重组人干扰素生产工艺

基因工程干扰素a与天然干扰素a的序列区别？
重组人干扰素生产工艺
概述
2、重组干扰素的临床应用
• 广谱抗病毒活性（rhuIFNα及其PEG化，α2a, α2b, alfacon-1, α1b, ）
✓ 慢性乙型、丙型、丁型肝炎；疱疹、病毒性角膜炎…
• 直接抗肿瘤活性（rhuIFNα及其PEG化） ✓ 毛细胞和慢性髓样白血病、 Kaposi肉瘤、非霍奇金
IFNa1b MCDLPETHSLDNRRTLMLLAQMSRISPSSCLMDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAPAISVLHE 60
Alfacon-1
QTHSLGNRRALILLAQMRRISPFSCLKDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAQAISVLHE
IFNa2a MIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILA 119 IFNa2b MIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILA 119 IFNa1b LIQQIFNLFTTKDSSAAWDEDLLDKFCTELYQQPNDLEACVMQEERVGETPLMNADSILA 120 Alfacon-1 MIQQTFNLFSTKNSSAAWNESLLEKFYTELYQQLNDLEACVIQEVGVTETPLMNVDSILA
rhuIFNα 、Alfacon-1、rhuIFNβ 、rhuIFNγ
重组人干扰素生产工艺
概述
上市重组人干扰素a的氨基酸序列
IFNa2a MCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEF-GNQFQKAETIPVLHE 59
IFNa2b MCDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRRISLFSCLKDRHDFGFPQEEF-GNQFQKAETIPVLHE 59
165-166个氨基酸组成，对乙醚、氯仿敏感； 容易吸附在介质上。
重组人干扰素生产工艺
概述
天然人干扰素基因
基因组测序表明，至少存 在17 基因和 13 假基因
重组人干扰素生产工艺
概述
2、重组人干扰素的种类
全球约有十几个国家批准基因工程重组人干扰 素(Recombinant human interferon, rhuIFN) 上市。
IFNa2a VRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE 166 IFNa2b VRKYFERITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE 166 IFNa1b VKKYFRRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIVRSLSLSTNLQERLRRKE 167 Alfacon-1 VKKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQERLRRKE
重组人干扰素生产工艺
概述
1、天然干扰素的种类
• 具有种属特异性 人源干扰素-人干扰素,牛源干扰素-牛干扰素,…
• 天然人干扰素分类-抗原特异性 ✓ I型干扰素：IFNα、IFNβ[糖基化蛋白]、IFN 、
IFN 、IFN ✓ II型干扰素：IFNγ[糖基化蛋白] ✓ III型干扰素：IFN-λ1，IFN-λ2， IFN-λ3 • 氨基酸序列差异分不同亚型：IFNα2a、α2b、α1b
重组人干扰素生产工艺
概述
1、干扰素(interferon，IFN）的种类
• 概念：机体受到病毒感染时，免疫细胞产生的一 组结构类似、功能接近的细胞因子。
• 细胞因子:由机体细胞合成分泌的能调节生理功能、 参与免疫应答和介导炎症反应等小分子可溶性蛋 白[与免疫球蛋白区别]。
• 发现:1957年英国国立医学研究所科学家Isaacs A 和Lindenmann J,研究病毒干扰现象时，发现一种 抑制病毒繁殖的物质。
概述
人干扰素IFN α的结构与理化性质
CDLPQTHSLGSRRTLMLLA QMRKISLFSCLKDRHDFGF PQEEFGNQFQKAETIPVLH EMIQQIFNLFSTKDSSAAW DETLLDKFYTELYQQLNDL EACVIQGVGVTETPLMKED SILAVRKYFQRITLYLKEK KYSPCAWEVVRAEIMRSFS LSTNLQESLRSKE
重组人干扰素生产工艺
概述
主要天然人干扰素
种类 亚型 α 稳定性
产生条件
白细胞 类淋巴 细胞
成纤维 细胞
pH2 稳定， 病毒等诱导 56℃ 稳定
pH2 稳定， 病毒等诱导 56℃ 不稳定
T淋巴细 pH2不稳定 有丝分裂原
胞
56℃不稳定 和抗原诱导
重组人干扰素生产工艺
重组人干扰素生产工艺
概述
3、人干扰素生产工艺路线（2）
• 人源转化细胞系培养生产工艺：
Namalwa培养
合成干扰素
分离纯化
病毒诱导
多亚型混合干扰素
•类淋巴母细胞，非整倍体 •1999年：IFNα-n1/Wellferon, 批准用于临床。 • 优点：首次用细胞培养8000L,实现大规模商业化生产。 • 缺点： 活性低，退出临床应用。
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概述
制药工艺学
Pharmaceutical Technology
重组人干扰素生产工艺
第一节 干扰素概述 第二节 基因工程假单胞杆菌的构建 第三节 干扰素的发酵工艺过程 第四节 干扰素的分离纯化工艺过程
重组人干扰素生产工艺
概述
第一节 干扰素概述
• 干扰素的种类 • 干扰素的临床应用 • 干扰素的生产工艺路线
淋巴瘤… • 免疫调节活性（rhuIFNγ）——慢性肉芽肿瘤… • 多发性硬化症——rhuIFNβ
重组人干扰素生产工艺
概述
3、人干扰素生产工艺路线（1）
•体外诱生干扰素制备工艺： Sendai病毒诱导人白细胞
血浆
人白细胞
分离纯化
人白干扰素
病毒诱导
• 1989年：IFNα-n3/Alferon，批准上市 • 缺点：产量低,1g IFNα，需要 3亿ml人血白细胞 来源困难，工艺复杂，收率低，价格昂贵 潜在的血源性病毒污染的可能性，限制了临床应用