南开大学微生物学实验_一

2. 革兰氏染色
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色方法
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
3、用乙醇冲洗进行脱色。在经历脱色后仍将结晶 紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰 氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。
微生物学实验
(本科生必修课 共32学时)
任课教师
牛淑敏 严冰 魏东盛 杨建华
教 材《微生物学实验》 杨文博主编 生物基础教学中心
教学安排与学时分配
• 实验1 • 实验2 • 实验3 • 实验4 • 实验5 • 实验6
每周4学时 实验室环境和人体体表微生物的检测 细菌形态的观察 细菌的简单染色；革兰氏染色 细菌荚膜和鞭毛染色；鞭毛运动观察 放线菌、真菌形态结构的观察 微生物测微技术和计数
实验材料
1.金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus)
2.变形杆菌
(Proteus vulgaris)
3.奋森氏螺旋体
(Borrelia Vincenti)
实验方法与步骤：
• 二、实验方法与步骤： • （一）制片
无菌涂片→自然风干 → 微火固定
• （二）染色： 1．单染：用美蓝染色，3-5分钟。
革兰氏染色结果片
3. 螺旋体染色： a) 用无菌牙签取各自牙垢少许 b) 制片 c) 草酸铵结晶紫染2-3分钟 d) 水洗 、吸干 e) 油镜观察。
奋森氏螺旋体：呈螺旋状，能活泼运动，分属疏螺旋 体属，是一类介于细菌与原生动物之间的微生物。
(三）细菌压滴片的制作
1 取一载玻片，放在载玻片架上，用笔标 记菌体名称。
2 点燃酒精灯，取一小滴无菌水，放于玻 片中央。
3 无菌操作取出少许菌苔，放于玻片水中 涂匀。
4 取盖玻片，由一端与玻片的菌液接触， 徐徐放下盖玻片。然后，观察。
教学内容
• 细菌的制片及革兰氏染色方法步骤
用金黄色葡萄球菌，变形杆菌制简单染色片观察。 用金黄色葡萄球菌，变形杆菌制革兰氏染色片观察。
• 用金黄色葡萄球菌制细菌压滴片. • 观察金黄色葡萄球菌，变形杆菌试管
• 实验7 培养基的制备与灭菌
• 实验8 微生物的纯种分离与培养
• 实验9 细菌鉴定中生理生化反应
• 实验10 水中微生物的检测(开放）
• 实验11 产蛋白酶和淀粉酶芽孢杆
•
菌的分离和活力检测（开放）
（一）细菌的染色及形态 观察 （一）细菌的染色及形态观察 (实验3，2)
(实验3，2)
目的要求
的斜面菌苔特征
实验报告及思考题
• 记录本实验观察结果。 • 试述革兰氏染色方法及原理。 • 革兰氏染色过程中，哪些因素是成败关
键，为什么？ • 使用油镜观察时，应注意什么？ • 描述金黄色葡萄球菌，变形杆菌试管的
斜面菌苔特征。
不同的微生物有其固有的培养特征，直 线接种在固体培养基上培养时，会呈现 出丝状，带刺状、小突起状、薄膜状、 扩展状等菌苔特征。
细菌的个体微小（1～10 μm）
光学显微镜下可以看到它们的个 体形态
球形、杆状、和螺旋形等
染色后的菌体与背景形成鲜明的 对比，在显微镜下更易于识别。
• 简单染色法是利用单一染料对细菌进行 染色的一种方法。适用于菌体一般形状 和细菌排列的观察。
认识细菌的基本形态，学习和掌握细菌压滴 片的制作方法。
学习微生物涂片染色的基本技术。 掌握微生物革兰氏染色的基本原理和方法。 熟练掌握显微镜(油镜)的使用方法。 了解不同的微生物在斜面上、固体培养基和
液体培养基中百度文库生长特征。
实验原理
微生物的培养特征是指微生物在固体培 养基上和液体培养基中生长后所表现出 的群体形态特征。
4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂 片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的革兰 氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳 性细菌继续保持深紫色。
细菌细胞壁结构示意图
Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall
• 常用碱性染料进行简单染色，这是因为： 在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细 胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时， 带正电荷，因此碱性染料很容易与细菌 结合使细菌着色。
常用作简单染色的染料有：美蓝、 结晶紫、碱性复红等。
革兰氏染色法是细菌学中最重要 的鉴别染色法，利用两种不同性质 的染料即结晶紫和沙黄先后染色菌 体，染色结果将细菌分为阳性和阴 性两大类。