《植物组织培养实验指导》
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④ 对带有凡士林，石蜡，或胶布的器皿选用特殊方法处理后，再用常规方法 洗涤。带有凡士林的器皿须先用废纸把凡士林擦去，再用汽油擦洗干净，然后用热 肥皂水煮沸半小时，刷洗后，自来水冲干净。若带有石蜡，可在玻璃器皿下垫几层 废纸，放入 60－70℃温箱中 1 加热－2 小时，待石蜡融化后，再用废纸反复擦 2－3 次即去石蜡再泡入洗衣粉的热水中洗干净最后用自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净若有 胶布粘着物，先用 70%酒精棉球擦数遍，溶解粘胶物，并用少许去污粉刷抺，再用洗 衣粉煮沸半小时，刷洗干净，自来水冲洗，晾干，再泡入洗液。 (2) 金属器皿
(2) 无菌室灭菌（接种室、培养室） ① 用 20%次氯酸钠溶液擦抺工作台，70%酒精擦拭超净工作台。 薰蒸：用甲醛、高锰酸钾提前 1－3 天薰蒸密封房间，方法为甲醛（HCHO） 与高锰酸钾（KMn4）以 10：1 比例混合。 ② 接种前用 70－75%酒精喷雾，使飘在空气中的尘埃沉积下来。 ③ 用紫外光灯进行照射灭菌（波长 2650－2660A 最好）接种箱及用具 30－40 分钟。
4
实验三：培养基母液的配制与保存
一、实验目的：
通过培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、实验原理：
为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓
度高 10—1000 倍的母液，现以 MS 培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母
液的配制方法。
三、主要试剂和仪器
(3) 培养基灭菌（见实验四） (4) 培养材料灭菌（见实验五） (5) 工作人员无菌操作（见实验五）
三、实验步骤
1、 学习配制常用洗涤液和灭菌液 (1) 70%酒精：量取 30ml 蒸馏水，在将 70ml 的 95%酒精缓缓加入到水中。 (2) 20%次氯酸钠溶液：称取 20g 次氯酸钠用少许水溶解，100ml 水定容。
凝胶成像分析系统等。 (8) 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生化分析设备等。
3. 培养器皿及实验用具
(1) 玻璃器皿：试管、三角烧瓶（锥形瓶）、培养皿、试剂瓶、烧杯、量筒、容 量瓶、吸管、滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
(2) 金属材质用具：镊子类（包括接种或转移愈伤组织用的20－25cm长型镊子及 镊取较小的植物组织的尖端弯曲“枪型”镊子）、解剖刀及各种剪刀类等。
KH2PO4
CaCl2.2H2O
分析天平 移液管 量筒 三角瓶 生长调节物质 无机盐类 有机化合物
烧杯 冰箱 母液瓶 。
四、实验步骤：
1. MS 基本培养基母液配制
母液 种类
成分
规定用量 (mg/L)
扩大 倍数
称取量 (mg/L)
母液定容 配 1LMS 培养基 体积(mL) 吸取量(ML)
KNO3
大
量
NH4NO3
元
素
MgSO4.7H2O
3
新购置金属器皿因其上有润滑油或防绣油，用蘸有四氯化碳（CCl4 ）布擦去油 脂，再用湿布擦净，干燥备用。 2. 灭菌 (1) 器皿和用具常用灭菌方法：
① 热压灭菌法：将洗净的培养器皿，用具，用牛皮纸包好，放入高压消毒锅中， 1.1 压力下灭菌 20－30 分钟。
② 干热灭菌法：洗净的玻璃器皿置于电热干燥箱中，150℃40 分钟或 120℃两 小时，待冷却后使用。
《植物组织培养实验指导》
遗传育种教研室 于翠梅、李兴涛、曹萍
1
实验一：实验室基本结构与设备的识别
一、 目的
认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、 实验内容
1. 实验室的基本结构
细胞与组织培养实验室必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基 配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。因此基本实验室组成应包括准备室、 接种室和培养室。
三、 作业
2
1、写出实验室的布局 2、写出实验设备的名称及用途 3、收获与体会
实验二：洗涤与灭菌
一、 实验目的：
学习各种培养器皿及实验用具的洗涤和灭菌方法以及
与组织培养有关的器皿，用具、培养基、接种室、培养室等灭菌方法。
二、实验原理：
1. 洗涤 (1) 玻璃器皿的洗涤
① 新购置的玻璃器皿的洗涤：因有游离碱性物质，使用前先用 1%稀盐酸浸泡 一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。
同时要求对培养物进行细胞学及分子生物学研究时应建立相应的辅助实验室。
2. 常用设备配置
(1) 基本设备：冰箱、天平、酸度计、微波炉、、搅拌器。 (2) 灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫
外灯。 (3) 无菌操作设备：净化工作台。 (4) 光温控制设备：时间程序控制器、空调。 (5) 细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床等。 (6) 细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、倒置显微镜。 (7) 分子生物学研究设备：常温离心机、超低温高速离心机、PCR仪、电泳仪、
② 已用过玻璃器皿：先将残渣除去；用清水洗净，再用热肥皂水或洗衣粉洗 净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水漂洗一次，干后备用。
③ 对一些不宜刷洗的玻璃器皿如：吸管，滴管及较脏的器皿等先用去污粉和 去油剂刷洗，自来水冲干净后，晾干，再浸入硫酸－重铬酸钾洗液中浸泡若干小时， 用夹子取出在自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗 1－3 遍，稍晾不滴水后置于干燥箱 内烘干备用。
2、 培养器皿洗涤：用洗衣粉刷洗组织培养的玻璃器皿及金属器皿，为下一次做培养 基做好准备。 3、 实验室及超净工作台灭菌：用 20%次氯酸钠溶液擦抺工作台，再用 70%酒精擦拭 超净工作台表面。用甲醛与高锰酸钾以 10：1 比例混合，薰蒸接种室及培养室。
四、作业：
1、写出组织培养的玻璃器皿及金属器皿的洗涤过程 2、写出实验室及超净工作台灭菌过程
准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件 好。接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无 菌。பைடு நூலகம்间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外， 应行密闭。培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照 和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。
(2) 无菌室灭菌（接种室、培养室） ① 用 20%次氯酸钠溶液擦抺工作台，70%酒精擦拭超净工作台。 薰蒸：用甲醛、高锰酸钾提前 1－3 天薰蒸密封房间，方法为甲醛（HCHO） 与高锰酸钾（KMn4）以 10：1 比例混合。 ② 接种前用 70－75%酒精喷雾，使飘在空气中的尘埃沉积下来。 ③ 用紫外光灯进行照射灭菌（波长 2650－2660A 最好）接种箱及用具 30－40 分钟。
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实验三：培养基母液的配制与保存
一、实验目的：
通过培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、实验原理：
为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓
度高 10—1000 倍的母液，现以 MS 培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母
液的配制方法。
三、主要试剂和仪器
(3) 培养基灭菌（见实验四） (4) 培养材料灭菌（见实验五） (5) 工作人员无菌操作（见实验五）
三、实验步骤
1、 学习配制常用洗涤液和灭菌液 (1) 70%酒精：量取 30ml 蒸馏水，在将 70ml 的 95%酒精缓缓加入到水中。 (2) 20%次氯酸钠溶液：称取 20g 次氯酸钠用少许水溶解，100ml 水定容。
凝胶成像分析系统等。 (8) 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生化分析设备等。
3. 培养器皿及实验用具
(1) 玻璃器皿：试管、三角烧瓶（锥形瓶）、培养皿、试剂瓶、烧杯、量筒、容 量瓶、吸管、滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
(2) 金属材质用具：镊子类（包括接种或转移愈伤组织用的20－25cm长型镊子及 镊取较小的植物组织的尖端弯曲“枪型”镊子）、解剖刀及各种剪刀类等。
KH2PO4
CaCl2.2H2O
分析天平 移液管 量筒 三角瓶 生长调节物质 无机盐类 有机化合物
烧杯 冰箱 母液瓶 。
四、实验步骤：
1. MS 基本培养基母液配制
母液 种类
成分
规定用量 (mg/L)
扩大 倍数
称取量 (mg/L)
母液定容 配 1LMS 培养基 体积(mL) 吸取量(ML)
KNO3
大
量
NH4NO3
元
素
MgSO4.7H2O
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新购置金属器皿因其上有润滑油或防绣油，用蘸有四氯化碳（CCl4 ）布擦去油 脂，再用湿布擦净，干燥备用。 2. 灭菌 (1) 器皿和用具常用灭菌方法：
① 热压灭菌法：将洗净的培养器皿，用具，用牛皮纸包好，放入高压消毒锅中， 1.1 压力下灭菌 20－30 分钟。
② 干热灭菌法：洗净的玻璃器皿置于电热干燥箱中，150℃40 分钟或 120℃两 小时，待冷却后使用。
《植物组织培养实验指导》
遗传育种教研室 于翠梅、李兴涛、曹萍
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实验一：实验室基本结构与设备的识别
一、 目的
认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、 实验内容
1. 实验室的基本结构
细胞与组织培养实验室必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基 配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。因此基本实验室组成应包括准备室、 接种室和培养室。
三、 作业
2
1、写出实验室的布局 2、写出实验设备的名称及用途 3、收获与体会
实验二：洗涤与灭菌
一、 实验目的：
学习各种培养器皿及实验用具的洗涤和灭菌方法以及
与组织培养有关的器皿，用具、培养基、接种室、培养室等灭菌方法。
二、实验原理：
1. 洗涤 (1) 玻璃器皿的洗涤
① 新购置的玻璃器皿的洗涤：因有游离碱性物质，使用前先用 1%稀盐酸浸泡 一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。
同时要求对培养物进行细胞学及分子生物学研究时应建立相应的辅助实验室。
2. 常用设备配置
(1) 基本设备：冰箱、天平、酸度计、微波炉、、搅拌器。 (2) 灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫
外灯。 (3) 无菌操作设备：净化工作台。 (4) 光温控制设备：时间程序控制器、空调。 (5) 细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床等。 (6) 细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、倒置显微镜。 (7) 分子生物学研究设备：常温离心机、超低温高速离心机、PCR仪、电泳仪、
② 已用过玻璃器皿：先将残渣除去；用清水洗净，再用热肥皂水或洗衣粉洗 净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水漂洗一次，干后备用。
③ 对一些不宜刷洗的玻璃器皿如：吸管，滴管及较脏的器皿等先用去污粉和 去油剂刷洗，自来水冲干净后，晾干，再浸入硫酸－重铬酸钾洗液中浸泡若干小时， 用夹子取出在自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗 1－3 遍，稍晾不滴水后置于干燥箱 内烘干备用。
2、 培养器皿洗涤：用洗衣粉刷洗组织培养的玻璃器皿及金属器皿，为下一次做培养 基做好准备。 3、 实验室及超净工作台灭菌：用 20%次氯酸钠溶液擦抺工作台，再用 70%酒精擦拭 超净工作台表面。用甲醛与高锰酸钾以 10：1 比例混合，薰蒸接种室及培养室。
四、作业：
1、写出组织培养的玻璃器皿及金属器皿的洗涤过程 2、写出实验室及超净工作台灭菌过程
准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件 好。接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无 菌。பைடு நூலகம்间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外， 应行密闭。培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照 和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。