乙型肝炎病毒表面抗原检测
用两种方法检测乙肝表面抗原结果分析
用两种方法检测乙肝表面抗原结果分析目的了解用ELISA法检测乙肝表面抗原和用化学发光法检测表面抗原两者之间的结果情况。
方法采集320例就诊人员的血液标本，分别用化学发光法与ELISA法检测。
结果320份标本中，发光法检测出40份阳性，280份阴性。
ELISA 法检测出42份阳性，278份阴性。
经χ2检验两者无显著性差异（P>0.05）。
结论ELISA法成本比较低，耗时长，实验的影响因素比较多，易出现假阳性。
化学发光法成本高，所需时间短，干扰因素少，不易出现假阳性。
标签：乙肝表面抗原；ELISA；化学发光流行病学调查结果显示，我国的乙型病毒肝炎感染性约达10%，乙肝的实验检测对其防治具有非常重大的意义[1]。
乙型肝炎病毒乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。
随着科学越来越进步，检测的手段也越来越多。
自20世纪70年代至今，诸多高敏感性的检测方法被广泛应用于临床免疫学的检测中，当中应用最为广泛的就属酶联免疫法（enzyme linked Immunosor bent assay，ELISA）[2]。
近几年，化学发光微粒子免疫分析法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）正逐渐发展，是一种敏感性较强的临床免疫学检测方法，有效解决了低浓度乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的检测难题[3]。
现用ELISA法，化学发光法，这两种方法检测的相关性进行探讨。
1 资料与方法1.1一般资料标本来自于我院2016年3月1日～3月5日体检人员，共320例，男198例，女122例，年龄18～72岁，平均年龄为（39.5±8.4）岁。
1.2标本采集用红头采血管，真空抽取静脉血3 ml，标本静置后离心提取血清。
1.3检测试剂与仪器一种采用雅培化学发光HBsAg定量检测试剂盒，标本离心后，按照雅培I2000化学发光仪的操作规程检测。
乙型肝炎病毒表面抗原定量检测和临床应用研究进展
ＨＢ ｓ Ａｇ 检 测 ，ＨＢ ｓ Ａｇ 检 测 的灵 敏 度 和 特 异 度 得 到 年发现慢 性ＨＢ Ｖ感染 者肝细胞 内小球形颗粒 的输 出与 较 大 提 高 ，其 中应 用 最 广泛 的是 酶 联 免疫 吸 附试 验 血清 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ ＮＡ是一致 的ｌ ３ ］ 。Ｃ ｈ ｅ ｎ 等 定量检测４ 组无
也有研 究显 示血清 ￣ ？ Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ 与ＨＢ Ｖ复制水平变化 并不
一ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
定 与其保持一致 ，Ｋ ｕ ｈ ｎ ｓ 等［ ９ ］ 在研 究用ＨＢ Ｖ Ｄ ＮＡ替
ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ，ＴＲＦ Ｉ Ａ） 等 ，但 ＥＣＬ成
（ ｅ ｎ ｚ ｙｍｅ — ｌ ｉ ｎｋ ｅ ｄ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏａ ｂｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ， ＥＬＩ Ｓ Ａ） ，
本 相对 较 高 ，Ｓ Ｐ Ｒ Ｉ Ａ检测 操 作 繁琐 、污 染环 境 、线 性 范 围狭 窄 ，Ｔ ＲＦ Ｉ Ａ费用 较 为 昂贵 ， 这 些 检 测 方
感 染 乙型 肝 炎 病 毒 （ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｈ Ｂ Ｖ）后 ４ ～７ Ｈ Ｂ ｓ Ａｇ Ｉ Ｉ Ｑ ｕ ａ ｎ ｔ 可将ＨＢ ｓ Ａｇ 定量检测 上限扩大￣５ ２ ０ ０ ０
周就 能从血清 内检测到ＨＢ ｓ Ａ ｇ ，但Ｈ Ｂ ｓ Ａｇ 本身 不具有 Ｉ Ｕ ／ ｍｌ ，灵敏度和精确度 Ｌ ￣ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ高几个 数量 传 染性 ，以往 临床一直将ＨＢ ｓ Ａｇ 作 为ＨＢ Ｖ感 染的一个 级 。蛋 白质芯片技 术 、液相 芯片技 术虽然早 已存 在 ， Ｂ ｓ Ａｇ 定量 的时间较 晚 ，蛋 白质 芯片检 指标 ；近年来 ，随着Ｈ Ｂｓ Ａｇ 定量检测技 术 的进 步和不 但应用 于检测Ｈ 断开展相 关的研究 ，人 们对Ｈ Ｂ ｓ Ａｇ 定量 与慢性 乙型肝 测表 面抗原 定量效果 与Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法相 当，但方法简 单 、 炎 自然史 、疾病 转归 以及疗 效预测 的关系逐渐 变得 乙 快捷 、廉价 ，结果可视 ，并直 接通过软件 计算 出抗原 】 。 型肝炎病 毒清晰起 来 ，Ｈ Ｂ ｓ Ａｇ ￣ ＿ 个 “ 古老 ”的指标再 含量 ，既定性又定量，很适合于对患者疗效 的观察 次焕发 出新 的生命 。
乙肝表面抗原检测流程
乙肝表面抗原检测流程
1. 采集样本，通常使用静脉血作为检测的样本。
医务人员会使用消毒的针头抽取一定量的血液。
2. 样本处理，采集到的血液样本会被送往实验室进行处理。
在实验室中，血清会被分离出来，以便进行后续的检测。
3. 酶免疫法检测，乙肝表面抗原通常使用酶免疫法（ELISA）进行检测。
ELISA是一种常用的免疫学检测方法，通过检测血清中特定抗原或抗体的存在来进行诊断。
4. 结果分析，实验室技术人员会分析样本中乙肝表面抗原的检测结果。
阳性结果表明患者体内存在乙肝病毒，阴性结果则表明患者体内暂时没有乙肝病毒的感染。
5. 结果报告，最终的检测结果会被记录在报告中，并由医生进行解读和诊断。
如果检测结果呈阳性，医生可能会建议进行进一步的检测以确认诊断，并制定相应的治疗方案。
需要注意的是，以上流程仅为一般的乙肝表面抗原检测流程，
具体的操作步骤可能会因医疗机构和实验室的不同而略有差异。
在进行乙肝表面抗原检测前，建议咨询专业医生以获取详细的检测流程和注意事项。
乙肝表面抗原检测原理
乙肝表面抗原检测原理
乙肝表面抗原（HBsAg）检测原理涉及到免疫学和生物化学的相关知识。
HBsAg是乙型肝炎病毒的表面抗原，其检测原理主要包括免疫层析法、酶免疫法和化学发光法等。
首先，免疫层析法是一种常用的HBsAg检测方法。
该方法利用特异性抗体与HBsAg结合的原理，将患者血清样本与含有特异性抗体的试剂混合，如果样本中存在HBsAg，则会与抗体结合形成免疫复合物，通过层析柱分离后，观察是否有条带出现来判断HBsAg的存在与否。
其次，酶免疫法也是常用的检测方法之一。
该方法利用酶标记的抗体与HBsAg结合，形成抗原-抗体-酶复合物，再加入底物，通过酶的催化作用产生显色反应来检测HBsAg的存在。
此外，化学发光法也被广泛应用于HBsAg的检测。
该方法利用特异性抗体与HBsAg结合后，加入化学发光底物，当底物受激发光时，检测仪器会测量发光强度来判断样本中HBsAg的含量。
总的来说，乙肝表面抗原检测原理是基于抗原与抗体的特异性
结合原理，结合不同的检测方法来实现对HBsAg的检测。
这些方法都是通过特异性的抗体与HBsAg结合后，利用不同的检测原理来判断样本中是否存在HBsAg，从而进行乙肝病毒的诊断和监测。
希望这些信息能够帮助你更全面地了解乙肝表面抗原检测原理。
乙肝表面抗原阴性,还是不正常呢
乙肝表面抗原阴性，还是不正常呢乙肝表面抗原阴性不一定表示病情不正常，需要综合考虑其他乙肝病毒学检测指标，如乙肝e抗原、乙肝核心抗体、乙肝表面抗体等，以及肝功能、肝组织病理等方面的检查结果，结合患者的临床症状判断病情的严重程度和治疗方案。
治疗方法：1.抗病毒治疗：乙肝抗病毒治疗是目前治疗乙肝最有效的方法之一，包括nucleos(t)ide类和干扰素类两大类。
nucleos(t)ide类药物包括拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦等，干扰素类药物包括α-干扰素和λ-干扰素。
选择使用何种药物需根据患者的病毒学检测指标和肝功能等因素进行综合分析。
2.免疫调节治疗：免疫调节治疗包括免疫抑制剂、抗体和细胞治疗等，可改善肝组织的炎症和纤维化，缓解肝炎患者肝功能的恶化。
3.肝移植：对于晚期肝硬化和肝癌等终末期肝脏疾病患者，肝移植是最有效的治疗方法之一。
注意事项：1.保持良好的生活习惯，避免过度劳累和酗酒等不良习惯。
2.注意药物和食品安全，避免药物和食品过敏或中毒事件的发生。
3.定期进行医学检查，及时了解肝功能和病毒学指标的变化情况，及时调整治疗方案。
4.遵守医生的治疗方案，按时服药，不可随意停药或更换药物。
5.加强自我保护意识，避免肝炎的传播，如避免多人共用针头等不安全行为。
乙肝复发引起的下肢腿肿乙肝是一种病毒性肝炎，可能会引起肝脏炎症和损害，甚至导致肝硬化和肝癌。
此外，乙肝患者不仅容易出现肝脏相关的并发症，还可能出现其他非肝脏相关的并发症，如下肢肿胀。
本文将重点讨论乙肝复发引起的下肢肿胀的治疗方法和注意事项。
一、乙肝复发引起的下肢肿胀的病因下肢肿胀是指腿部或脚部出现肿胀现象。
乙肝患者出现下肢肿胀的原因可能有多种，具体原因需要根据患者的具体情况而定。
下面是一些可能会导致下肢肿胀的原因：1. 肝功能异常：乙肝病毒会直接攻击肝脏，造成肝脏炎症、坏死和功能受损。
如果肝脏功能异常，就可能导致血浆蛋白质合成受到影响，造成血管内压力下降，从而导致水分和蛋白质液体从血管内渗出到组织中，引起下肢肿胀。
乙型肝炎病毒表面抗原
乙型肝炎病毒表面抗原文章目录*一、乙型肝炎病毒表面抗原的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、乙型肝炎病毒表面抗原的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、乙型肝炎病毒表面抗原的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、乙型肝炎病毒表面抗原的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、乙型肝炎病毒表面抗原的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应乙型肝炎病毒表面抗原的基本信息1、定义乙型肝炎病毒表面抗原,别名乙型肝炎表面抗原,HB,阳性(或滴度升高):乙型肝炎病毒感染。
50%～98%患者早期呈阳性,可协助早期诊断。
急性患者阳性持续2个月以上,30%的患者转为慢性,3个月不能转阴者则长期携带可作为病情预后的指标。
2、专科分类传染病检查3、检查分类血液检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹乙型肝炎病毒表面抗原的正常值和临床意义1、正常值反向被动血凝法(RPHA):1∶8 免疫粘连血凝法(IAHA):1∶8 对流电泳法:阴性酶标法(ELISA):阴性放射免疫法(RIA):阴性2、临床意义该项检查用于判断是否感染了乙型肝炎(乙肝)病毒。
HBsAg阳性是感染乙肝病毒的指标,HBsAg本身具有抗原性,无传染性。
其他肝功能正常而仅仅HBsAg阳性者,称为乙肝病毒携带者。
HBsAg的滴度高低可判断患者的传染性,一帮HBsAg的滴度越高,HBsAg及乙肝病毒DNA阳性的可能性越大,传染性也就越大。
“大三阳”:是指在乙肝两对半检测中,乙肝表面抗原(HBsAg)、E抗原(HBeAg)和核心抗体(HBcAb)检测均是阳性。
提示乙肝病毒感染,病毒复制活跃,有传染性。
并不能提示病情是否严重。
“小三阳”:是指在乙肝两对半检测中,乙肝表面抗原(HBsAg)、E抗体(HBeAb)和核心抗体(HBcAb)检测均是阳性。
提示:大多数情况下表示乙肝病毒复制减少。
乙肝表面抗原 酶联免疫法 临界值
乙肝表面抗原酶联免疫法临界值
乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒的外壳蛋白，它是乙型
肝炎病毒感染的主要标志。
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的实验
室技术，用于检测体液中特定蛋白质的存在。
而临界值指的是在检
测中用来确定阴性或阳性结果的临界数值。
在乙肝病毒感染的诊断中，酶联免疫法通常用于检测乙肝表面
抗原。
对于HBsAg的酶联免疫法检测结果，临界值是指用来确定检
测结果是阴性还是阳性的数值。
一般来说，如果检测结果低于临界值，就会被判定为阴性，而高于临界值则被判定为阳性。
需要注意的是，不同的实验室和不同的检测试剂可能会有不同
的临界值。
此外，临界值也可能会根据特定人群的情况而有所不同，比如儿童、成人或特定健康状况的个体。
因此，在进行乙肝表面抗
原的酶联免疫法检测时，应该参考具体实验室提供的参考范围，并
由专业医生进行解读。
总的来说，乙肝表面抗原的酶联免疫法检测中的临界值是用来
确定检测结果的阴性或阳性的数值，但具体数值会因实验室和人群
情况而有所差异。
因此，在进行相关检测时，应该咨询专业医生以获取准确的解读和建议。
乙肝表面抗原检查报告
乙肝表面抗原检查报告一、乙肝表面抗原检查报告乙肝表面抗原检查报告是通过检测人体血液中是否存在乙肝表面抗原来判断乙肝病毒感染的一种方法。
如果检测结果呈阳性，即表示患者体内存在乙肝病毒，一般需要进一步检查其他乙肝病毒相关指标，如乙肝表面抗体、乙肝e抗原等来确定感染的程度和病情。
二、乙肝的治疗方法乙肝病毒感染是一种慢性病毒性肝炎，长期感染可能会导致肝炎、肝硬化、肝癌等严重后果。
因此，对于已经确诊的患者，治疗非常必要。
目前，乙肝的治疗主要分为抗病毒治疗和对症治疗两种方式。
1. 抗病毒治疗抗病毒治疗是乙肝病毒感染的主要治疗方法。
目前常用的药物包括阿德福韦二甲酯、恩替卡韦、拉米夫定等。
这些药物可以抑制病毒复制，减少病毒量，从而延缓病情的发展，避免肝炎、肝硬化等严重后果的发生。
不过需要注意的是，抗病毒治疗需要长期坚持，同时也存在着一定的副作用，如肝功能损伤、肾功能损害等。
因此，在治疗过程中应该密切关注患者的身体状况，随时调整用药方法和剂量。
2. 对症治疗对症治疗是指对乙肝病毒感染所引起的肝炎、肝硬化等状况进行针对性的治疗。
常见的对症治疗包括肝保护治疗、消炎治疗、营养治疗等。
肝保护治疗主要是通过中药、保肝药物等来保护肝细胞，改善肝功能。
消炎治疗则是通过使用消炎药物来缓解炎症反应，改善患者的症状。
营养治疗则是通过合理的膳食结构和多种营养素的补充来维持患者的营养水平，提高机体免疫力，帮助抵御病毒侵袭。
三、乙肝的注意事项1. 注意个人卫生乙肝病毒主要通过血液、体液、母婴传播等途径传播。
因此，预防乙肝感染的关键是注意个人卫生，避免接触感染源。
要勤洗手，避免与乙肝患者共用牙刷、刮胡刀、剃刀等用品，不共用注射器、针头等注射器具，避免不安全性行为等。
2. 定期体检对于有乙肝病毒感染风险的人群，如医务人员、血液制品受血者、性工作者等，应定期进行体检，及时发现乙肝病毒感染情况，尽早进行治疗。
3. 饮食健康乙肝病毒感染会引起肝炎、肝硬化等状况，因此在饮食方面应该注意营养均衡，减少对肝脏的负担，尽可能避免吃辛辣、油腻等刺激性食物，同时也应该戒烟限酒，避免过度饮酒对肝脏的伤害。
检测hbsag的常用方法是
检测hbsag的常用方法是检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的常用方法包括免疫荧光法、酶免疫法、免疫层析法和聚合酶链反应法。
免疫荧光法是一种常用、成熟的HBsAg检测方法。
其原理是，在荧光显微镜下观察标本中HBsAg与特异性抗原结合形成荧光复合物。
这种方法具有高灵敏度和高特异性，能迅速准确地检测HBsAg的存在，并可实现对阳性样本的图像记录。
酶免疫法（ELISA）是一种常用的定性和定量检测HBsAg的方法。
它利用特异性抗原与酶标记的抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
酶作为信号放大因子，可通过底物的酶促反应，产生可见的色素变化。
通过测定底物的酶促反应产物的光密度或荧光值，可以判断样本中HBsAg的浓度。
酶免疫法具有敏感度高、准确性高、简单易行、操作快捷等优点，广泛应用于临床乙肝病毒感染的筛查和诊断。
免疫层析法是一种快速检测HBsAg的方法。
该方法通过溶液或尿液样本在试纸或膜片上向上渗透，与标记在试纸上的抗HBsAg抗体结合形成复合物。
复合物会在试纸上显示出一条颜色变化的线条。
这种方法操作简单，无需仪器，快速方便，适用于乙肝病毒感染的后勤补给和现场筛查。
聚合酶链反应法（PCR）是一种利用酶的芯片技术快速、高效地检测HBsAg的方法。
PCR技术通过特异性引物选择性地扩增HBV核酸，再利用荧光染料或融合探针进行定性或定量分析。
PCR方法具有极高的灵敏度和特异性，能够在病毒感染初期或重度感染时快速准确地检测出HBsAg，对于乙肝感染的早期诊断和监测具有重要意义。
综上所述，免疫荧光法、酶免疫法、免疫层析法和聚合酶链反应法是常用的HBsAg检测方法。
不同的方法有各自的优缺点，临床医生可根据具体情况选择合适的检测方法，以确保乙肝病毒感染的早期发现和准确诊断。
酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的质量保证
酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的质量保证酶联免疫吸附试验(ELISA)法是医学检验的免疫学检验方法之一，已经广泛应用到对病原微生物的免疫学检查试验中[1]。
本文对ELISA法检测乙型肝炎(下称乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)的质量保证进行分析，报道如下。
1 标本的质量保证1.1 严格执行标本的查对制度，接收标本应将标本上的标签与申请单逐一核对，验收签字。
对科室自采的标本，接到申请单后，按申请单上的姓名将受检者喊应，确定性别、年龄，然后编号抽血，避免标本采集错误。
1.2 对检测HBsAg同时又有其他检测项目的，要采集双管血。
对只有单管血的标本，应先检测HBsAg，后送其他室进行检测，以避免相互交叉污染，出现错误的结果。
1.3 标本应及时检验，一次性塑料管标本放置时间不宜过久。
本室有1例弱阳性HBsAg标本，放置72 h后，检测呈阴性。
这是否与塑料有吸附HBsAg作用有关，有待进一步研究证实。
1.4 HBsAg检测使用血清，所以标本一定要充分离心，彻底去除纤维蛋白。
否则加进反应孔的血浆凝固可阻止HBsAg的游动，不利于与吸附在反应杯上的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)结合，从而产生错误的假阴性结果。
对于重度溶血标本应重新采血进行测定。
对严重脂血、黄疸及药物治疗等影响检测结果的标本，亦应叮嘱受检者适时重新检测。
2 检测中的质量保证2.1 加样标本应加入反应孔的底部，加酶试剂时严防溅出孔外污染其他反应孔，且加酶时角度要相同，使各孔的酶剂量保持一致。
2.2 反应温度反应温度应准确至37℃，试剂使用前先放置室温平衡，而且还应考虑反应板放置水浴达到37℃这一平衡段所需的时间。
2.3 反应时间反应时间要准确，时间过短，特异性结合不够，易产生假阴性；时间过长，非特异性结合物紧附于反应孔，难以洗脱，测定值偏高。
2.4 洗板洗板是ELISA法中最重要的环节之一，特别是手工洗板，加入的洗液量以刚满反应孔为限。
1血清乙型肝炎病毒表面抗原检测(丽珠)
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原。
2.标本采集2.1 采集前病人准备：随机采血2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：生化管采集病人静脉血3ml（也可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、高度溶血和使用叠氮钠防腐的标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：珠海丽珠试剂股份有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，样本稀释液，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期一年。
7.仪器设备7.1自动酶标仪7.1.1仪器型号：RT-60007.1.2仪器厂家：深圳雷杜生命科学股份有限公司7.2洗板机7.2.1仪器型号：RT-31007.2.2仪器厂家：深圳雷杜生命科学股份有限公司8.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：20稀释后使用。
8.3备板：按需(待测样本数+4)取出微孔条,将微孔条固定于支架,不足一条的部分以废孔补足为一条，注意底部在同一水平。
8.4加样：先加样本稀释液25ul,所有样本均用加样器加75ul。
具体如下：从A1孔开始，依次加临床样本、室内质控、阳性对照、阴性对照各一孔，最后一孔不加样本，为空白对照。
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原
xx医科大学附属第五医院 xx
乙肝五项报告单
教学目标
• 掌握ELISA检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的原理
酶联免疫吸附试验
技术简介
• 酶联免疫吸附试验：ELISA • 是一种固相酶免疫分析技术 • 即可检测抗原，又可检测抗体 • 广泛地应用于临床和科研检测 • 反应类型：双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法…
固相载体（聚苯乙烯塑料） E E 酶标记乙肝表面抗体
乙肝表面抗体 血清中待测乙肝表面抗原
底物（底物缓冲液+ 底物液）
水浴箱37℃温育
血清中其他非待测抗原
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图 1、特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体
包被 固相乙肝表面抗体
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图 2、加入待测标本，温育，形成固相抗体-待测抗原复合物
抗原抗体反应具有高度的特异性
酶联免疫吸附试验
如何应用双抗体夹心法检测HBsAg?
双抗体夹心法
方法简介
• 是ELISA检测抗原最常用的方法 • 适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原
双抗体夹心法
检测HBsAg三个必要试剂
• 固相化的抗体 • 酶标记的抗原 • 酶反应的底物
双抗体夹心法
反应基本原理
课后思考题
• 试着分析乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）的检测原理？
提示：双抗原夹心法
EE
EE
EE
EE
固相乙肝表面抗体-待测乙肝表面抗原-酶标乙肝表面抗体复合物
双抗体夹心法
检测HBsAg反应原理示意图
6、加底物，固相载体结合的酶催化底物显色
乙肝病毒表面抗原(HBsAg)
乙肝病毒表面抗原（HBsAg）1、方法胶体金法2、原理本品采用胶体金免疫层析专业技术，在玻璃纤维素膜上预包被HBsAg，在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG.检测阳性血清或血浆样本时，样本中HBsAg与胶体金标记抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠IgG结合而富集显色。
阴性标本则在对照线处显色。
3、样本要求3.1可采用全血、血清、血浆进行检测，其中，全血是指末梢血（指血或耳血）。
临床常用抗凝剂（EDTA、肝素、枸橼酸钠）对血浆样本不影响检测结果。
3.2采集静脉的血清、血浆应在无菌条件下，并避免溶血。
3.3如果血清或血浆样品收集后7天内检测，样品须放在2-8℃保存，如果大于7天则须冷冻保存。
3.4全血样本建议在3天内检测，样品放在2-8℃保存，不得冻存。
4.检测方法4.1将试纸取出，粘贴于不干胶记录纸上相应位置，水平放置并做好标记。
4.2用加样器或一次性采血管吸取60ul新鲜全血（或血清、血浆）缓慢滴加于试纸条箭头下方的垫片上4.3为防止弱阳标本的漏检，请于加样后10分钟观察并记录实验结果。
5 检验结果的解释5.1阳性：试纸在检测线和对照线位置出现两条紫红线。
5.2阴性：试纸只在对照线位置出现一条紫红线5.3失效：试纸未出现紫红线或仅在检测线出现一条紫红线。
6.产品性能指标6.1用企业参考品检测6.1.1阴性参考品符合率：用20份乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阴性参考品测定，不得出现假阳性。
6.1.2阳性参考品符合率：用3份乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性参考品测定，不得出现假阴性。
6.1.3最低检出量：用乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）参考品adr、adw、ay三个亚型测定，10分钟观察结果，最低检出量应不高于2.5ng/ml6.1.4精密性：用精密性参考品测定，平行检测10次，反应结果应一致，均为阳性。
乙肝表面抗原col标准
乙肝表面抗原col标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒表面膜蛋白的一种重要抗原，是乙型肝炎病毒的最重要标志之一。
乙型肝炎病毒通过血液、性接触、母婴传播等多种途径进入人体，引起慢性乙肝感染，对人体健康造成极大危害。
乙肝表面抗原检测是乙肝病毒感染的主要血清学检测方法之一，能够准确、及时地发现乙肝感染者，对乙肝的防控起着重要的作用。
目前，乙肝表面抗原检测的方法主要有夹心法、酶免疫法和放射免疫法等。
夹心法是最常用的一种方法，利用具有特异性的抗体夹持检测物质，形成“抗原-抗体-标记抗体”复合物，通过颜色反应或荧光发光等方式来检测HBsAg水平。
而酶免疫法则是利用酶和抗体的特性来进行检测，通过酶促反应来定量检测HBsAg水平。
针对乙肝表面抗原检测的标准，世界卫生组织（WHO）制定了一套统一的国际标准，即乙肝表面抗原col标准。
该标准是在国际范围内广泛认可的一种乙肝表面抗原检测方法，具有高度的准确性和可靠性，被广泛应用于乙肝病毒感染的诊断和监测中。
乙肝表面抗原col标准是通过标准物质对HBsAg进行定量检测得出的，能够准确地反映HBsAg的水平，为乙肝感染者的诊断和治疗提供重要依据。
根据乙肝表面抗原col标准的测定结果，可以及时发现、诊断和治疗乙肝感染者，有效遏制乙肝病毒的传播，保障公共卫生安全。
乙肝表面抗原col标准的制定和实施，对于全球范围内乙肝疫情的控制和防治具有重要意义。
通过建立和推广乙肝表面抗原col标准，可以加强对乙肝感染者的监测和管理，及时发现和治疗患者，最大限度地减少乙肝病毒的传播，降低乙肝相关的疾病发病率和死亡率，保障人民身体健康和社会稳定。
乙肝表面抗原col标准是乙型肝炎病毒感染的重要标志和诊断手段，具有广泛的应用前景和重要的意义。
随着医学技术的不断发展和完善，相信乙肝病毒的防治工作会取得更好的效果，为人类的健康事业做出更大的贡献。
第二篇示例：乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒感染的标志物，也是乙型肝炎的主要传播途径。
实验五ELISA法检查乙肝表面抗原
实验五ELISA法检查乙肝表面抗原
一、实验原理
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种酶联免疫法，它利用可见的酶促
反应（如酶标）来测定或检测特殊的抗原或抗体，也称为酶标免疫分析（ELISA）。
它的作用是，通过特定抗原与特殊抗体之间的特异性结合，
使反应剂（受体物质）发生可见的改变，以此来测定定量或定性的被测物
质（抗原或抗体）是否存在。
ELISA法是用来检测乙肝表面抗原（HBsAg）的一种快速简易的方法。
首先，将患者血清在微孔板上预先唾液，然后在微孔板上涂上特异性抗原
抗体，抗体和抗原结合形成复合体，最后将这种复合体添加进反应液中，
在其中一种特殊条件下，复合体中的受体物质会发生反应，此时可见的酶
标反应就出现了，检测结果就可以出现了。
二、实验步骤
1、准备实验样本和实验设备：患者血清样本，抗体，反应液，微孔板，洗涤盒，细胞培养室，实验酶标板和其他实验用品等。
2、抗原抗体涂覆：将患者血清在微孔板上唾液，然后用特异性抗体
对抗原抗体进行涂覆，并将抗体抗原复合体形成复合体。
3、反应液加入：将复合体加入反应液中，并在恒温水浴箱中反应，
使受体物质发生反应，产生可见酶标反应。
4、检测并判断结果：检测。
1.1乙肝表面抗原检测操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。
2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg 酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。
5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.6温育：置37℃温育60min。
5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
乙肝表面抗原测定
沉淀反应
沉淀反应
沉淀反应
可溶性抗原（如细菌浸出液、细胞裂解上清液及血清蛋白等） 与相应抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，出现肉眼可见 的沉淀物，称为沉淀反应。
参与沉淀反应的抗原称为：沉淀原 参与沉淀反应的抗体称为：沉淀素
凝胶沉淀试验
沉淀反应
单向琼脂扩散试验：
抗原或抗体这两种成分中只有一种扩散，将已知抗体与琼脂混合，将 抗原置于凝胶孔中，抗原则呈辐射状扩散，在孔的周围与抗体结合， 在比例合适的地方形成肉眼可见的沉淀环。当抗体的浓度一定时，抗 原的浓度与形成沉淀环的直径成正比。
谢谢观赏
3.补体结合法
荧光免疫显微技术
基本原理：
利用补体结合反应的原理，用荧光素标记抗补体的抗体，测定未知抗 原或抗体
先是标本中的抗原与抗体反应形成抗原-抗体复合物后，加入补体与之 结合。
再加上抗补体的荧光素标记抗体，通过荧光现象检测抗原或抗体
放射免疫技术
放射免疫
基本原理：
标记抗原（Ag*）和非标记抗原（Ag）对特异性抗体（Ab）的 竞争结合反应
微粒子酶免疫分析(MEIA)
MEIA检测HBsAg是目前世界上检测乙型肝炎病毒标志物的金标准， 采用顺磁性微粒作为固相载体，用稳定的4-甲基磷酸伞型酮(MUP)测出 荧光发光的强度来检测被测物的浓度，对HBsAg检测的灵敏度达 0.17~0.2 ng/ml。它不但灵敏度高且抗干扰能力强，重复性好，并可单 份检测，可检出人群中低浓度和自然感染获得的乙型肝炎病毒核心抗体. 因此认为MEI法对血清HBV标志物的检出阳性率高于ELISA法,MEIA比 ELISA自动化程度高，对病情可做动态监测。
1.直接法
荧光免疫显微技术
基本原理：
将特异性荧光抗体直接滴加于待检抗原标本上，直接与相应抗原 反应，检测未知抗原。
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乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）
1原理：
在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。
2试剂：
2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）
2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司
2.3包装规格：96Test/Kit
2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2 SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：
取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可臵于4℃冰箱保存，如长期保存需臵于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器
4.1全自动酶免分析仪
4.2新鲜蒸馏水或去离子水
4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）
4.4微量移液器
4.5 37℃恒温箱或水浴箱
4.6洗板机或洗瓶
5检验方法
5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2配液：浓缩洗涤液配臵前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。
5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.6温育：臵37℃温育60min。
5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
5.8温育：臵37℃温育30min。
5.9洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。
5.10显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗臵30min。
5.11终止：每孔加入终止液50ul，混匀。
5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD 值（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。
6结果判定与分析
临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD平均值*2.1；阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。
结果判定：样本OD值S/C.O.>=1者为HbsAg阳性样本OD值S/C.O.<1者为HbsAg阴性
阴性对照均值>0.1或阳性对照均值<0.4时，实验无效，应重新试验。
7质量控制
每次试验用HBsAg的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至从新试验使其在控。
8参考范围阴性
9临床意义
在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。
10操作性能灵敏度为ng/ml，特异性高
11方法的局限性
11.1此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测，不适合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。
11.2该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。
11.3试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时，验证试剂盒中的组分是否有效。
11.4由于方法学的局限性，本实验结果仅作为判断疾病的一项依据，如需对患者进行确诊，建议施于其它检验手段予以确认。
12注意事项
12.1试验前请详细阅读试剂说明书，任何违反试剂说明书的使用或操作行为，都可能得到不准确的结果。
12.2所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。
对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质，应有合适的生物安全保证制度，下列为有关注意事项，但不仅限于此：1）戴手套处理样本和试剂；
2）不要用嘴吸样；
3）不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜等；
4）用消毒剂对溅出的样本和试剂进行消毒；
5）按科室有关条列来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。
12.3加试剂前应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
建议使用加液器进行加液，并经常对加液器进行校准。
加液时注意勿使加液枪头接触孔内液体，避免液体间相互污染。
仔细操作，避免加样时在孔中产生气泡。
12.4每板设阴、阳性对照各两孔，设空白对照1孔，空白对照不加样本和酶标抗体、其余各步相同。
12.5避免在孵育和保存过程中试剂被阳光暴晒和接触次氯酸等强氧化
性物质。
12.6孵育温度要保持在37℃+-1℃，温度过高或者过低可能会影响检测结果的准确性。
12.7封模板为一次性使用，重复使用可能导致污染。
12.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路堵塞和腐蚀。
洗涤时各孔军需加满但不溢出，防止孔内有残留物未能洗净。
12.9每次洗涤结束请尽早进行后续加液操作，避免长时间暴露而引起错误结果。
12.10使用全自动生化仪器时，封板和洗版后扣干步骤可以省略。
但需要注意保证洗涤液的加液量，保证洗涤后将微孔板孔中的洗液充分吸干，以免对实验造成错误的结果。
12.11确保反应孔板的底清洁干燥，在读板前要确保孔中液体没有气泡。
12.12终止后尽早用酶标仪进行读数测量（建议在10min内完成读值），避免放臵过长时间而引起的错误结果。
12.13检测结果用酶标仪进行读数测量。
样本的检测读数与样本中抗原的浓度不一定呈正相关。
12.14检测结果呈阴性的样本，不能绝对保证样本中没有低浓度抗原的存在，不能完全排除HBV感染的可能。
12.15该免疫测试不能绝对排除非特异性反应的存在，如对检测结果有疑问，用相应的确认试剂或方法对检测样本进行结果确认。
12.16试剂盒各组分在正确处理和保存的情况下至效期都保持稳定，不能使用过期的试剂，以免造成错误结果。
12.17不同厂商，不同品名、不同批号的试剂不能混用，以免产生错误结果。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。