《植物组织培养实验指导》
《植物组织培养实验》PPT课件
• NAA:1mg/mL(先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容)。
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三、作业:
• (一) 一般可将MS培养基分为哪四个部分?分别含有几 种试剂?各种试剂的浓度(mg/L)如何?
• (二) 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA(浓度为 1 mg/mL)各50 mL,则应分别称取多少量的各种试剂? 注意要点有哪些?
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(二)用洗衣粉水(1~2角匙洗衣粉/100 ml水)等 浸洗上述植物材料约5 min,再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液:50%次氯酸钠溶液。
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• (三) 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出,置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯,在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求:
熟悉MS培养基的组成,掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤:
称量 定容。
分别溶解
混合
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2
一,MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• (二)操作人员坐到超净台前,用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• (三)点燃酒精灯,从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗,置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上,用灭过菌的刀 和镊子配合操作,从叶柄处切下,将所有叶片去除,只 留下近茎部的一小段叶柄。
植物组织培养试验
植物组织培养试验《植物组织培养技术》实验指导实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌一、目的要求:1.通过参观,了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2.通过实际操作,学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、材料用具:高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿(试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯),以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪,肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。
三、说明:在进行各类具体的组培实验前,首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的,总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。
植物组织培养是一项十分细致的工作,为了保证植物外植体不受污染,第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒,使它们保持无菌状态,做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧,因此每个学生必须学好这套基本功。
四、方法和步骤:首先在老师带领下参观组培室,并听取讲解,然后配制洗液,称取工业用重铬酸钾40克,溶解在500ml在水中,然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸(或废硫酸)配好的溶液呈红色,铬酸洗液是一种强氧化剂,去污能力强,但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效,铬酸洗液可反复使用,直到溶液呈青褐色为止。
此溶液腐蚀性强,洗涤时需注意。
每人清洗部分玻璃器皿,方法:清水洗净一泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷f清水反复冲洗f蒸馏水淋一遍f烘干备用。
然后清洗部分较脏的玻璃器皿,方法:采用先碱后酸,即用洗衣粉洗刷后冲洗干净f晾干一侵入酪酸洗液,浸泡时间视器皿的肮脏程度而定f清水反复冲洗干净f蒸馏水淋洗一遍f烘干备用。
带有石蜡或胶布的器皿:先将其除去,再用常规洗涤,石蜡用水煮沸数次即可去掉,胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时,再用水冲洗,凉干后浸入洗液,以后的步骤同前。
植物组织培养实验指导
生物技术大实验第一部分植物组织培养实验一、母液的配制和保存(3学时)一、实验目的通过配制MS培养基母液,掌握贮备液的配制和保存方法。
二、原理配制培养基时,为了使用方便和用量准确,通常采用母液法进行配制,即按培养基配方中各试剂的用量,扩大若干倍后再准确称量,分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。
使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例,所需配制的母液为:大量元素母液(母液Ⅰ,浓缩10倍)、微量元素母液(母液Ⅱ,浓缩100倍)、铁盐母液(母液Ⅲ,浓缩100倍)和有机化合物母液(母液Ⅳ,浓缩100倍)等。
三、实验仪器设备和试剂冰箱,天平,酸度计,烧杯(50ml,100ml,500ml,1000ml),量筒(1000ml,100ml,25ml),容量瓶(1000ml,500ml,100ml),磨口试剂瓶(100ml,500ml,1000ml),药勺、称量纸、滴管、玻璃棒,电炉,微波炉NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3,Na2•EDTA•2H2O,KI, FeSO4.7H2O,烟酸,甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水四、实验方法1、MS大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约350ml,放入500ml的烧杯中,按照配方表中用量依次分别称取:NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O,待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物,当最后一种化合物完全溶解后,将溶液倒入500ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至500ml,然后,倒入细口试剂瓶中,贴上标签,注明母液名称、配制日期、配制人姓名,置于4℃冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4•4H2O,ZnSO4•7H2O ,H2BO3,KI ,NaMoO4•2H2O,CuSO4•5H2O,CoCl2•6H2O,用蒸馏水逐个溶解,待全部溶解后,用容量瓶定容,装入500ml细口试剂瓶中,贴上标签,注明母液名称、配制日期、配制人姓名,置于4℃冰箱中保存备用。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领,任务驱动”的教学模式,使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能,能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一:实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训,使学生了解各种洗涤液的特性;2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器皿的洗涤技术;3.通过实训,培养学生良好的卫生习惯,建立组织培养的无菌意识;4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具:2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养皿、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具:肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤(一)培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌(二)玻璃器皿的洗涤(酸洗)玻璃器皿的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤(三种)液配制:重铬酸钾50g,加1L蒸馏水,加热溶化,冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器皿的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜,再用清水反复洗涤,最后用蒸馏水冲淋一遍,干燥后备用。
2、用过的玻璃器皿先将器皿中得残留物质除去,用清水冲洗,再用洗衣粉洗涤,最后用清水冲洗3~4遍,把字迹擦洗干净,干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌,再按(2)的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上,取出后经流水冲洗30min左右,干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二:组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训,使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识,能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤(一) 组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成:准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放(二) 设计一200m2组培工厂,要求绘出大概的布局图。
植物组织培养实验指导
实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制实验二植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌实验三番茄子叶愈伤组织诱导培养阿实验四马铃薯茎段的扩繁培养实验五海棠叶片的离体培养实验六胡萝卜离体根的培养实验七组织培养物的继代培养实验八马铃薯脱毒与组培快繁实验九沙棘组织培养实验方案设计及实施实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制常用组织培养的玻璃容器及接种用的玻璃器皿如锥形瓶、培养皿、试管、配置培养基用的试剂瓶、烧杯等以及金属的镊子、剪刀、接种铲等,用前必须经过洗涤,有的还要消毒。
一器皿的洗涤方法1.一般玻璃器皿,特别是第一次使用的新的玻璃器皿,首先用清水充分浸泡后用碱水刷洗,然后用清水充分除去碱液,再用无离子水或蒸馏水刷洗干净后烘干或晾干,待用。
检查玻璃器皿是否洗刷干净的标准是:洗后的玻璃器皿沾水后,布满于整个玻璃表面并形成完整的水膜,而不会有不均匀的水珠出现。
当玻璃器皿十分肮脏,带有不同的污渍时,则需要特殊的洗涤液浸泡4-12小时,然后再用清水漂洗干净,较常用的是铬酸洗液,它是用重铬酸钾加入浓硫酸配制而成,其腐蚀性极强,对衣物、皮肤等均十分有害,一般尽量避免使用。
目前生产有各种合成的化学洗涤剂,可清除各种污物,使用方便,是实验室内常用的。
2.金属用具在第一次使用前必需先用四氯化碳或乙醚等有机溶剂将其表面的防锈油擦洗干净,用布擦干方可使用,每次使用后需用水清洗并保持干燥。
二器皿及环境的消毒方法器皿的消毒方法分为:1.物理方法又可细分为:(1)干热消毒法(Dry heat sterilization):适用于玻璃器皿、金属和一些不怕高温的物品,如培养皿、锥形瓶、各种试剂瓶、刀、剪、镊子等。
一般在150℃烘箱内烤2-3小时,在消毒灭菌前将所要消毒的物品包装于固定容器或耐热的包装材料内(如饭盒、培养皿灭菌筒、铝箔纸等),防止在使用前的再次污染。
(2)湿热消毒法(Wet heat sterilization):不能用干热消毒的物品,如配置好的培养基、易燃的棉花、工作服、口罩等,要使用高压灭菌锅,通过水蒸气压达到灭菌消毒的目的,常用气压为15磅或1.2kg/cm2,温度为121-124℃,灭菌20分钟即可达到杀灭细菌、消毒的目的。
植物愈伤组织诱导培养实验指导
植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导一、实验目的;通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练,使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术,初步掌握MS固体培养基制备方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。
二、实验原理:根据植物细胞全能性原理,培养植物材料。
即在无菌条件下,将植物的器官或组织(如芽、茎尖、根尖或花药)放在人工培养基上进行培养,通过细胞分裂,形成一团薄壁细胞,即愈伤组织。
愈伤组织可以在适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化,重新产生出植物的各种器官和组织,进而发育成完整的植株。
三、实验容实验包括以下3部分容:实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存实验1-2、MS培养基的配制与灭菌实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导实验1-1 植物组织培养基母液的配制和保存1、目的要求学习植物组织培养基母液的配制方法,为培养基的配制做准备。
2、基本原理植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质,是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境,主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。
在配制培养基前,为了使用方便和用量准确,常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液,然后在配制培养基时,再根据所需浓度,按比例稀释。
本实验以MS培养基为例,学习培养基母液的配制。
MS培养基母液可分为:MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外,还要配制生长激素母液,在不同类型的培养基中使用。
3、实验仪器设备和试剂3.1仪器、用具分析天平、酸度计(或pH试纸)、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、洗瓶、记号笔、烧杯(50ml、100ml、200ml)、容量瓶(100ml、500ml、1000ml)、磨口试剂瓶(100mL、200mL、500ml、1000ml)、量杯、量筒、移液抢、微波炉等。
3.2试剂(1)95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领,任务驱动”的教学模式,使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能,能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一:实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训,使学生了解各种洗涤液的特性;2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术;3.通过实训,培养学生良好的卫生习惯,建立组织培养的无菌意识;4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具:2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具:肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤(一)培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌(二)玻璃器皿的洗涤(酸洗)玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤(三种)液配制:重铬酸钾508,加工蒸馏水,加热溶化,冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜,再用清水反复洗涤,最后用蒸馏水冲淋一遍,干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去,用清水冲洗,再用洗衣粉洗涤,最后用清水冲洗3—4遍,把字迹擦洗干净,干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌,再按(2)的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上,取出后经流水冲洗30min左右,干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二:组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训,使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识,能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤(-)组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成:准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放(二)设计一 200m2组培工厂,要求给出大概的布局图。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养》实验指导教师:任峻目录实验一参观植物组织培养实验室实验二培养基母液配制实验三培养基配制与灭菌实验四植物快速繁殖培养实验考核一、课程的性质与任务植物细胞工程实验技术一般包括植物细胞组织离体培养技术、细胞融合技术、细胞拆合技术、外源基因转移技术等一系列重要的基础技术。
通过实验课程的学习,实验方法立足于初学者的专业基础和一般实验室的条件,将《植物细胞组织培养技术》课程的理论知识、一般的实验技能和科学研究的初步方法融为一体。
培养学生理论联系实际、独立思考及实践动手能力。
二、实验的目的与基本要求通过本课程的学习使学生掌握植物细胞工程技术的基本原理和实验操作方法,掌握植物细胞体外培养技术,结合科研和生产实际,提高学生分析问题、解决问题的能力。
以适应今后在教学、科研和生产开发等各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。
在实验教学过程中,要求学生学习态度严谨,操作动作规范,观察记录耐心细致,独立思考,综合分析实验结果,充分理解后认真地完成实验报告。
09本《植物组织培养》实验考核一、考核方式:实验操作。
二、考核时间:三、考核地点:四、监考教师:实验考核以实验操作形式进行,根据实验4或实验5实验的实验结果(失败或成功)决定实验方案,如果失败,分析失败原因,提出改进措施,在重做中进行实验操作考核,如果成功则继续下一步的实验,实施实验操作考核。
二.考核办法:考核方法主要观察学生的实验操作是否正确,污染率是否高,并要求学生写出实验报告,总结实验中常出现的问题。
在3个课时内小组协作完成实验内容。
包括以下几个方面:1.对实验仪器设备的选择及操作。
湿热灭菌操作过程;无菌操作过程。
2.培养基的配制试剂的配制;母液的移取;实验配方计算。
3.培养条件的设置。
4.实验报告的规范性与科学性。
实验一 参观植物组织培养实验室一、实验的目的和要求掌握植物组织培养实验室的设计要点和必备的仪器设备。
二、实验内容:1. 植物组织培养实验室的设计要点。
《植物组织培养》实践教学指导书教程
《植物组织培养》实践教学指导书目录实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器设备的构造及使用实验二无菌操作技术(选做)实验三接种训练实验四组培苗的移栽驯化实验五试管苗的转接与扩繁(选做)实验六生根培养(选做)实验七胡萝卜离体根的培养(选做)实验八茎尖的组织培养(选做)实验九茎段的组织培养实验十百合鳞茎的组织培养(选做)实验十一叶片的组织培养(选做)实验十二花药培养实验十三西葫芦子房的培养(选做)实验十四苹果胚(embryo)培养(选做)实验十五黄瓜下胚轴愈伤组织的诱导(选做)实验十微茎尖的剥离训练专业实训部分实训一培养基的制作实训二器官培养技能实训三果树、蔬菜、经济类植物组织培养一、果树类组织培养(一)苹果的组织培养(二)草莓微茎尖培养(三)枣的组织培养(四)树莓的组织培养二、蔬菜类组织培养(一)芦笋的组织培养(二)无籽西瓜的组织培养(三)大蒜的组织培养(四)马铃薯组织培养三、经济类组织培养(一)香石竹的组织培养(二)菊花茎段的组织培养(三)菊花微茎尖的组织培养(四)唐菖莆的组织培养(五)串红的组织培养(六)蝴蝶兰的组织培养附1:观看组织培养实验室和组培工厂化生产的录像或课件附2:组培技能考核标准实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器的构造及使用一、目的要求(一)一般掌握组织培养常用仪器设备的结构与维护;(二)熟练掌握常用仪器设备的正确使用方法。
二、常用仪器设备分析天平;灭菌器;蒸馏水器等。
三、方法步骤(-)岛津进口电子分析天平的构造及使用1.构造:岛津进口电子分析天平主要由:天平机体、称重舱、天平盘、键板(包括4个键)、液晶显示屏等构成。
2.使用:(1)调平天平放稳后,转动脚螺旋,使水平气泡在水平指示的红环内;(2)自检在空载下,天平内部进行自检,显示屏上相继显示CHE3→0,CAL4→0,CAL,END,CAL,OFF;(3)全显示按“ON/OFF”键,液晶屏进入全显示态;(4)这时再按“ON/OFF’键,液晶屏进入预热状态,有绿色指示灯显示。
植物组织培养技术实验指导
二、实验内容1.配制洗涤液。
2.分类洗涤:新购置的玻璃器皿的洗涤,使用过的玻璃器皿的洗 涤,污染瓶的洗涤,移液管、容量瓶、量筒等量具器皿的洗涤。
三、实验器材与试剂
(一)器材 具体包括:待洗的移液管、吸管、量筒、量杯、容量瓶等量具; 新购和用过的培养皿、 璃器皿;污染瓶(管) 筐等。
作用:常用以浸洗除去普通油污,通常需要用热的溶液。黑色焦 油、硫可用加热的浓碱液(如浓NaOH)溶液洗去。
2.重铬酸钾-硫酸洗液
称取重铬酸钾40gT慢慢加入约50C的80~100ml蒸馏水中,边
搅拌边让它溶解(为了加速溶解,还可加热到约95C)7待稍冷却
后7加入工业用浓硫酸900~1000ml(用玻璃棒引流),刚开始加入时, 速度要缓慢(因为浓硫酸会迅速释放出溶解热,导致溶液激烈沸腾, 甚至会溅到脸上, 烫伤皮肤)7待倒入的浓硫酸不再激烈沸腾和冒浓 雾时,就可加速倒入浓硫酸7搅拌均匀7装瓶7贴上标签。
5.碱性高锰酸钾洗液
取4g高锰酸钾溶于少量水后,加入100ml10%的NaOH溶于混 匀后装瓶备用。
该洗液呈紫红色, 有强碱性和氧化性,能浸洗去除各种油污。洗 后若仪器壁上面有褐色二氧化锰, 可用盐酸、 稀硫酸或亚硫酸钠溶液 洗去。
该洗涤液与重铬酸钾-硫酸洗液一样,可反复使用若干次,直至 碱性及紫红色消失为止。
6.1mol L-1盐酸溶液
用1mol L-1盐酸溶液即可除去附在容器底部或壁上的铁锈、二氧 化锰、碳酸钙等物质。
(二)分类洗涤 根据洗涤对象不同,需分类洗涤。
1.移液管、吸量管、小量筒和容量瓶的洗涤 将小量筒和容量瓶灌满重铬酸钾-硫酸洗液,或将吸量管、移液 管浸泡在重铬酸钾-硫酸洗液中7第二天用竹夹子取出,或将容量瓶 和小量筒中的重铬酸钾-硫酸溶液倒回到洗液瓶中7流水冲洗这些玻 璃器皿至洁净7用蒸馏水冲洗1~3次,然后将吸量管、 量筒等分别倒
植物组织培养技术实验指导书
《植物组织培养技术》实验教学准备工作一、配制母液所需药品、器材1、 Ms成分19种(N6同)2、蔗糖3、琼脂4、激素(NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等)电子天平、(试管)、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、角匙、母液瓶(棕色)、蒸馏水二、无菌室所需物品1、95%酒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高锰酸钾、紫外灯、工业酒精2、枪式镊子(16 cm,20cm)、尖镊(16cm)、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、药棉、纱布、火柴• 3、广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿三、学生配制培养基、分装、高压灭菌所需器具1、培养瓶(PP,120ml三角瓶)(15mm*145mm试管)2、电炉3、烧杯(1000ml)移液管( 10ml、5ml、2ml、1ml)、吸球4、量筒(100ml、50ml)、角匙、天平、剪刀、吸水、纸5、pH值精密试纸(5.4-7)6、氢氧化钠、盐酸(1N)、蒸馏水、牛皮纸、棉绳7、试剂瓶、(激素、酸碱)、滴管、标签、玻棒四、消毒剂(处理外植体)升汞(氯化汞)、酒精、漂白粉、双氧水、次氯酸钠实验一、 Ms培养基的配制、分装和灭菌植物组织培养的成功与否,除培养材料本身的因素外,第二个因素就是培养基。
应根据培养植物的种类和部位,选择适宜的培养基。
另外植物组织培养是在无菌条件下培养植物的技术。
要达到无菌操作和无菌培养,必须有一定的无菌环境(高压灭菌,无菌室,超净工作台等),使用无菌的容器和用具,进行无菌操作,使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下,生长、发育和繁殖。
一、目的要求学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品1、仪器•高压灭菌锅、天平、电炉2 、玻璃器皿•烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸3、药品与试剂•Ms母液(见表1-1)氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2,4-D(1mg/ml)、NAA(1mg/ml)、蒸馏水三、实验方法(一)、培养基的配制配制培养基前要先配制母液。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导一、材料与设备准备1.植物材料:选择符合实验要求的植物组织,如茎段、叶片等。
2.吐温20:用于表面消毒材料。
3.植物生长调节剂:包括激素和营养成分等。
4.植物培养基:选择适合所培养植物组织的培养基。
5.培养器具:试管、蒸馏水瓶、烧杯等。
6.其他辅助材料:包括消毒用酒精、无菌操作需要的洁净衣和手套等。
二、无菌操作准备1.操作台面准备:清洁操作台面,并用75%酒精消毒,然后用紫外线灯照射30分钟。
2.实验者准备:穿戴洁净衣、口罩和手套,洗手并用75%酒精消毒双手。
3.工具准备:将试管、蒸馏水瓶等器具洗净,并用高温高压消毒或用离子蒸汽灭菌器进行灭菌。
三、无菌茎段培养实验步骤1.材料准备:选择健康的植物茎段,将其切成1-2厘米长的小段,洗净并去除表皮。
2.表面消毒:将茎段放入含有0.1%吐温20的蒸馏水中浸泡15-30分钟,再用无菌蒸馏水冲洗3-4次。
3.培养基制备:按照特定比例和配方制备适合茎段培养的培养基。
4.培养基固化:将培养基倒入试管中,约3/4满,然后用高温高压或离子蒸汽灭菌器进行灭菌,同时密封试管。
5.培养基接种:将消毒后的茎段放入培养基中,约每个试管放入1-2个茎段。
6.培养条件设置:将培养瓶在适宜的光照和温度条件下培养,通常为25摄氏度,光照强度为3000-5000勒克斯,光周期为16小时光照和8小时黑暗。
四、观察和记录1.培养基观察:每隔一段时间,观察培养基的颜色变化、植物组织的生长情况等,并记录下来。
2.茎段生长观察:观察茎段的生长情况,包括根的生长情况、叶片形态等,并记录下来。
五、结果分析与总结根据观察和记录的数据,分析植株生长的情况、比较不同处理之间的差异等,并对实验的结果进行总结和讨论。
六、安全注意事项1.在操作过程中要严格遵守无菌操作要求,避免细菌、霉菌等的污染。
2.注意使用化学试剂时的安全操作,避免直接接触皮肤和吸入有害气体。
3.实验完成后,洗手消毒,清洁操作台面,并关闭紫外线灯。
植物组织培养实验指导
实验一培养基母液的配制一、目的要求通过对MS培养基母液的配制,学习掌握培养基母液配制方法。
二、说明在配制培养基时,为了取用方便和提高各种药品称量的准确性,往往先把各组成成分按其需用量配成扩大一定倍数的浓缩液,即母液贮存备用,用时稀释。
配制母液时,一般按药品的种类和性质分别配制,单独保存或几种混合保存。
如把所有大量元素配在一起,配成大量元素母液,把微量元素放在一起配成微量元素母液,以及单一的维生素、铁盐、植物激素等母液。
母液扩大的倍数主要取决于用量的多少,用量大的扩大的倍数宜低,反之则高,但要注意过高浓度和不恰当的混合会引起沉淀,影响培养效果。
三、仪器和药品电子天平1/1000、1/10000。
药品按MS培养基配方准备。
激素按需要准备。
四、方法和步骤一)、大量元素母液:因大量元素用量大,为避免过高浓度的混合液会发生沉淀,一般配成10倍的母液。
根据所选培养基配方,按大量元素在表中排列顺序,以其10倍用量用1/1000天平逐个称出,按次序加入盛有蒸馏水的烧杯中,并搅拌。
注意每种溶解后,再加下一种。
原则上应注意把Ca2+与SO4-PO4错开,以免产生沉淀,最后加蒸馏水定容至刻度,此即大量元素母液。
配培养基时,每配一升,取母液100ml。
二)、微量元素母液:微量元素因用量小,为称量方便及精确,常配成100倍或1000倍的母液,即将每一种微量元素化合物的量扩大100倍或1000倍,分别称量、溶解、定容,方法向上。
配1升培养基取母液10ml或1ml。
本实验配成100倍。
三)、铁盐铁盐不是都需要单独配成母液,如柠檬酸铁,只需和大量元素一起配成母液即可。
目前常用的铁盐为FeSO4· 7H20,由于在使用过程中容宜产生Fe(OH)3沉淀,一般先将其配成螯合物。
常配成100倍称取FeSO4· 7H2O,Na2-EDTA,分别加热溶解,然后混合、定容,或混合后加热,至呈黄色,定容。
每配制1升用10ml。
09植物组织培养实训指导
实训一MS固体培养基的配制、灭菌及保存一、实训目的掌握MS固体培养基的配制方法。
二、设备仪器电子分析天平、托盘天平、灭菌器、电炉等。
以下按小组为单位,烧杯、棕色细口瓶(1000ml 1个、500ml 1个、100ml 1个)、量筒100ml1个、移液管0.1、0.5、2、10ml各1支、吸气球1个、定容瓶1000ml 1支、小烧杯1支、培养瓶及瓶盖10个、精密pH试纸等。
三、药品试剂MS培养基所需各种物质(见配方),琼脂,蔗糖(或绵白糖),0.1M NaOH溶液,0.1M HCl 溶液。
1mol/L NaOH的配制方法是称4gNaOH,溶解后加入蒸馏水,定容到100ml即可。
1mol HCl的配制方法是量取,12mol HCl 8.4ml,加水定容至100m1。
四、母液的配制1.大量元素母液在分析天平上按下表分别称取大量元素药品,置于三角瓶中,分别加蒸馏水100ml左右于三角瓶中,再放到磁力搅拌器(或电炉)搅拌溶解,然后一一倒入1000ml 的容量瓶中(注意CaCl2要后加,最后加蒸馏水定容至刻度,此为10倍液的大量元素母液)。
2.微量元素母液在分析天平上按表分别称取微量元素药品,按大量元素母液配制方法,配成100倍液的微量元素母液。
3.铁盐母液在分析天平上按表称取FeSO4.7H2 O和Na2 -EDTA 药品,配成100倍液的铁盐母液。
4.有机物母液:用分析天平按表分别称取甘氨酸、VB1 、Vpp、VB6、肌醇,配成100倍有机物质母液。
表1 MS培养基母液的配制实验三还需要 NAA和6-BA,请准备!!!五、MS培养基的合成1. 加热溶解先在1L的烧杯中加500ml蒸馏水,然后加入琼脂丝8g,加热并不断搅拌,直至琼脂完全溶化,透澈见底为止;再放入蔗糖22g,容解后,用量筒取大量元素母液100ml、用专用的移液管分别移取微量元素母液10ml ,铁盐母液10ml ,有机物母液10ml 入烧杯中。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养实验指导》万志兵黄山学院生命与环境科学学院林学教研室2010.09目录学生实验守则 (1)组织培养实验室安全守则 (1)实验一植物组织培养实验室的参观与设计 (2)实验二培养器皿的洗涤 (2)实验三植物组织培养中常用设备和仪器的使用 (4)实验四植物组织培养基母液的配制和保存 (7)实验五植物组织MS培养基的配制 (9)实验六培养基和培养用具的灭菌 (12)实验七外植体的选择与初代培养 (13)实验八植物离体培养物的形态观察 (14)实验九植物离体培养物的继代培养操作技术 (15)实验十植物离体培养物的生根培养操作技术 (16)实验十一试管苗的驯化、移栽和管理 (17)实验十二植物茎尖剥离与观察 (18)实验十三汁液涂抹法病毒检测 (19)实验十四植物离体根培养 (20)实验十五花器官的剥离与观察 (21)实验十六花粉发育时期的鉴定 (22)实验十七花药培养 (23)实验十八小孢子培养(花粉培养) (24)学生实验守则一、自觉遵守纪律和各项规章制度,保持室内安静,注意环境卫生,不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物,爱护公务。
二、实验过程中应严肃认真,严格遵守操作规程。
贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。
三、爱护实验仪器设备,厉行节约。
仪器若有损坏,应如实报告,填写登记表。
凡损坏、丢失的仪器设备,均应查清原因,按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。
四、实验物品不得随意翻动,严禁携出室外。
若需借用应办理借物手续。
五、注意实验室安全,易燃易爆品的操作应远离火源。
六、实验结束,由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备,学生应办好交接手续,做好清洁卫生,及时关好水电阀门,保持实验室和仪器的清洁整齐。
组织培养实验室安全守则实验室人员在工作的时候,要接触各种微生物、试样及检验过程中的物品,这些物质中有些对人体有毒害作用,有些还具有易燃易爆性质;同时,各种仪器、电器、机械等设备,在使用中也可能存在危险性。
药用植物组织培养实验指导
药用植物组织培养实验指导药用植物组织培养是一种通过组织培养技术繁殖和培育药用植物,得到高品质的药用植物及其次生代谢产物的方法。
其主要适用于稀有药材、难以繁殖和响应慢的植物种类。
药用植物组织培养技术已成为现代生物技术和药学研究领域中的重要一环,对于药用植物资源的保护和开发利用具有广泛的应用价值。
一、实验材料和方法(一)实验材料药用植物:如丹参、黄芪、当归、川芎等。
生长介质:以MS为基本配方加入不同的生长调节剂和其他必需物质。
生长调节剂:如BA、KT、IBA、NAA、GA3等。
其他必需物质:如蔗糖、琼脂、植物营养物、维生素、酪朊、提取液等。
实验器材:量筒、移液吸管、显微镜、培养室、灭菌器、无菌操作台等。
(二)实验方法1.准备组培外植体:将新鲜的植物叶片,茎尖或子实体等外植体按特定的要求分离,清除植物表面的杂质,并切割成一定大小的切片或组织块。
2.预处理外植体:将清洗好的外植体放入含有适当浓度的消毒液中浸泡消毒,消毒后用蒸馏水冲洗干净备用。
3.生长介质配制:根据外植体的特征和培养要求将适量的生长介质和生长调节剂、蔗糖、琼脂等必需物质按比例配制好,并调节酸碱度等参数。
4.外植体接种:无菌条件下将预处理好的外植体移植到含有生长介质的培养瓶中,密封,然后将其置于适宜的培养条件下进行培养。
5.组织培养条件:组织培养的条件主要包括光照、温度、空气等条件的控制。
合适的光照和温度可以促进组织的生长和发育,而适度的通气可以增加培养瓶内的氧气含量,促进外植体的组织培养和生长。
二、实验结果与分析药用植物组织培养实验是一项需要持续观察和分析的过程。
在实验过程中,可以通过比较不同生长介质中的组织生长情况和代谢产物含量,以及观察外植体的形态和组织构造,来分析生长介质和生长调节剂对药用植物的影响。
实验结果显示,不同的生长介质配方和生长调节剂的添加量可以影响到组织的生长和分化。
在以NAA、IBA为生长调节剂的生长介质中,当归外植体的愈伤组织生长情况最佳,而添加GA3和KT可以进一步增加愈伤组织的分化和代谢产物的合成。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验(一)实验名称:参观植物组织培养实验室实验时间:第二周(分组进行)实验地点:植物组织培养实验室专业:生物技术及应用一、实验目的熟悉实验室的构建和掌握各种常用仪器设备的操作方法和使用注意事项。
二、实验仪器设备、药品及试剂高压蒸汽灭菌锅、培养架、超净工作台、1/100电子天平、1/10000电子天平、蒸馏水器、IAA、6-BA、NAA、KT,各种无机盐,有机化合物等。
三、实验内容方法及步骤参观准备室、无菌操作室和培养室,学习使用各种常用仪器。
四、分析与讨论1. 基本的实验室至少要包括准备室、无菌操作室和培养室,另外根据实验的需要可以设立辅助实验室,如细胞学实验室和生化实验室等。
2. 准备室要求宽敞明亮、便于放置多个实验台和相关设备,方便多人同时工作;同时要求通风条件好,便于气体交换;实验室地面应便于清洁,并应进行防滑处理;无菌操作室也叫接种室,进行材料的离体无菌操作,是植物组织培养研究或生产中最关键的一步,要求房间一般不宜过大,封闭性好,干燥清洁,能较长时间保持无菌;培养室要求能够控制光照、温度,并保持相对的无菌环境.因此,培养室应保持清洁和适度干燥。
植物组织培养实验(二)实验名称:母液的配制实验时间:第五、六周(分组进行)实验地点:植物组织培养实验室专业:生物技术及应用一、实验目的。
掌握各种营养元素和激素母液的配制方法,二、实验仪器设备、药品及试剂(1)实验仪器设备及用具1/100电子天平、1/10000电子天平、蒸馏水器、烧杯、棕色细口瓶、量筒、移液枪、各种规格的定容瓶、100ml、500ml烧杯、标签纸、记号笔等(2)实验药品及试剂IAA、6-BA、NAA、KT,各种无机盐,0.1mol /LNaOH溶液,0.1mol/L HCl溶液。
三、实验方法及步骤1. 20倍大量元素母液的配制。
在电子天平上按MS基本培养基配方扩大20倍分别称取所需要的5钟大量元素药品,分别置于500ml的烧杯中中,加蒸馏水100ml左右,搅拌溶解,然后一一倒入1000ml的容量瓶中(注意CaCl2要后加),最后加蒸馏水定容至刻度,此为20倍液的大量元素母液。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书班级:园林1421、1521教师:张璐璐实训一植物组织培养室参观与设计一、目的要求通过参观,使学生掌握如何组建植物组织培养实验室;同时,熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具1 、仪器:超净工作台,空调机,蒸馏水发生器或纯水发生器,高压灭菌锅,低温冰箱、普通冰箱,电炉,显微镜,天平、恒温培养箱,烘箱等设备。
2 、用具:各种培养皿,分注器,各种实验器皿和各种器械用具。
三、方法步骤1 、先由指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注意事项。
2 、先由指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤。
3 、指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况,包括准备室(又称化学实验室)、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名称用途。
1 )准备室(化学实验室)面积:20m2 左右用途:器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌,植物材料的预处理,重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析,试管苗出瓶,清洗及整理工作。
要求:明亮、通风设备:工作台,橱柜,水池,仪器,药品等2 )缓冲室面积:约3-5m 2 左右用途:进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋,戴上口罩。
设备:1 盏紫外灯,1 个配电板,石英电力时控器等3 )无菌操作室(无菌室,接种室)面积:10-20m 2 ,视生产规模和超净工作台数量而定。
用途:材料的灭菌接种,无菌材料的继代,丛生菌的增殖或切割,嫩枝扦插生根等,是关键的部分,关系到培养物的污染率、接种工作效率等重要指标。
要求:干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘,地面平坦无缝便于清洗和灭菌。
门窗要密闭,一般用移动门窗。
设备:超净工作台、空调机,医用小平车,操作台、搁架等。
4 )培养室面积:视培养架多少及培养物数量而定。
用途:将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。
设备:①培养架与灯光培养架数目多少视生产规模而定,年产4万—10万苗需4—6个培养架;年产10万—20万苗约需8—10个培养架。
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三、实验步骤
1、 学习配制常用洗涤液和灭菌液 (1) 70%酒精:量取 30ml 蒸馏水,在将 70ml 的 95%酒精缓缓加入到水中。 (2) 20%次氯酸钠溶液:称取 20g 次氯酸钠用少许水溶解,100ml 水定容。
(2) 无菌室灭菌(接种室、培养室) ① 用 20%次氯酸钠溶液擦抺工作台,70%酒精擦拭超净工作台。 薰蒸:用甲醛、高锰酸钾提前 1-3 天薰蒸密封房间,方法为甲醛(HCHO) 与高锰酸钾(KMn4)以 10:1 比例混合。 ② 接种前用 70-75%酒精喷雾,使飘在空气中的尘埃沉积下来。 ③ 用紫外光灯进行照射灭菌(波长 2650-2660A 最好)接种箱及用具 30-40 分钟。
4
实验三:培养基母液的配制与保存
一、实验目的:
通过培养基母液的配制,掌握配制培养基母液的基本技能。
二、实验原理:
为了减少工作量,减少多次称量所造成的误差,一般将常用药品配成比所需浓
度高 10—1000 倍的母液,现以 MS 培养基为例,预先配制,四组不同母液,说明母
液的配制方法。
三、主要试剂和仪器
《植物组织培养实验指导》
遗传育种教研室 于翠梅、李兴涛、曹萍
1
实验一:实验室基本结构与设备的识别
一、 目的
认识植物组织培养实验室的基本结构,必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、 实验内容
1. 实验室的基本结构
细胞与组织培养实验室必须满足三个基本的需要,即:实验准备,包括培养基 配制,洗涤与灭菌等;无菌操作;控制培养。因此基本实验室组成应包括准备室、 接种室和培养室。
④ 对带有凡士林,石蜡,或胶布的器皿选用特殊方法处理后,再用常规方法 洗涤。带有凡士林的器皿须先用废纸把凡士林擦去,再用汽油擦洗干净,然后用热 肥皂水煮沸半小时,刷洗后,自来水冲干净。若带有石蜡,可在玻璃器皿下垫几层 废纸,放入 60-70℃温箱中 1 加热-2 小时,待石蜡融化后,再用废纸反复擦 2-3 次即去石蜡再泡入洗衣粉的热水中洗干净最后用自来水冲洗,蒸馏水冲洗干净若有 胶布粘着物,先用 70%酒精棉球擦数遍,溶解粘胶物,并用少许去污粉刷抺,再用洗 衣粉煮沸半小时,刷洗干净,自来水冲洗,晾干,再泡入洗液。 (2) 金属器皿
凝胶成像分析系统等。 (8) 除上述基本设备外,如果有条件和需要还可配制摄影设备、生化分析设备等。
3. 培养器皿及实验用具
(1) 玻璃器皿:试管、三角烧瓶(锥形瓶)、培养皿、试剂瓶、烧杯、量筒、容 量瓶、吸管、滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
(2) 金属材质用具:镊子类(包括接种或转移愈伤组织用的20-25cm长型镊子及 镊取较小的植物组织的尖端弯曲“枪型”镊子)、解剖刀及各种剪刀类等。
三、作业
2
1、写出实验室的布局 2、写出实验设备的名称及用途 3、收获与体会
实验二:洗涤与灭菌
一、 实验目的:
学习各种培养器皿及实验用具的洗涤和灭菌方法以及
与组织培养有关的器皿,用具、培养基、接种室、培养室等灭菌方法。
二、实验原理:
1. 洗涤 (1) 玻璃器皿的洗涤
① 新购置的玻璃器皿的洗涤:因有游离碱性物质,使用前先用 1%稀盐酸浸泡 一夜,然后用肥皂水洗净,清水冲洗,最后用蒸馏水冲洗一次,干后备用。
分析天平 移液管 量筒 三角瓶 生长调节物质 无机盐类 有机化合物
烧杯 冰箱 母液瓶 。
四、实验步骤:
1. MS 基本培养基母液配制
母液 种类
成分
规定用量 (mg/L)
扩大 倍数
称取量 (mg/L)
母液定容 配 1LMS 培养基 体积(mL) 吸取量(ML)
KNO3
大
量
NH4NO3
元
素
MgSO4.7H2O
② 已用过玻璃器皿:先将残渣除去;用清水洗净,再用热肥皂水或洗衣粉洗 净,清水冲洗干净,最后用蒸馏水漂洗一次,干后备用。
③ 对一些不宜刷洗的玻璃器皿如:吸管,滴管及较脏的器皿等先用去污粉和 去油剂刷洗,自来水冲干净后,晾干,再浸入硫酸-重铬酸钾洗液中浸泡若干小时, 用夹子取出在自来水冲洗干净,再用蒸馏水冲洗 1-3 遍,稍晾不滴水后置于干燥箱 内烘干备用。
KH2PO4
CaCl2.2H2O
3
新购置金属器皿因其上有润滑油或防绣油,用蘸有四氯化碳(CCl4 )布擦去油 脂,再用湿布擦净,干燥备用。 2. 灭菌 (1) 器皿和用具常用灭菌方法:
① 热压灭菌法:将洗净的培养器皿,用具,用牛皮纸包好,放入高压消毒锅中, 1.1 压力下灭菌 20-30 分钟。
② 干热灭菌法:洗净的玻璃器皿置于电热干燥箱中,150℃40 分钟或 120℃两 小时,待冷却后使用。
准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮,通风条件 好。接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好,干燥清洁,能较长时间保持无 菌。房间一般不宜过大,其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外, 应行密闭。培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照 和温度,其次为防止微生物感染,培养室应保持干燥和清洁。
2、 培养器皿洗涤:用洗衣粉刷洗组织培养的玻璃器皿及金属器皿,为下一次做培养 基做好准备。 3、 实验室及超净工作台灭菌:用 20%次氯酸钠溶液擦抺工作台,再用 70%酒精擦拭 超净工作台表面。用甲醛与高锰酸钾以 10:1 比例混合,薰蒸接种室及培养室。
四、作业:
1、写出组织培养的玻璃器皿及金属器皿的洗涤过程 2、写出实验室及超净工作台灭菌过程
同时要求对培养物进行细胞学及分子生物学研究时应建立相应的辅助实验室。
2. 常用设备配置
(1) 基本设备:冰箱、天平、酸度计、微波炉、、搅拌器。 (2) 灭菌设备:蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫
外灯。 (3) 无菌操作设备:净化工作台。 (4) 光温控制设备:时间程序控制器、空调。 (5) 细胞培养设备:培养设备根据需要而定,包括培养架、培养箱、摇床等。 (6) 细胞学鉴定设备:光学研究显微镜、倒置显微镜。 (7) 分子生物学研究设备:常温离心机、超低温高速离心机、PCR仪、电泳仪、