植物细胞工程实验题

1、高压灭菌锅的工作原理和注意事项？
答：工作原理：在密闭的高压灭菌锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。

在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。

在此蒸气温度下，持续15—30分钟，可杀灭各种微生物及高度耐热的芽孢。

注意事项：
a 待灭菌的物品放置不宜过紧；
b 堆放灭菌包时应注意安全阀放汽孔位置必须留出空气，保障其畅通，否
则易造成锅体爆裂事故。

c 必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；
d 灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外
溢甚至导致容器爆裂。

须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。

2、超净工作台的工作原理是什么？
答：鼓风机送入的空气先通过一个前置过滤器，滤掉大部分尘埃，再经过一个高效过滤器，除去了大于0.3um的尘埃、真菌和细菌孢子等。

从而形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，其流速为24~30m/min，这样的流速不会妨碍酒精灯的燃烧，同时工作人员在这样的无菌条件下操作可保持无菌材料在转接过程中不受污染。

3、母液配制的注意事项。

答：1）配制母液所需药品应采用分析纯或化学纯试剂。

2）配制母液用水为蒸馏水或去离子水，试剂可以通过加热或磁力搅拌器加热溶解。

3）母液保存时间不宜过长，如发现母液有混浊或沉淀现象发生，则弃之不用。

4）母液浓度不能过高，否则易产生结晶，影响试验效果。

5）在配制大量元素母液时，混合、溶解各种无机盐时要注意先后顺序，尽量把Ca2+，SO42-,PO43- 等离子错开分别溶解，同时稀释浓度要大些，并要慢慢地边混合边搅拌。

4、培养基配制过程中应注意哪些因素？培养基为什么要煮沸后再分装？
答：培养基配制过程中应注意PH和灭菌；①PH影响外植体和培养材料对
离子的吸收，过酸过碱的培养基影响培养材料的生长；此外，琼脂培养基的PH 值还影响到培养基的凝固状况。

②灭菌，植物组织培养必须在无菌环境中进行。

培养基煮沸后再分装的原因：因为含琼脂的培养基会在40℃左右时凝固，因为要先在水浴中加热，使其成为均匀液态时在尚未冷却情况下尽快分装。

5、培养基的灭菌过程。

答：①检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。

把分装好的培养基及其他需灭菌的各种器具和蒸馏水放入灭菌锅的消毒桶内。

②盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间参数，开启电源加热灭菌。

③灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。

④刚灭过菌的培养基成液体状，取出时不要用力摇动，否则会导致部分培养基沾附在瓶壁。

放置在水平桌面上自然冷却。

在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。

经检查没有杂菌生长的方可使用。

6、调节pH值应该调高0.2-0.3个单位，为什么？
答：因为在高压灭菌过程中，培养基的某些成分会发生分解氧化，常使培养基的pH值发生一定幅度的变化，pH值的变化方向和幅度取决于多种因素，如培养基的成分，浓度，灭菌时间及温度等，因此在设定培养基pH值时应根据实际情况做适当调整。

7、哪些因素影响培养基的凝固？
答：1）pH值调节不准确，偏酸；
2）灭菌时间过长，破坏了琼脂的结构；
3）琼脂质量及用量的问题。

8、1mol/L HCl和NaOH的配制方法？
答：如要1mol/L HCl 配制1L（36%盐酸密度 1.18g/mL，37%盐酸密度1.19g/mL，）
方法一：须配制1mol/L×1L= 1mol HCl，则1×36.5÷36% ÷1.18 =85.9mL。

方法二：1.18 ×1000×36%÷ 36.5 = 11.64 mol/L，
根据m1*v1=m2*v2，v1= （1mol/L×1L）÷ 11.64 mol/L = 85.9 mL。

即取36%盐酸溶液85.9 mL定容于1L的蒸馏水水中。

1mol/L NaOH的配制方法：取40g NaOH固体溶解于蒸馏水中，最后定容至1L。

9、为什么常在消毒液中加入1～2滴表面活性剂如吐温80？
答：吐温80作为一种表面活性剂，具有乳化、扩散、增溶、稳定等作用。

在消毒液中加入1～2滴吐温80可以促使消毒液更充分地湿润整个外植体组织，进而将消毒液渗透、扩散到菌团内部，达到更好的消毒效果。

10. 在接种过程中，通过哪些措施来防止杂菌对接种工具、接种材料的污染？
污染原因归结为3个方面:
1）是组织培养室或接种室的清洁问题;
2）是外植体自身带菌;
3）是组织培养过程各环节操作不适宜或不严格。

11、胡萝卜切块灭菌后为什么要反复清洗？在接种时为什么一定要切割胡萝卜块的外围？切割多大接种才最合适？被接种的部位一定要含有哪种组织，为什么？
增殖率=（增殖的外植体数量/接种外植体数量）*100%；
增殖系数（倍数）= 继代培养后产生的茎芽总数/继代接种时的外植体个数；
污染率=（污染的外植体数量/接种外植体数量）*100%；
诱导率(% )= (分化出丛生芽的外植体数量/接种外植体数量)*100%；
注：增殖率，诱导率的计算均应除去污染的外植体。