兰花组织培养技术研究

4.1植物生长调节剂对根状茎增 殖及分化的影响
• 4.1.1 增殖影响 • 周全,余平（2009）优化筛选出适合根状茎增殖的
培养基为：1／2MS+3 mg/L BA+蔗糖3％+香蕉5 ％+琼脂0．8％ .
• 张士良等（2006ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ认为生长素浓度在0～3 mg/L 范围内，越高越利于根状茎的形成，但相对抑制 了根状茎的增殖，IBA促进生长的效果显著优于 NAA，以1.0 mg/L 浓度最好。
• 周全，余平（2009)用素心春兰进 行实验，先用液体培养后转入固 体培养有利于春兰根状茎新生长 点的产生，采用固体培养的重量 增殖倍数最高，而用液体培养的 效果最差。
4植物生长调节剂对兰花组培的影响
• 常用的外源生长物质主要是生长素类（IAA、 IBA、NAA和2,4-D等）和细胞分裂素类 （BA、KT和ZT等）。
• 石乐娟（2006）以茎尖诱导产生的春兰‘绿 云’(Cymbidium goeringii‘Ltiyun’)腹轮艺品种的类原球 茎为材料进行实验。
培养基 Culture medium
根状茎增殖倍数 Muhiplication ratio
1／2MS(固体Solid 3．333±0．50 state)
• 黄磊等（2004）用春兰和大花蕙兰（C. hybrids） 的杂交种子，经非共生萌发得到了无菌试管苗。
种子消毒的方法
• 先用镊子取出花粉块，轻轻放在柱头上。授粉成功后，子 房逐渐膨大，结果。剪下果实。用75%浸泡30S,倒人次 氯酸钠溶液消毒20MIN，蒸馏水洗净4次,切开果实,播在 培养基上，进行无菌繁殖，3-4个月就可发芽。
• 余道平（2005）在春兰离体培养时，采用了MS、 1/2MS和改良MS三种培养基，结果发现以1/2MS 为基本培养基效果最好，改良MS次之，最差的 是MS。
3培养方式的选择
• 兰花的培养方式有固体培养、液 体培养和液——固培养等3种
• 傅向东等（1997）；张菊野等 （1993）发现春兰原球茎生长与 分化成苗在液体培养时有较好结 果。
• 4.1.2 分化影响
• 石乐娟（2006年）将长度超过10 mm，直 径2 mm以上且生长粗壮的根状茎接种在1 ／2MS培养基上，添加不同浓度组合的6BA与IBA，以促进分化。表明1／2 MS+ 1.0 mg/L 6-BA + 1.0 mg/L IBA 更利于根状 茎的分化，植物生长调节剂浓度过高或过 低均不利于分化。
4.2植物生长调节剂对芽增殖的影响
• 余道平(2005）提出当NAA浓度为0.2 mg/L、 6-BA浓度为2.0 mg/L时，芽的增殖倍数最 高（2.67）。当NAA浓度为0.3 mg/L、6BA浓度为3.0 mg/L时，芽的增殖倍数有所 下降，芽生长不良且有明显的分泌物产生 和一定频率的褐化。
种子成熟度对发芽的影响
• 郑 琪，赵虎等（2007年）用春兰（小打梅）×春兰（绿 壳素）、进行实验，发现未成熟种子的发芽速度最快， 快的30 d发芽，最慢的60 d发芽均比同组合的成熟种子 提早发芽。
• 邢 海，褚剑峰等（2007年）用春兰（外碟）×春兰（大 富贵）组合的种子进行实验研究表明采集的未成熟种子 的发芽率较高，最高的达到60％，最低的也有20％ ，均 高于同组合的成熟的种子发芽率。
• 培养程序：外植体--诱导形成类原球茎--类 原球茎大量增殖--分化出小植株--生根壮苗 培养--温室栽培--室外栽培
1外植体的选择
• Bernard（1899）年首次分离出兰花的根菌，并 用其感染兰花的种子进行萌发试验，创立了兰花 种子共生萌发的方法。
• 孙志栋等（2006）用春兰的种荚成功诱导出原球 茎。
B 5(固体Solid state) 5．667±0．19
根状茎平均直径 Average diameter(mm) 0．97±0．04
0．53±0．07
1／2MS(液体Liquid 3．667±0．69 state)
0．63±0．09
• B5 培养基上的根状茎增殖较快，培养50 d后根
状茎呈深绿色，部分开始褐化。1／2MS固体培 养基上的根状茎直径较大，生长粗壮，颜色嫩绿， 生长状况明显优于B5。 • B5培养基有利于根状茎短期的快速增殖，长期继 代培养及保存宜选用1／2MS固体培养基。
兰花组织培养技术研究
植物激素的配制
1） IAA IBA GA3先溶与少量95%酒精，再加水定容到一 定浓度。 1N NaoH 2） NAA可溶于热水或少量95％的酒精中，再加水定溶到
一定浓度。 1N NaoH
3） 2，4－D不溶于水，可用1mol的NaOH溶解后，再加 水定容至一定浓度。
4） KT和BA先溶于少量1mol的HCl中，再加水定容。
5） 玉米素先溶于少量95％酒精中，再加水至一定浓度。
组织培养
• 1外植体的选择 • 2培养基的选择 • 3培养方式的选择 • 4植物生长调节剂的影响 • 5附加物对根状茎增值与分化的影响 • 6分割方式的影响 • 7光照的影响 • 8活性碳的影响 • 9糖浓度的影响 • 10其他影响因素
• 组织培养：就是分离植物体的一部分，如 茎类、芽、叶、花、幼胚等，在无菌试管， 并配合一定的营养、激素、温度、光照等 条件，使其产生完整植株。由于其条件可 以严格控制，生长迅速，1-2个月即为一个 周期，因此在花卉植物的生产上有重要应 用价值。
2基本培养基的选择
• 中国兰组织培养的不同阶段对培养基要求 不同，如用于原球茎诱导增殖的培养基， 常用的是改良的MS、White、VW、 Knudson C、Kyoto（王熊，1988）等。
• 春兰需要无机盐含量低的培养基，其长期 继代培养以1/2MS为宜，而蕙兰、墨兰则 要求无机盐含量高的培养基。（张菊野等， 1993；陈丽等，1999）
茎尖消毒方法
• 先在栽培2、3年的兰株根部．切取2～3 cm的生 长芽。用流水冲洗20 min。在温度为22～25℃的 无菌组培室里。把最外面的l～2片苞叶去掉，放 在次氯酸钠溶液中浸泡l5 min，灭菌。然后剥离。 切割成2～5 mm的茎尖，接种到准备好的培养基 上，移至培养场所。3~4个月后发出根状茎。