基因 生物安全证书，耐贮存番茄、抗虫棉花、改变花色的牵牛花、抗病的
PCR测定法（通用元件筛选、基因特异性检测、构建特异性检测、 品系特异性检测）
❖ 转基因成分PCR定性检测
DNA提取 PCR扩增 电泳及分析（琼脂糖凝胶电泳、结果分析、异常情况分析）
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转基因成分PCR定性检测技术
❖ 转基因检测方法分类
生物化学测定法
生物化学测定是通过检测转基因作物某一特性的缺失或存 在，来判断样品是否为转基因产品。根据检测目标可以分为检 测外源抗性基因和检测外源标记基因两种。
其他 Bt 玉米
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P35S
Terminator
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转基因作物现状
❖ 转基因作物现状
转基因作物的研究最早始于20世纪八十年代，1983年全球第一例 转基因植物在美国问世，1987被允许进入田间鉴定试验，1992年开始 大田产量试验，1995年完成安全性评价研究，1996年在美国最早开始 商业化生产，当年种植面积174万公顷。
辣椒、抗病的番木瓜、抗虫水稻、转植酸酶基因玉米。
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转基因作物现状
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转基因作物现状
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转基因作物现状
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转基因作物现状
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转基因成分PCR定性检测技术
❖ 转基因检测方法分类
生物化学测定法
蛋白质分析法
种子转基因成分PCR定性检测技术
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种子转基因成分PCR定性检测技术
1、转基因技术简单介绍 2、转基因作物现状 3、转基因成分PCR定性检测技术
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转基因技术简单介绍
• 什么是转基因 • 植物转基因方法 • 转入什么基因
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转基因技术简单介绍
❖什么是转基因
将不同来源的DNA分子进行重组，克服了天然物种生殖 隔离的屏障，将具有某种特性的基因分离和克隆，再转接到 另外的生物细胞内。转基因可以按照人们的意愿使生物体的 遗传性状发生改变，创造出自然界中原来并不存在的新的生 物功能和类型。
蛋白质分析法
蛋白质分析法又称免疫分析法，是检测通过基因修饰获得的 外源蛋白质最常用的方法。该法利用抗体与抗原的特异性结合来 检测外源蛋白的存在，主要分为酶联免疫分析法和侧向流动免疫 试纸法两种。
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转基因成分PCR定性检测技术
PCR检测法
PCR检测法是目前检测转基因种子最普遍的方法，根据检 测策略可分为通用元件筛选PCR检测、基因特异性PCR检测、 构建特异性PCR检测和品系特异性PCR检测四类(见图1)；按检 测原理则可将其分为定性PCR检测和定量PCR分析两类。
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转基因成分PCR定性检测技术
1)通用元件筛选PCR检测:主要以转基因产品的通用元件和 标记基因为特异性扩增片段，例如CaMV35S启动子、NOS终止 子等通用元件以及NPTⅡ , Hpt , GUS等标记基因。由于相同的 通用元件和标记基因经常被用于多种转基因产品的研究与生产中， 因此该法只能用于转基因产品检测的初步筛选。至于导入了何种 基因，还需作进一步的鉴定。