实验一、蛋白质含量测定2012
蛋白质含量测定实验报告
蛋白质含量测定实验报告1. 引言蛋白质是生命体内最基本的组成部分之一，它们在细胞的结构和功能中起着至关重要的作用。
蛋白质的含量测定是生物化学领域中常用的实验方法之一，它可以帮助我们了解生物体内蛋白质的含量及其变化情况，对于研究细胞活动、疾病发生机理等方面具有重要意义。
2. 实验目的本实验旨在通过测定样本中蛋白质的含量来探究不同方法的可行性和准确性，并了解实验操作的步骤和原理。
3. 实验材料和方法3.1 实验材料：- BSA标准溶液- Coomassie亮蓝G250试剂- 可见光分光光度计- 1 cm光学吸光皿- 雪茄盒- 离心管- 超声波清洗机3.2 实验方法：3.2.1 BSA标准曲线的制备首先，我们需要制备BSA（Bovine Serum Albumin，牛血清白蛋白）的标准曲线。
将一定浓度的BSA溶液分别取0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL和0.5 mL放入不同的离心管中，然后加入相同体积的去离子水，使最终体积达到 1 mL。
将各个离心管标记好，并在试剂最后加入亮蓝G250试剂20 μL。
用超声波清洗机将离心管内混合物彻底混匀，然后静置室温15分钟。
随后，在波长570 nm下使用可见光分光光度计对各组溶液的吸光度进行测定，记录下各个浓度对应的吸光度值。
3.2.2 待测样品的处理将待测样品（如细胞培养物、血浆等）放入雪茄盒中，加入足够的去离子水，然后使用超声波清洗机混匀样品，直至完全溶解。
3.2.3 样品的测定取不同体积的标样和待测样品溶液，加入相应的去离子水，使最终体积达到1 mL，并分别加入亮蓝G250试剂20 μL。
用超声波清洗机将离心管内混合物彻底混匀，然后静置室温15分钟。
随后，在波长570 nm下使用可见光分光光度计对各组溶液的吸光度进行测定，记录下各个浓度对应的吸光度值。
4. 结果和讨论通过对BSA标准曲线的绘制，我们可以得到各个浓度对应的吸光度值。
利用标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度值推算出其蛋白质的含量。
蛋白质的含量测定实验
蛋白质的含量测定实验蛋白质是构成生物体的重要有机分子之一，对于了解生物体的组成和功能具有重要意义。
在科学研究和食品加工等领域，准确测定蛋白质的含量是十分关键的。
本实验将介绍一种常用的蛋白质含量测定方法——低里氏法。
一、材料与试剂准备1. 组织样本：可以选择动植物组织，如肝脏、肌肉等。
2. 水浴锅：用于加热试剂，保持温度恒定。
3. 显色试剂：选择低里氏试剂，常见的有Bradford显色试剂。
4. 蛋白质标准溶液：根据需要选择适当浓度的蛋白质标准溶液，常用的有Bovine Serum Albumin（BSA）标准溶液。
5. 常用实验器材：包括离心管、移液管、离心机、比色皿等。
二、实验步骤1. 样本制备：a. 提取组织样本：取适量的组织样本，如肝脏、肌肉等，使用离心机将其离心，去除杂质和溶液。
b. 重建组织样本：向组织样本中加入一定体积的溶液，使样本浓度适宜，便于后续的测定。
2. 样本处理：a. 取相同体积的样本和蛋白质标准溶液，分别加入离心管中。
b. 添加适量的显色试剂，轻轻摇匀，使样本和标准溶液均匀与显色试剂充分接触。
c. 将离心管放入水浴锅中，调节温度为适宜条件，如常温或37℃。
d. 静置一段时间，使显色反应充分进行。
3. 比色测定：a. 取适量的显色反应液，加入比色皿中。
b. 使用光密度计或分光光度计，以试剂空白对照为基准，测定各个样本的吸光度。
c. 根据吸光度的读数，结合标准曲线，计算出样本中蛋白质的含量。
三、数据分析与结果解读根据实验的结果，我们可以得到样本中蛋白质的含量。
通过对不同样本的测定，可以比较不同组织或不同处理条件下蛋白质含量的差异。
同时，通过与蛋白质标准溶液的比较，可以验证测定方法的准确性和可靠性。
实验结果的解读应根据具体情况进行。
如果是在科学研究中，可以将结果与已有文献进行比较，探讨其在生物体功能或代谢方面的意义。
如果是在食品加工中，可以根据蛋白质含量的测定结果来评估食品的营养价值和质量。
实验一蛋白质含量测定
实验一蛋白质含量的测定姓名：mangogola一．实验原理生物化学实验中，经常需要测定蛋白质的含量，一般常用的蛋白质含量测定方法有紫外吸收法、福林酚试剂法以及一些改进的Lowry法可以应用。
紫外吸收法测定蛋白质含量的原理是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸中的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在280nm处，且蛋白质溶液的光密度值与其含量呈正比关系。
该方法具有简单、灵敏、快速和不消耗样品的优点，但易受核酸分子中嘌呤、嘧啶等的干扰，准确度较差。
根据蛋白质和核酸的吸收峰不同，可通过计算适当校正核酸的干扰作用。
Lowry法的原理是：在碱性条件下，蛋白质与铜离子形成铜-蛋白质复合物，该复合物可还原磷钼酸-磷钨酸（Folin试剂）产生深蓝色的钼蓝和钨蓝混合物。
该方法灵敏度较高，但较费时。
对膜蛋白或相当稀的（如<1ug/ml）蛋白溶液的含量测定，以及为减小去污剂、脂类、碳水化合物的干扰，可采用一些改进的Lowry法，如蛋白质-染料结合法。
原理是：当染料考马斯亮蓝G250与蛋白质结合时，最大吸收峰从465nm移动到595nm，而且吸收值在一定蛋白浓度下线性相关，因此用标准浓度的蛋白测OD595作标准曲线，即可求得待测样品的蛋白浓度。
此方法简单经济、快速、灵敏度也较高。
需要注意的是，染料与蛋白质可在3min内完成结合，由于染料试剂中含有酒精成分，易挥发，所以结合生成的复合物在1h 内可比较稳定地存在于溶液中，制作的标准曲线后部会出现弯曲现象。
二．实验过程（Lowry法）1.溶液配制A液：2%Na2CO3，用0.1mol/LNaOH配制。
（不能将NaOH和 Na2CO3干粉混合配制，这样会因释放CO2而不准确）B液：0.5%CuSO4.5H2O,用1%酒石酸钾或酒石酸钠配制。
C液：使用前将A、B液按50:1混合，当天使用。
D液：Folin试剂标准蛋白溶液：200ug/mLBSA溶液2.标准曲线测定按照下表进行操作，用一系列标准浓度的BSA平行进行两组测定反应，记录A500。
生物化学实验指导实验一蛋白质含量...
生物化学实验指导实验一蛋白质含量的测定——考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）G-250染色法一、实验目的掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。
二、实验原理考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。
在一定蛋白质浓度范围内（0-1000 μg/mL），蛋白质含量与蛋白质-色素结合物在波长595nm 处光吸收成正比，故可用于蛋白质含量的测定。
研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
考马斯亮蓝染色法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。
这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。
完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。
由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
（3）干扰物质少。
如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
此法的缺点是：（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS ）等。
三、实验器材分光光度计，离心机，分析天平，研钵，烧杯，量筒（10 mL×1）、容量瓶（100 mL×1）、试管（10 mL×6），试管架，移液管（0.5mL×2；1mL×2；5mL×1）。
蛋白质含量测定法
实验一 蛋白质含量测定法[实验目的]1． 掌握考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质含量的方法 2． 掌握紫外吸收法测定蛋白质含量的方法一．考马斯亮蓝法（Bradford 法）[实验原理]（蓝色）变为氨基酸芳香族碱性染料考马斯亮蓝磷酸nm G 595250max λ−−→−+-[器材与试剂]（一） 器材1． 722型和753型可见光分光光度计 2． 漩涡混合器 3． 试管16支 （二） 试剂1． 标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA ），配制成1.03mg/ml 和0.103mg/ml 。
2． 考马斯亮蓝G-250染料试剂：称100mg 考马斯亮蓝，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1升。
[实验方法]1． 标准方法 （1） 取10支试管，分别编号后按 表1-1 剂量依次加入标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。
每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。
（2） 加完染料20min 后，使用722分光光度计（灵敏度4），塑料比色皿，在595nm处测量吸光度A 595。
（3） 用标准蛋白浓度（mg/ml ）为横坐标，用A 595为纵坐标，进行直线拟合，得到标准曲线。
根据测得的未知样品的A 595，查表即可求得未知样品的蛋白质含量。
2． 微量法取10支试管，分别编号后按 表1-3 剂量依次加入稀释的标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。
其他步骤同上，不过使用753分光光度计（狭缝4）。
3． SDS 干扰实验 （1） 取5支试管，分别编号后按表1-5剂量依次加入标准蛋白、SDS 、去离子水和考马斯亮蓝染料。
每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。
（2） 加完染料20min 后，使用753分光光度计（狭缝4），塑料比色皿，在595nm处测量吸光度A 595。
[实验数据与结果分析]（一） 标准方法的数据和图表1 考马斯亮蓝标准法实验表格管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准蛋白质 （1.03mg/ml ） 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 未知蛋白质 （约0.5mg/ml ）0.04 0.08 0.10 蒸馏水 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.06 0.02 0 考马斯亮蓝 G-250试剂 3.03.03.03.03.03.03.03.03.03.0对应的吸光度A 5950.200 0.311 0.362 0.483 0.624 0.752 0.845 0.387 0.501 0.572根据表1，以A 595为纵坐标，标准蛋白质量/（μg ）为横坐标，作图1。
蛋白质含量测定实验报告
一、实验目的1. 理解并掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和操作步骤。
2. 学习使用分光光度计进行比色分析。
3. 通过实验，掌握蛋白质含量测定的实际操作，提高实验技能。
二、实验原理考马斯亮蓝法是一种快速、简便的蛋白质定量方法。
该法基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合，蛋白质含量与染料结合程度呈线性关系。
通过测定溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出蛋白质的含量。
实验原理：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与考马斯亮蓝G-250染料发生结合，形成有色的复合物。
该复合物在特定波长下有特征性吸收峰，其吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
三、实验材料1. 蛋白质标准品（如牛血清白蛋白）。
2. 考马斯亮蓝G-250染料。
3. 6.0mol/L NaOH溶液。
4. 双蒸水。
5. 分光光度计。
6. 试管、移液器、吸管等实验器材。
四、实验步骤1. 标准曲线制作：将不同浓度的蛋白质标准品配制成溶液，分别加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程。
2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。
实验结果显示，待测样品中的蛋白质含量为XX g/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染和误差。
2. 在制作标准曲线时，应选择合适的浓度范围，保证线性关系良好。
3. 待测样品的稀释倍数应根据实际浓度选择，以保证在检测范围内。
4. 在测定吸光度时，应注意仪器校准和操作，避免误差。
七、实验总结本次实验通过考马斯亮蓝法测定了待测样品中的蛋白质含量，实验结果准确可靠。
生化综合实验报告--测定蛋白质含量的三种方法及其比较
①容量瓶②试管及试管架
③恒温水浴槽④吸量管
⑤分光光度计⑥电热套
⑦锥形瓶⑧比色皿
(3)紫外吸收法
试剂:
样品蛋白溶液:准确称样品蛋白质,配制成一定浓度的溶液。
器材:
①紫外分光光度计②容量瓶
③试管、试管架④吸量管
⑤锥形瓶⑥比色皿
4．实验方法步骤及注意事项
双缩脲法
标准曲线的绘制:
取12支试管分成两组，按下表平行操作，绘制标准曲线。
实验远没有我想象的那样简单，要想做好一个实验，容不得半点马虎。综合实验正是这培养了我们的耐心、恒心和信心，让我们的思维和创造力得到了大幅度的提高，让我们的科学素养有了很大的飞越。真真正正变学生的被动学习为主动学习，激发了我们的学习热情，不管实验成功或是失败，我们都能从中获得很多从其它地方得不到的知识，让我们获益匪浅！
若样品中含有大量吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
5.实验数据处理方法
双缩脲法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
O．D540
0
0.021
0.052
0.160
0.316
0.345
0.08
0.029
标准蛋白质浓度(mg/ml）
0
1
2
3
4
5
X
Y
考马斯亮蓝染色法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
蛋白质浓度（ug/ml）
样品测定:
①制备样品的蛋白质提取液。
②取出两份1.0 ml样品液。操作同标准曲线，测定样品的OD值，平行两份
计算:
测蛋白质含量实验报告
测蛋白质含量实验报告测蛋白质含量实验报告蛋白质是生物体内最基本的组成部分之一，具有重要的生理功能。
因此，准确测定蛋白质含量对于生物学研究和食品科学等领域具有重要意义。
本文将介绍一种常用的测定蛋白质含量的方法——布拉德福法，并通过实验结果探讨其应用范围和局限性。
布拉德福法是一种基于蛋白质与染料结合的原理来测定蛋白质含量的方法。
该方法利用染料与蛋白质之间的亲和作用，通过测定染料的吸光度来间接测定蛋白质的含量。
在实验中，我们使用了布拉德福试剂和标准蛋白质溶液，以及待测样品。
首先，我们需要制备一系列不同浓度的标准蛋白质溶液。
通过将已知浓度的标准蛋白质与布拉德福试剂混合，形成一种混合物。
然后，利用分光光度计测定该混合物的吸光度，并绘制标准曲线。
标准曲线的横坐标为标准蛋白质的浓度，纵坐标为吸光度。
通过测定待测样品的吸光度，并利用标准曲线，我们可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。
在实验过程中，我们发现布拉德福法具有一定的优点和局限性。
首先，该方法操作简单，结果可靠。
布拉德福试剂与蛋白质结合后会发生颜色变化，通过测定吸光度可以准确测定蛋白质的含量。
其次，该方法适用范围广。
无论是高浓度还是低浓度的蛋白质溶液，布拉德福法都可以进行测定。
此外，该方法对于不同种类的蛋白质也适用。
无论是动物蛋白质还是植物蛋白质，布拉德福法都可以准确测定其含量。
然而，布拉德福法也存在一些局限性。
首先，该方法对于某些特定的蛋白质可能不适用。
某些蛋白质的氨基酸组成可能会影响其与布拉德福试剂的结合情况，从而导致测定结果的不准确。
其次，该方法对于含有干扰物的样品可能会出现误差。
某些样品中可能存在与蛋白质结合的其他物质，这些物质可能会干扰布拉德福试剂与蛋白质的结合，导致测定结果的偏差。
综上所述，布拉德福法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，具有操作简单、适用范围广的优点。
然而，该方法也存在一定的局限性，对于某些特定的蛋白质和含有干扰物的样品可能会出现误差。
蛋白质含量测定方法的研究_2
实验一蛋白质含量测定方法的研究一、研究背景蛋白质是生物的重要组成部分，在人类发现蛋白质后一直没有停下过研究得脚步。
在实验室提取蛋白质的过程中，目标蛋白质的来源是广泛的，而不同的样品中目标蛋白质的含量是不同的，为了得到更多的目标蛋白，就需要了解样品中蛋白质的含量。
在实际的生活中也需要运用蛋白质含量的测定，例如牛奶、奶粉中蛋白质含量。
记得前几年轰动一时三聚氰胺事件，国家的标准蛋白质检测方法被不法分子所利用，通过蛋白质检测方法的缺陷来谋取暴利。
目前常用的蛋白质检测方法有五种：凯式定氮法、Folin-酚法、考马斯亮蓝法、紫外法、双缩脲法。
不同的方法有不同的优缺点。
二、研究目标通过四种不同的蛋白质测定方法了解各种方法的优缺点。
在不同的条件下，能选择正确的测定方法，从而获得正确的数据。
三、研究策略根据资料可以知道四种方法的局限性，针对这一个单一的变量设计五组实验。
一个是标准对照组，其他四组分别在标准组的基础上引入一种变量。
用四种方法分别测定五种溶液。
在对同一种溶液的测定结果中，必有一种方法的结果和其他的结果有显著差异，同时与标准液的结果也有显著的差异。
我们就认为这组溶液中的变量对于该蛋白质测定的方法影响较大。
四、研究方案及可行性分析研究方案：1、配置一组浓度梯度的标准液，分别用四种方法测定，并建立标准曲线。
2、配置五种等浓度的样品蛋白质溶液并编号ABCDE。
在配置过程中，A组加10毫升蒸馏水；B组加10毫升嘌呤溶液；C组加入10毫升EDTA溶液；D组加入10毫升双氧水溶液；E组加入10毫升盐酸溶液。
3、分别用四种方法测定五种蛋白质溶液。
4、分析结果可行性分析：更具已有资料设计了四个单一的变量，分别针对四种实验的缺点，同时保证没有其他的变量。
预期结果：在每组实验的结果中分别有一个数据是在横向和纵向上都有显著差异的。
我们可以确定这个变量对该实验有很大的影响。
五、具体实验设计1.建立标准曲线紫外法a.仪器：紫外分光光度仪、移液管、试管和试管架试剂：标准牛血清蛋白溶液b.280nm下测其光密度值。
蛋白质含量测定实验报告
蛋白质含量测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定食物中蛋白质含量的方法，掌握蛋白质的测定原理和操作技能，加深对蛋白质的认识，为日常饮食提供科学依据。
二、实验原理。
本实验采用了比色法测定蛋白质含量。
比色法是根据蛋白质与双酚类物质在碱性条件下生成紫色化合物的原理，利用紫外可见光谱法测定其吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将食物样品研磨成粉末状。
2. 蛋白质提取，取适量样品加入提取液，振荡离心，收集上清液。
3. 比色反应，将提取液与试剂混合，待反应完成后进行测定。
4. 吸光度测定，用紫外可见光谱仪测定吸光度。
5. 计算蛋白质含量，根据吸光度值计算出样品中蛋白质的含量。
四、实验结果。
经过实验测定，得出食物样品中蛋白质含量为Xg/100g。
五、实验分析。
通过本次实验，我们了解了蛋白质含量测定的原理和方法，掌握了比色法测定蛋白质含量的操作技能。
同时，也发现不同食物样品中蛋白质含量的差异，为我们科学合理地进行日常饮食提供了参考。
六、实验总结。
蛋白质是人体生命活动的重要组成部分，合理摄入足够的蛋白质对维持身体健康至关重要。
通过本次实验，我们不仅学会了测定蛋白质含量的方法，也增加了对蛋白质的认识，为我们的健康饮食提供了科学依据。
七、实验感想。
本次实验让我深刻认识到蛋白质在日常饮食中的重要性，也让我对科学实验有了更深的理解和体会。
希望通过今后的学习和实践，能够更好地运用所学知识，为自己和他人的健康提供帮助。
八、参考文献。
1. 《食品分析实验指导》，XXX，XXX出版社，XXXX年。
2. 《食品化学与分析》，XXX，XXX出版社，XXXX年。
以上就是本次蛋白质含量测定实验的报告内容，希望对大家有所帮助。
蛋白质含量的测定实验报告
蛋白质含量的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定食品中蛋白质含量的方法，掌握蛋白质含量的测定原理和操作技能，为食品质量的检验提供科学依据。
二、实验原理。
蛋白质含量的测定方法有多种，本实验采用的是经典的凯氏试剂法。
该方法是利用碱性铜溶液与蛋白质中的蛋白质结合成紫色沉淀，通过比色计算出蛋白质含量。
三、实验仪器和试剂。
1. 仪器，量筒、烧杯、比色皿、分析天平等。
2. 试剂，凯氏试剂、蛋白质标准品、硫酸铜溶液、碱液等。
四、实验步骤。
1. 样品制备，将待测样品称取适量，加入适量的硫酸铜溶液，摇匀后放置一段时间。
2. 沉淀分离，将沉淀转移到预先称量的滤纸上，用水洗涤至无碱性铜试剂残留。
3. 沉淀溶解，将沉淀与少量硫酸铜溶液混合，加入碱液溶解。
4. 比色计算，用比色皿盛放试液，通过比色计算出蛋白质含量。
五、实验结果。
通过实验测得样品的蛋白质含量为XXg/100g。
六、实验分析。
根据实验结果，可以初步判断样品的蛋白质含量符合标准要求。
但需要注意的是，蛋白质含量的测定结果受到多种因素的影响，如样品制备不均匀、操作不规范等，因此在实际应用中还需要结合其他分析方法进行综合判断。
七、实验结论。
本实验通过凯氏试剂法测定了样品的蛋白质含量，结果表明样品的蛋白质含量符合标准要求。
但仍需注意实验操作的规范性，以确保结果的准确性和可靠性。
八、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了蛋白质含量的测定方法和操作技能，提高了对食品质量检验的能力，为今后的实验和工作积累了经验。
以上就是本次蛋白质含量的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
测蛋白质含量实验报告
测蛋白质含量实验报告测蛋白质含量实验报告引言：蛋白质是构成生物体的重要组成部分，对于维持生命活动具有重要作用。
因此，准确测定蛋白质的含量对于生物学、医学等领域的研究具有重要意义。
本实验旨在通过测定蛋白质含量的方法，探究不同样品中蛋白质的含量差异。
实验方法：1. 准备不同浓度的蛋白质标准溶液，分别为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3mg/mL、0.4 mg/mL和0.5 mg/mL。
2. 取一定量的不同样品，如鸡蛋清、牛奶、豆浆等。
3. 将标准溶液和样品分别加入试管中，每个样品和标准溶液各加入相同体积。
4. 加入适量的Bradford试剂，轻轻摇匀。
5. 在室温下孵育15分钟，使试剂与蛋白质反应。
6. 使用分光光度计，以595 nm波长测量吸光度。
实验结果：通过测量吸光度，得到了不同标准溶液和样品的吸光度值，如下表所示：标准溶液浓度（mg/mL）吸光度0.1 0.220.2 0.340.3 0.470.4 0.610.5 0.75样品吸光度鸡蛋清 0.39牛奶 0.52豆浆 0.45讨论：根据实验结果，可以看出标准溶液的吸光度随浓度的增加而增加，呈现出明显的线性关系。
而样品的吸光度值则介于标准溶液的吸光度之间，说明样品中也含有一定量的蛋白质。
在本实验中，我们使用了Bradford试剂进行蛋白质含量的测定。
Bradford试剂的原理是根据蛋白质与染料之间的结合反应，使染料的吸收峰位发生变化，从而测定蛋白质的含量。
由于Bradford试剂对蛋白质有较高的选择性，且反应时间短，因此被广泛应用于蛋白质含量的测定。
然而，需要注意的是，Bradford试剂对于不同蛋白质的反应性可能存在差异。
一些特殊的蛋白质，如硫醇蛋白质、胶原蛋白等，可能会导致测定结果的误差。
因此，在具体实验中，需要根据不同样品的特点选择合适的蛋白质测定方法。
此外，实验结果还表明不同样品中蛋白质的含量存在差异。
鸡蛋清中的蛋白质含量较低，而牛奶和豆浆中的蛋白质含量较高。
实验一蛋白质含量测定方法的研究
实验⼀蛋⽩质含量测定⽅法的研究⽣物化学实验预习报告实验⼀蛋⽩质含量测定⽅法的研究⼀、研究背景蛋⽩质含量的测定⼴泛应⽤于⽣产实践、医药卫⽣等各个领域，如测定⽜奶等⾷品中蛋⽩质的含量作为其营养成分的参考值，测定病⼈尿液中蛋⽩质的含量以检测其是否患有某种疾病等，因⽽测定蛋⽩质的含量具有⾮常重要的意义。
由于蛋⽩质本⾝具有⼀系列的特点（如具有等电点、富含有机氮、含有肽键、存在某些含共轭双键的氨基酸残基、可与某些染料结合等），利⽤它的这些特点可以通过特定的化学反应或者某些物理⼿段，将⼀定量的蛋⽩质转化为可以⽅便定量测定的其他量，从⽽达到测定蛋⽩质含量的⽬的。
蛋⽩质诸多特点的存在决定了它会有不同的测定⽅法，同时由于多种⾮蛋⽩组分的存在和⼲扰以及各种⽅法本⾝的局限性（适⽤条件），每⼀种测定⽅法都有各⾃的优缺点，某⼀种⽅法并不能在任何条件下适⽤于任何形式的蛋⽩质，所以多种测定⽅法的共存是有意义的。
⽬前常⽤的蛋⽩质含量测定⽅法有四种：凯⽒定氮法、Folin-酚法、考马斯亮蓝（G-250）法、紫外法，其中后三种⽅法最常⽤。
在实际⼯作中，需要根据所测定对象的具体情况综合考虑各种因素(如实验器材的限制、实验所要求的灵敏度和精确度、所测定蛋⽩质的种类与性质、溶液中存在的⼲扰物质、测定所花费的时间等)，有选择性地使⽤某种⽅法。
⼆、研究⽬标1.掌握常⽤的蛋⽩质含量测定⽅法的原理和操作流程；（基础⽬标）2.了解不同测定⽅法的优点和局限性，掌握在实际⼯作中不同测定⽅法的选择条件；（基础⽬标）3.证明⾮蛋⽩组分在蛋⽩质含量测定中存在⼲扰，并通过分析实验结果确定该⼲扰在实际⼯作中是否可以忽略。
（⾼级⽬标）三、研究策略本实验最重要的⽬的是为了确定⾮蛋⽩组分在蛋⽩质含量测定中存在的⼲扰是否可以忽略。
思路有两种：⼀种⽅法是先测定纯蛋⽩质溶液中蛋⽩质含量，随后在该溶液中加⼊⾮蛋⽩组分（如嘌呤、嘧啶等吸光物质，Ca2+等⾦属离⼦，⽆机酸或⽆机碱，甚⾄某些⾊素等），测定此时蛋⽩质含量，对⽐两次测定结果，计算相对误差，从⽽得出⾮蛋⽩组分的影响程度；另⼀种⽅法是直接使⽤天然的蛋⽩质粗提取物（含有⾮蛋⽩组分，并将其中包含的所有⾮蛋⽩组分看成⼀个影响因素），来测定粗提取物中的蛋⽩质含量。
食品营养学实验2012
实验一 食物蛋白质营养价值评价一、 目的1、掌握食物蛋白质营养价值的评价指标计算方法。
2、了解动物实验的设计、分组及动物饲料的配制方法。
二、 实验动物分组和饲养1、要求用同一来源、同一品系、年龄相近、刚断奶（出生21～28天）的雄性大鼠。
动物房应保持室温22～24℃，相对湿度50%～60%，室内空气要流通。
2、先使断乳雄性大鼠适应五天，然后按体重分成三组，每组10只动物，各组动物初始平均体重组间差值小于5g ，组内个体差值小于10g 。
3、动物单笼饲养，分别喂以无氮饲料、含鱼蛋白和含酪蛋白的饲料，自由摄食及饮水。
4、进行代谢试验五天，每天收集粪、尿、净摄食量并测定其含氮量。
5、各组动物再继续喂至28天，每天记录净摄食量，每4天（包括最后一天）称一次体重。
三、 实验结果待测蛋白质动物实验结果见下表表1-1 待测蛋白质动物实验结果（x s ±,n=3）四、 要求请根据以上数据以下要求计算鱼蛋白粉和酪蛋白粉的营养价值，并分别作出评价。
1、蛋白质含量;（鱼蛋白粉=1.739*6.25；酪蛋白饲料=1.735*6.25）2、蛋白质的消化吸收：AD 、TD;3、蛋白质的利用情况：BV 、NPU 、PER 。
TD （真消化率）=100--⨯食物氮粪代谢氮）（粪氮食物氮=100⨯食物氮吸收氮AD （表观消化率）为上式中粪代谢氮=0时的数值数据无氮组 鱼蛋白粉组 酪蛋白组（对照）饲料含氮量（g/100g ）0.074 1.739 1.735 28天食耗（g ） 125.8±5.45 410.5±16 405.2±17.36 增重（g ） -33.8±1.36 104.2±4.74 103.6±5.06 5天摄入氮（g ） 0.017 1.29±0.056 1.126±0.035 5天粪氮（g ） 粪代谢氮0.075±0.006 粪氮0.166±0.004 粪氮0.109±0.01 5天尿氮（g ）尿内源氮0.103±0.006尿氮0.412±0.024尿氮0.431±0.013BV （生物价）=100⨯吸收氮储留氮，储留氮=吸收氮-（尿氮-尿内源氮）NPU （蛋白质净利用率）=100⨯食物氮储留氮=TD ×BVPER （蛋白质功效比）=摄入食物蛋白质总克数动物体重增加克数实验二 膳食调查结果计算与评价一、目的1、掌握膳食调查目的、方法、优缺点和应用范围；2、熟悉膳食调查结果计算的主要步骤；3、熟悉膳食调查结果评价的主要内容，提出膳食改进建议；4、掌握食物成分表的使用方法。
生化实验01-蛋白质含量的测定
1.0mL
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2
0
5mL，混匀后室温下放置5~10min
0.5mL（逐一加入并立即混匀），20~30min后，测定
A650
6
比色测定：
1号管为空白，在650nm波长下用10mm光程的比色皿测定各管 的吸光度。
标准曲线绘制：
以每管标准蛋白含量（μg）为 横坐标，吸光度（A650）为纵坐标 ，在坐标纸上绘制出标准曲线。
-3
T1
T1
T1
-1
-2
-3
3个技术重复
T2
T2
T2
-1
-2
-3
T3
T3
T3
-1
பைடு நூலகம்
-2
-3
9
五、原始数据
A650的记录
管号
12 34 5
标准蛋白 0 50 100 150 200
含量 (μg)
A650
W=
VT=
VS=
测定-1 测定-2 测定-3
N=
10
六、结果计算
• 标准曲线的绘制： 1、坐标纸绘制 2、在excel中绘制并求
出回归方程
A650
0.3 0.2 0.1
50 100 150 200
蛋白质含量（ μg ）
11
X：根据样品的吸光值查得的蛋白质含量（ μg ）； X1= , X2= ，X3= ，X平均=
12
样品中蛋白质的含量（mg/g）＝
X VT N W VS 1000
X：根据样品的吸光值查得的蛋白质量（μg）； VT：提取液总体积（mL）； Vs：测定时取用的样品体积（mL）； W：样品鲜质量（g）； N：样品稀释倍数）
实验一蛋白质含量的测定
2NH3+ H2SO4(NH4)2SO4(2)
(NH4)2SO4+ 2NaOH2H2O +Na2SO4+ 2NH3(3)
反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。
将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定
非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）
用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）
灵敏度低
1～20mg
中速
20~30分钟
多肽键＋碱性Cu2＋紫色络合物
硫酸铵；
Tris缓冲液；
某些氨基酸
用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法
（一）实验原理
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
H2O
O=C C=O
HN NH
（250g/ml）
未知蛋白质0.2 0.4 0.6
（约250g/ml）
蒸馏水1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 00.8 0.6 0.4
试剂甲5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
试剂乙0.5 0.50.50.50.50.50.50.50.50.5
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法
样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：
豆芽中蛋白质含量的测定
豆芽中蛋白质含量的测定——考马斯亮蓝G-250染色法生科2012级3班童雪晨2012506068 一、前言蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着十分重要的作用。
生物的结构和性状都与蛋白质有关。
蛋白质还参与基因表达的调节，以及细胞中氧化还原、电子传递、神经传递乃至学习和记忆等多种生命活动过程。
在细胞和生物体内各种生物化学反应中起催化作用的酶主要也是蛋白质。
许多重要的激素，如胰岛素和胸腺激素等也都是蛋白质。
因此，测定蛋白质含量具有重要意义。
二、材料与方法1、材料绿豆芽、黄豆芽2、方法1) 采用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量，按下表(一)所示取7支试管，依次加入各溶液，反应后立即摇匀，置室温下放置5分钟，然后测各管的OD值，以OD值为纵坐标，浓度值为横坐标绘制标准曲线。
2) 称取绿豆芽、黄豆芽下胚轴各1g，放入研钵中，加少量石英砂和2ml水，研成匀浆，转入离心管，再用水分三次冲洗研钵（每次4ml）,均转入同一离心管。
等重后3500r/min,离心15min,取上清液转入25ml容量瓶，用水定容（样品提取液）。
3）取0.5ml样品提取液于试管中，加入考马斯亮蓝G-250染色液5ml，充分混匀，放置5分钟，测OD值，记录结果，查曲线，得蛋白质浓度（μg/ml）。
三、结果分析表（一）制作标准曲线加样表表（二）标准曲线经计算得，黄豆芽中蛋白质浓度X黄=69.5（μg/ml）编号 1 2 3 4 5 6 黄豆芽绿豆芽标准蛋白（ml）0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.50.5 0.5水（ml）0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0浓度（mg/ml) O.0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 X X 染色液（ml） 5 5 5 5 5 5 5 5 OD值0.000 0.066 0.297 0.562 0.825 0.967 0.265 0.187绿豆芽中蛋白质浓度X=49.0（μg/ml）绿则，根据公式样品蛋白质含量（μg/g）=[X ×提取液的总体积]/样品鲜重（g）得黄豆芽中蛋白质含量=1737.5μg/g绿豆芽中蛋白质含量=1225μg/g四、结果讨论由实验结果可以看出，黄豆芽下胚轴的蛋白质含量明显比绿豆芽下胚轴蛋白质含量高。
测蛋白质含量实验报告
一、实验目的1. 熟悉蛋白质含量测定的原理和方法；2. 掌握双缩脲法和凯氏定氮法测定蛋白质含量的操作步骤；3. 了解不同方法测定蛋白质含量的优缺点；4. 培养实验操作能力和数据处理能力。
二、实验原理1. 双缩脲法：蛋白质分子中含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），在碱性溶液中能与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。
这种紫红色络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量在一定范围内呈正比关系。
2. 凯氏定氮法：蛋白质中的氮含量相对稳定，约为16%左右。
通过凯氏定氮法测定样品中的氮含量，再乘以 6.25，即可得到蛋白质含量。
该方法包括样品的消化、蒸馏、滴定等步骤。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、牛肉、花生、大豆、玉米粉等蛋白质样品；标准蛋白质溶液；NaOH溶液；双缩脲试剂；凯氏定氮试剂等。
2. 实验仪器：分光光度计、电子天平、移液器、试管、锥形瓶、凯氏烧瓶、电炉、蒸馏装置、滴定管等。
四、实验步骤1. 双缩脲法（1）配制标准蛋白质溶液：准确称取一定量的标准蛋白质，用蒸馏水溶解并定容至100ml，得到浓度为1mg/ml的标准蛋白质溶液。
（2）制备样品溶液：准确称取一定量的蛋白质样品，用蒸馏水溶解并定容至10ml，得到浓度为0.1mg/ml的样品溶液。
（3）测定吸光度：分别取标准蛋白质溶液和样品溶液各1ml，加入2ml双缩脲试剂，混匀后放置10分钟，用分光光度计在540nm处测定吸光度。
2. 凯氏定氮法（1）样品消化：准确称取一定量的蛋白质样品，加入适量的浓硫酸和硫酸钾，放入凯氏烧瓶中，加热消化至无色透明。
（2）蒸馏：将消化后的溶液转移到蒸馏装置中，加入适量的浓氢氧化钠溶液，加热蒸馏，用硼酸溶液吸收蒸馏出的氨气。
（3）滴定：待吸收完全后，用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定至终点，记录消耗的盐酸体积。
实验一、蛋白质含量测定
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11
考马斯亮蓝染色法（Bradford法）
简便, 迅速，灵敏度较高。只需要一种反应 试剂
影响因素较少。去污剂和两性物质对测定有 干扰
小于3000Da 的多肽无法测定 蛋白浓度高时非线性 配制的染色液需过滤除去未溶解的考马斯亮
蓝G250
光谱。
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6
紫外吸收法
肽键在190nm有强吸收峰。
一般分光光度计在190nm的光强较弱，且O2在 此波长有吸收，因此通常使用205nm或210nm 波长，Trp, Phe, Tyr, His, Cys, Met, and Arg的 侧链在此波长有吸收。优点：灵敏，较稳定。
缺点: 干扰因素多。许多化学物质特别是含C ＝C双键和C＝O双键的物质在此波长范围有 吸收，所以必须严格控制反应条件。
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3
常用的方法
物理性质：紫外吸收法 化学性质：Folin－酚试剂法（Lowry法），BCA法
（Bicinchoninic acid 法），凯氏定氮法，双缩脲 法（Biuret法），胶体金测定法，等等 染色性质：考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、银染 法
测定绝对含量应用凯氏定氮法（蛋白质的含氮量 为16％）。
Cu+以及蛋白质中的Tyr等的侧链基团与试剂乙反应，试 剂乙中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的Tyr和Phe 残基还原，产生蓝色化合物（钼兰和钨兰的混合物）， 显色反应在30分钟内接近极限。
颜色深浅与蛋白含量成正比，可在640nm下测光吸收。
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14
Folin-酚试剂法（Lowry法）
• 酸、铜离子螯合剂（如EDTA、柠檬酸等）、还原剂（如巯基乙 醇、DTT、苯酚等）干扰本反应。
蛋白质含量的测定实验报告
蛋白质含量的测定实验报告蛋白质含量的测定实验报告引言：蛋白质是生命体内最基本的组成部分之一，对于维持生命活动具有重要作用。
因此，准确测定蛋白质含量对于生物学、医学等领域的研究具有重要意义。
本实验旨在通过一系列的实验步骤，准确测定样品中蛋白质的含量。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 样品：选择具有高蛋白含量的食品样品，如鸡蛋、牛奶等。
- 试剂：含有蛋白质的测定试剂盒，如BCA试剂盒。
- 标准品：含有已知蛋白质含量的标准品。
2. 实验步骤：1) 样品预处理：将样品加热至一定温度，使蛋白质变性，以便更好地释放出蛋白质。
2) 标准曲线制备：取一系列已知浓度的标准品，按照试剂盒说明书的要求进行处理，制备标准曲线。
3) 样品处理：将经过预处理的样品与试剂盒中的试剂混合，按照说明书的要求进行反应。
4) 光度测定：使用分光光度计测定反应液的吸光度，并与标准曲线进行比较，计算出样品中蛋白质的含量。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了样品中蛋白质的含量。
根据实验数据，我们可以得出以下结论：1. 样品与标准品的比较：通过与标准品的比较，我们可以确定样品中蛋白质的相对含量。
如果样品的吸光度与标准品相近，说明样品中蛋白质含量较高；反之，如果吸光度较低，则说明样品中蛋白质含量较低。
2. 实验误差的影响：在实验过程中，存在一定的误差。
这些误差可能来自于样品的处理过程、试剂的质量以及实验操作的技巧等方面。
因此，在进行实验时，需要注意控制这些误差，以保证测定结果的准确性和可靠性。
3. 实验结果的应用：蛋白质的测定结果可以应用于许多领域。
例如，在食品工业中，可以通过测定食品样品中的蛋白质含量来评估其营养价值；在医学研究中，可以通过测定体液中的蛋白质含量来诊断疾病。
结论：通过本实验，我们成功地测定了样品中蛋白质的含量。
在实验过程中，我们掌握了一系列的实验技巧和操作步骤，并了解了蛋白质测定的原理和应用。
蛋白质的测定对于生物学和医学等领域的研究具有重要意义，通过准确测定蛋白质含量，我们可以更好地理解生命活动的机制，促进科学的发展和进步。
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生物化学与分子生物学基础实验
考马斯亮蓝染色法（Bradford法）
简便, 迅速，灵敏度较高。只需要一种反应 试剂
影响因素较少。去污剂和两性物质对测定有 干扰
小于3000Da 的多肽无法测定 蛋白浓度高时非线性 配制的染色液需过滤除去未溶解的考马斯亮
测定绝对含量应用凯氏定氮法（蛋白质的含氮量 为16％）。
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
蛋白质在紫外光区（190nm-360nm）有两个 强烈吸收峰：280nm和190nm。
280nm有吸收的电子所需能量较少，因为这些 光子存在于芳香环的共轭双键中，色氨酸(Trp)、和 酪氨酸(Tyr)有芳香环，可吸收280nm波长的光子， 苯丙氨酸（Phe）、组氨酸（His）也有微弱吸收。 蛋白质的吸收强度与上述几种氨基酸的含量有关， 因此相同浓度的不同种类蛋白质，其280nm的吸收 值差别很大(图1)。
• 敏感度低，要求样品的浓度较高，量较大。
• 用标准曲线法测定蛋白质含量时，对于那些与标准 蛋白中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，误差 较大。
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
操作步骤
管号
0
标准蛋白溶
0
液（ml）
双蒸水（ml） 4.0
1
2
1.0 1.5
3.0 2.5
3
4
2.0 2.5
2.0 1.5
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
优点： • 不需添加任何试剂，因而对样品没有任何
破坏； • 测量极其简单迅速； • 蛋白浓度和单一的蛋白
质。
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
缺点：
• 干扰测定的影响因素多，尤其是RNA和DNA在此波 长均有强吸收, 所以一定要考虑样品中是否有核酸. 要得到准确可靠的结果，必须严格控制样品溶液的 pH和化学组成，使待测样品和标准样品的实验条件 一致。
生物化学与分子生物学基础实验
图1.蛋白质和核酸的紫外吸收光谱 图A是15μ g /ml蛋白的吸收光谱。图A中插图是1mg/ml的牛免疫球蛋白 IgG(I)、牛血清白蛋白(B)和白明胶(G)的吸收光谱，缓冲液为：0.01% Brij35,0.1M K2SO4,5mM KH2PO4,pH7。 图B是10μ g /ml RNA和DNA的吸收 光谱。
①有多少样品可供分析; ②蛋白质样品浓度大约是多少; ③样品中含有哪些可能影响定量的化学物质； ④所选方法是否简单、可靠； ⑤含量测定的专一性要求是否很高。
生物化学与分子生物学基础实验
常用的方法
物理性质：紫外吸收法 化学性质：Folin－酚试剂法（Lowry法），BCA法
（Bicinchoninic acid 法），凯氏定氮法，双缩脲 法（Biuret法），胶体金测定法，等等 染色性质：考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、银染 法
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
肽键在190nm有强吸收峰。 一般分光光度计在190nm的光强较弱，且O2在 此波长有吸收，因此通常使用205nm或210nm 波长，Trp, Phe, Tyr, His, Cys, Met, and Arg的 侧链在此波长有吸收。优点：灵敏，较稳定。 缺点: 干扰因素多。许多化学物质特别是含C ＝C双键和C＝O双键的物质在此波长范围有 吸收，所以必须严格控制反应条件。
蓝G250
生物化学与分子生物学基础实验
考马斯亮蓝染色法（Bradford法）
实验操作步骤
管号
01 2 3 4 5 6 7
标准蛋白 ul 0 10 20 40 60 80 100 0
蒸馏水 ul
100 90 80 60 40 20 0 0
待测蛋白 ul
-- -
---
- 100
Bradford 试剂 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml
实验一 几种蛋白质定量测
定方法的比较
生物化学与分子生物学基础实验
实验目的
1 掌握紫外吸收法、Folin－酚试剂法 （Lowry法）和考马斯亮蓝染色法 （Bradford法）测定蛋白质含量的原 理和方法
2 掌握分光光度计的原理和使用方法
生物化学与分子生物学基础实验
选择合适的蛋白质含量测定方法主要 基于几点考虑：
生物化学与分子生物学基础实验
Folin-酚试剂法（Lowry法）
• 酸、铜离子螯合剂（如EDTA、柠檬酸等）、还原剂（如巯基乙 醇、DTT、苯酚等）干扰本反应。
• 不同蛋白质主要因其所含的Tyr含量不同而呈现不同的吸收强度。 • 进行测定时，加试剂乙时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH
条件下稳定，但上述还原反应只在pH=10的情况下发生，故当试 剂乙加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在 磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前，还原反应即能发生。这一步 混合速度要快，否则会使显色程度减弱。 • 因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控 制时间。 • 费时较长，试剂配制较繁琐。
567 3.0 4.0 0
1.0 0
0
蛋白质含量
0
(mg/ml)
0.25 0.375 0.5 0.62 0.7 1.0
5
5
未知蛋白溶 液（ml）
-
-
-
-
-
-
-
4.0
A280
生物化学与分子生物学基础实验
考马斯亮蓝染色法（Bradford法）
原 理 ： 该 方 法 由 Bradford 于 1976年建立。在酸性条件下， 考马斯亮蓝与蛋白质结合后最 大 光 吸 收 波 长 由 465nm （ 红 色 ） 转 移 为 595nm （蓝 色） ， 起 作 用 的 主 要 氨 基 酸 是 Arg ， 另 外 ， His, Lys, Tyr, Trp 和 Phe 也 有作用。
A595
室温放置5分钟后测595nm的光吸。
考马斯亮蓝染料极易吸附于比色皿壁，每次测量后应用乙醇 洗涤后，用双蒸水清洗。
注意混匀，但不要剧生烈物化震学与荡分子。生物学基础实验
Folin-酚试剂法（Lowry法）
原理：Folin-酚试剂法的显色试剂由试剂甲和试剂乙 组成。 试剂甲中的Cu2+碱性条件下与肽键形成络合物并被还原 成Cu+。 Cu+以及蛋白质中的Tyr等的侧链基团与试剂乙反应， 试 剂 乙 中 的 磷 钼 酸 盐 — 磷 钨 酸 盐 被 蛋 白 质 中 的 Tyr 和 Phe残基还原，产生蓝色化合物（钼兰和钨兰的混合 物），显色反应在30分钟内接近极限。 颜色深浅与蛋白含量成正比，可在640nm下测光吸收。