婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定

婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定

一、方法提要

烟酸在人体内转化为烟酰胺，烟酰胺是辅酶Ⅰ和辅酶Ⅱ的组成部分，参与体内脂质代谢，组织呼吸的氧化过程和糖类无氧分解的过程。它能促进消化系统的健康，减轻胃肠障碍；减轻腹泻现象；使皮肤更健康；使人体能充分地利用食物来增加能量；它是婴幼儿不可缺少的维生素之一。

本实验根据《食品安全国家标准—婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定》中提供的方法进行分析测定。试样经热水提取、酸性沉淀蛋白质后，以C18色谱柱分离，用紫外检测器定量。

二、试剂及标准溶液配制

2.1试剂

淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg。

盐酸（分析纯）。

氢氧化钠（分析纯）。

盐酸(2.4mol/L)：准确移取10mL盐酸于50mL容量瓶中，用水定容。

氢氧化钠溶液（2.5mol/L）：称取 5.0g氢氧化钠于50mL容量瓶中，用水定容。

高氯酸（HClO4）：体积分数为60%。

甲醇（CH4O）：色谱纯。

异丙醇(C3H8O)：色谱纯。

庚烷磺酸钠(C7H15NaO3S)：优级纯。

2.2标准溶液配制

2.2.1烟酸及烟酰胺标准储备液（1.0mg/mL）：称取烟酸及烟酰胺标准品各0.1 g（精确到0.0001g），分别置于100mL容量瓶中，用水溶解定容。

2.2.2烟酸及烟酰胺混合标准中间液（40µg/mL）：分别准确吸取烟酸及烟酰胺标准储备液2mL至50mL定量瓶中，用水定容。临用前配制。

2.2.3烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液：分别准确吸取烟酸及烟酰胺混合标准中间液1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL，至50mL容量瓶中用水定容。该标准系列浓度分别为0.80µg/mL、1.60µg/mL、4.00µg/mL、8.00µg/mL。临

用前配制。

三、仪器及工作条件

3.1仪器

高效液相色谱仪，带紫外检测器（北东西分析仪器有限公司）。

pH计：精度为0.01。

超声波振荡器。

天平：感量为0.1mg。

培养箱：30℃～80℃。

3.2色谱条件

色谱柱：C18柱（粒径5μm，150mm×4.6mm）或具有同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇70mL，异丙醇20mL，庚烷磺酸钠1g，用910mL水溶解并混匀后，用高氯酸调pH至2.1±0.1，经0.45μm膜过滤。

流速：1.0mL/min。

检测波长：261nm。

柱温：25℃。

进样量：20μL。

四、分析步骤及分析结果

4.1试样处理

4.1.1含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约

5.0g（精确到0.0001g）加入约25mL45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确到0.0001g）于150mL锥形瓶中，再加入约0.5g淀粉酶，摇匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置于50℃～60℃的培养箱内培养约30min，取出冷却至室温。

4.1.2不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约

5.0g（精确到0.0001g）加入约25mL45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确到0.0001g）于150mL锥形瓶中，振摇，静置5min～10min，充分溶解，并冷却至室温。

4.1.3提取：将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约10min。

4.1.4沉淀及定容：待试样溶液降至室温后，用盐酸调节试样溶液的pH值至1.7±0.1，放置约2min后，再用氢氧化钠溶液调节试样溶液的pH值至 4.5±0.1。将试样溶液转至50mL容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后经滤纸过滤，滤液再经0.45μm微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。

4.2标准曲线绘制

将烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液依次进行色谱测定。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。

表1标准曲线和检出限

组分线性方程相关系数

烟酸Y=1609.52X-334.26r=0.99985

烟酰胺Y=1377.12X-253.62r=0.99987

烟酸标准曲线

烟酰胺标准曲线

4.3试样测定

将试样待测液进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高，根据标准曲线计算出试样待测液中烟酸及烟酰胺各组分的浓度c i。

烟酸和烟酰胺标准品图谱

标准品图谱中第一个样品峰为烟酸，第二个样品峰为烟酰胺。

某品牌婴幼儿1段奶粉

取5.0085g 某品牌婴幼儿1段奶粉样品进行处理测定，图谱中样品峰为烟酸，未检出烟酰胺。

4.4分析结果的表述

4.4.1试样中烟酸或烟酰胺含量的计算

试样中烟酸或烟酰胺的含量按（1）式计算：

m V c i 10021××=Χ或 (1)

式中：

X 1或2——试样中烟酸或烟酰胺的含量，单位为微克每百克（μg/100g ）；m ——试样的质量，单位为克（g ）；

c i ——试样待测液中烟酸或烟酰胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL ）；V ——试样溶液的体积，单位为毫升（mL ）。

4.4.2试样中维生素烟酸总含量的计算

试样中维生素烟酸的总含量按（2）式计算：

X=X 1+X 2 (2)

式中：

X——试样中维生素烟酸的总含量，单位为微克每百克（μg/100g）；

X1——试样中烟酸的含量，单位为微克每百克（μg/100g）；

X2——试样中烟酰胺的含量，单位为微克每百克（μg/100g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

按上述方法测定某品牌婴幼儿1段粉中烟酸总含量为4856.74μg/100g 五结论

用LC—5500高效液相色谱分析乳品中烟酸和烟酰胺的含量，线性范围良好，线性相关系数均≥0.999，峰形较好，重复性较好。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值未超过算术平均值的10%，符合国标的要求。

（吴琳张磊）