测定大黄蒽醌类成分样品制备方法的研究_魏俊峰
实验5-1 大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5 大黄中蒽醌的提取分离与鉴定实验目的：掌握缓冲纸色谱的基本操作技术，能根据缓冲纸色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案；掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术；熟悉缓冲液的配制方法、如何选择萃取剂及其用量；了解蒽醌类化合物的鉴定方法。
实验原理：大黄为泻下、清热解毒、活血化瘀中药，有“推陈致新”的作用。
品种繁多，质优者为蓼科植物掌叶大黄（Rheum Palmatum L.）。
药用大黄（Rheum officinale Baill）和唐古特大黄（R·tang uticum Maxim ex Reg）的根。
大黄中具有泻下作用的成分是几种蒽醌衍生物，其中甙是主要的成分，因其泻下作用常强于相应的甙元，甙元主要包括大黄酚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚共五种蒽醌甙元。
大黄的致泻效力与其中的结合性大黄酸含量成正比。
游离的蒽醌甙元几无致泻作用。
具有较强的致泻作用的蒽醌甙有以下几种：大黄酚-1-葡萄糖甙、大黄素-6-葡萄糖甙、芦荟大黄素-8-葡萄糖甙、大黄酸-8-葡萄糖甙、大黄素甲醚葡萄糖甙、还含有蒽醌衍生物的双糖甙，如：大黄素双葡萄糖甙、芦荟大黄素双葡萄糖甙、大黄酚双葡萄糖甙以及番泻甙A 和B，番泻甙C，番泻甙的泻下作用，较蒽醌甙为强，但含量远较后者为少。
近年来，日本人西冈五夫从大黄中分离出四种新的大黄泻下成分，称大黄酸甙A、B、C、D。
除此外还含有大黄鞣酸及相关物质。
如：没食子酸（一部分是游离的，一部分是结合成没食子酰葡萄糖甙），儿茶精，此类鞣质及相关物质有止泻作用与蒽醌衍生物的甙类之泻下作用恰恰相反。
1、大黄酚（chrysopanol）金黄色片状结晶。
Mp196℃（乙醇或苯），能升华，可溶于丙酮、醋酸、氯仿、甲醇、乙醇、热苯，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液，可溶于NaOH溶液。
2、大黄素（Emodin）橙黄色针状结晶，mp256～257℃（乙醇或冰醋酸）能升华，其溶解度：乙醚0.14%，苯0.041%, 氯仿0.0718%，几不溶于水，易溶于乙醇，可溶于稀氨水，Na2CO3水溶液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
⼤黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定⼤黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定⼀、实验⽬的1.掌握蒽醌苷元的提取⽅法--双相酸⽔减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离⼤黄中各种蒽醌苷元的原理及操作⽅法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜⾊反应及薄层⾊谱鉴别⽅法⼆、实验原理1.提取原理双向酸⽔解法，为⼀相与酸⽔不相互溶的有机溶剂，另⼀相为酸⽔，加热回流⽔解的⽅法。
由于⼤黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以⾸先要将苷⽔解成苷元，本实验选⽤硫酸和⼄酸⼄酯作为双向酸⽔解的溶剂，采⽤加热回流⽅法，提取⼤黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于⽔，可溶于⼄醚、⼄酸⼄酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元⽔解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于⼄酸⼄酯中，从⽽将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，⽤pH梯度法进⾏分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有⼀个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利⽤游离蒽醌的极性不同，采⽤硅胶柱⾊谱法进⾏分离。
（1）⼤黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序⼤黄酸（-COOH）＞⼤黄素（β酚-OH）＞芦荟⼤黄素（醇-OH）＞⼤黄素甲醚（-OCH3）≈⼤黄酚（-CH3）（2）⼤黄中游离蒽醌的极性⼤⼩顺序⼤黄酸＞⼤黄素＞芦荟⼤黄素＞⼤黄素甲醚＞⼤黄酚⼤黄酚和⼤黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可⽤硅胶柱⾊谱法进⾏分离。
三、实验⽅法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离⼯艺流程⼤黄药材（粗粉）50g⼄酸⼄酯提取液药渣去除下层酸⽔层，再⽤蒸馏⽔⽔洗2次（50ml/次）直⾄⼄酸⼄酯层pH值呈中性⼄酸⼄酯提取液碱⽔层⼄酸⼄酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄⾊结晶或黄⾊絮状沉淀）碱⽔层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄⾊结晶（⼤黄酸）沉淀物（橙⾊结晶或40ml/次）橙⾊絮状沉淀）沉淀过滤，碱⽔层丙酮精制橙⾊结晶（⼤黄素）节pH=2沉淀物（橙⾊絮状沉淀）黄⾊沉淀物⼄酸⼄酯层沉淀过滤，⼄酸⼄酯精制硅胶柱⾊谱黄⾊针晶洗脱剂为⽯油醚（60-90℃）（芦荟⼤黄素）-⼄酸⼄酯（15：1）⼤黄酚和⼤黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取⼤黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和⼄酸⼄酯250ml，⽔浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，⼄酸⼄酯提取液置分液漏⽃中，分出酸⽔层，⼄酸⼄酯提取液⽤蒸馏⽔洗2次（20ml/次），将⼄酸⼄酯放置在锥形瓶中，密封。
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定一、实验目的：1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。
2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。
二、实验原理：大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。
其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。
大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有机溶剂中。
为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。
三、实验步骤：A. 大黄中蒽醌的提取分离1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。
2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。
3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。
4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。
5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值一致时即可）6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。
7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：（1）纯特邻醌呈现红色；（2）用极少量生石灰进行检测，呈现橙色。
B. 大黄中大黄素含量的色谱定量测定色谱图谱图峰形面积法进行测定。
1、用同上操作，按“ A ”-“ E ”方法操作，取所得特邻醌溶液 1-5 mL 再加入丙酮使其溶解（溶液的浓度以能出现三个吸光峰为适宜，可调配NaOH溶液调节pH 值，使吸光峰相对集中于三个波长摆荡之一）。
山楂消脂胶囊中大黄蒽醌类成分一测多评法的建立
山楂消脂胶囊中大黄蒽醌类成分一测多评法的建立目的建立山楂消脂胶囊中大黄蒽醌类成分一测多评法的分析方法，并进行方法学考察。
方法以大黄素为内参照物，建立芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚与大黄素间的相对校正因子。
分别采用外标法和一测多评法测定山楂消脂胶囊中4种蒽醌类成分的含量，以验证一测多评法的合理性、可行性和可重复性。
结果一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间无显著差异。
结论一测多评法可作为一种质量评价模式用于山楂消脂胶囊中蒽醌类成分的质量评价。
Abstract：Objective To establish a method for the quantitative analysis of multi-component with a single-marker （QAMS）to determine the contents of four rhubarb anthraquinones in Shanzha Xiaozhi capsules；To conduct methodology investigation. Methods Emodin was set as the internal reference substance，and the relative correlation factors of aloe emodin，rhein，chrysophanol to emodin were calculated and evaluated. The contents of these four anthraquinones were determined by the external standard method and QAMS，respectively. Rationality，feasibility and repeatability of the QAMS method were verified by comparing the results obtained from the two different methods. Results The QAMS method and HPLC method did not show significant difference in results. Conclusion QAMS method can be used as a quality assessment model for quantity evaluation of anthraquinones in Shanzha Xiaozhi Capsules.Key words：QAMS；HPLC；Shanzha Xiaozhi Capsules；anthraquinone；relative correlation factor山楂消脂胶囊是佛山市中医院院内制剂（批准文号：粤药制字Z20060045），由山楂和大黄2味中药组成，具有行气化痰、消积除滞、清热凉血作用，临床主要用于高脂血症、肥胖症等患者[1]。
大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究
大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究魏玉辉1,武新安1,陈 岚1,张承忠2(兰州大学第一医院药剂科,甘肃兰州 730000;21兰州大学药学院,甘肃兰州 730000)摘要:目的 建立大黄蒽醌类成分含量测定的方法。
方法 对三种蒽醌类成分提取方法进行实验对比研究,利用分光光度法进行含量测定。
结果 蒽醌类浓度在01856～251680μg/ml范围内与吸收度呈良好的线形关系(r= 019999),平均回收率为10018%,RSD为0134%。
结论 改进的方法简便、准确可靠,可用于大黄及其制剂的蒽醌类成分的含量测定。
关键词:光茎大黄;蒽醌类成分;提取方法;分光光度法;含量测定Study on determination methods of anthraquinones component of rhubarb W EI Yu2hui1,W U X i n2an1,C H EN L an1,Z H A N G Chen g2z hong2 (11Depart ment of Pharmacy,First Ho spital of Lanzhou University,Lanzhou,730000;21College of Pharmacy,Lanzho u University,Lanzhou,730000,China)【Abstract】 Objective To establish a determination met hod of ant hraquinones of rhu2 barb1Methods To cont rast t hree ext ract met hods of ant hraquinones component of rhubarb,de2 veloped a met hod,ant hraquinones were determined using UV spect rop hotometry met hod1R esults Ant hraqiunones component had a good linearily in t he concent ration range of01856～251680μg/ml(r=019999)1The average recovery was10018%wit h RSD of0134%1Conclusion This met hod is simple,Accurate and reliable,and can be used for t he determination of ant hraquinones component of rhubarb1K ey w ords: rheum glabricaule G1;ant hraquinones;ext ract met hods;UV spect rop hotomet ry; content deteimination 大黄为我国传统药材之一,并为我国重要的出口商品。
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
2，标准对照法
Beer定律A=ELC,因标准溶液与供试品溶液是同物质 ，同仪器，及同一波长于厚度相同的吸收池中测 定，顾L和E都相同，所以有
C样=A样C标\A标
大黄中游离蒽醌含量的计算式为： 含量﹪﹦m样/m大黄×100﹪
七 注意事项及讨论
0.6%的醋酸镁甲醇溶液定容至10ml充分摇匀。用醋酸镁甲醇溶液做空 白对照。开始用752式紫外—分光光度计测量标准溶液 ④然后在相同条件下测定试液的吸光度。 ⑤然后以1.8-二羟基蒽醌的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲 线后求出回归方程，计算供试液的浓度。
2，标准对照法
① 取上面所制备的1.8-二羟基蒽醌标准溶液加入吸收池中。 ② 取醋酸镁甲醇溶液于另一个吸收池作为空白溶剂调整透
吸收池中，以其中任一个吸收池的溶液做空白调 节透光率为100％，在同一波长处分别测定其他各 吸收池溶液的透光率，然后选择相差小于0.5％的 吸收池使用。
b 首先把 752式紫外—分光光度计打开电源预热半
小时以上
<2>开始实验
(一)游离蒽醌的提取
① 用分析天平精确称量大黄粉末xxxxg，并预热水浴锅。 ②用滤纸筒包住大黄粉末，然后放入提取器中。 ③ 在圆底烧瓶中加入30ml氯仿，按实验要求连接回流装置。 ④ 将水浴锅的温度调到62℃左右后，水浴回流0.5小时以上。 ⑤ 0.5小时之后取下装置，将圆底烧瓶中的氯仿的提取液转移至10ml的
游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。
二 实验目的
了解大黄的主要成份及掌握大黄中游离蒽醌的理化 性质。
会用紫外—分光光度计测1，8-二羟基蒽醌及游离蒽 醌的吸光度。
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是一类具有重要药用和工业价值的化合物，广泛应用于医药、染料和化学工业等领域。
提取、分离和鉴定大黄蒽醌类成分的方法对于进一步研究其生物活性和应用具有重要意义。
本文将介绍一种常用的大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定方法。
我们需要准备待提取的植物材料。
大黄是一种常见的含有蒽醌类成分的植物，可以作为提取的原料。
为了提高提取效果，可以将大黄切碎或研磨成较小的颗粒。
接下来，我们可以选择合适的提取剂。
一般来说，乙醇、甲醇或乙醚等有机溶剂是常用的提取剂。
将大黄与提取剂充分混合并浸泡一定时间，以促进目标成分的溶解和转移。
提取完成后，我们需要对提取液进行分离。
通常使用离心、过滤或萃取等方法，将固体颗粒和溶液分离开。
这样可得到含有目标成分的溶液。
为了进一步纯化目标成分，我们可以使用柱层析、薄层层析或高效液相色谱等分离技术。
这些技术可以根据成分的物化性质，如极性、分子大小和亲水性等进行选择。
通过不断进行分离和收集，我们可以得到纯度较高的目标成分。
在分离得到目标成分后，我们需要进行鉴定。
常用的鉴定方法包括红外光谱、质谱和核磁共振等技术。
红外光谱可以用来确定分子的官能团和结构特征。
质谱可以提供分子的相对分子质量和结构信息。
核磁共振可以用来确定分子的空间结构和化学环境。
还可以通过比较样品与标准物质的色谱保留时间和质谱图谱等数据，来确定目标成分的纯度和结构。
如果有条件，还可以进行生物活性实验，评估目标成分的药理活性和毒理学特性。
大黄蒽醌类成分的提取、分离和鉴定是一项复杂而重要的工作。
通过合理选择提取剂、分离技术和鉴定方法，我们可以得到高纯度的目标成分，并进一步研究其应用前景和药理学特性。
这对于推动大黄蒽醌类成分的研究和开发具有重要意义。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。
大黄配方颗粒总蒽醌含量测定的方法学研究
平 2 和水平 3 差异不明显 , 从节约试剂和提高试验
效率角度出发 , 选用水平 2 萃取次数 。
表 7 萃取次数考察结果 ( n = 3)
结果 萃取次数
水平 1 水平 2 水平 3
总蒽醌平均含量 ( %)
2136 2148 2151
RSD ( %)
2107 1171 1145
2121318 实验结果
常用显色剂有醋酸镁甲醇和碱液[122] , 经试验 对比研究发现 , 110 %醋酸镁甲醇溶液显色效果稳 定 , 杂质少 , 灵敏度高 , 故选用 110 %醋酸镁甲醇 溶液作显色剂 , 醋酸镁甲醇显色法亦是许多国家药 典所采用的含蒽醌类成分植物药的法定分析方法 。 21212 对照品溶液的制备
精密称取大黄素对照品 1124 mg , 置 10 mL 容 量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成每 1 mL 含 01124 mg 的溶液 , 即得 。 21213 供试品溶液的制备
备工艺的筛选研究 。
关键词 : 大黄 ; 配方颗粒 ; 总蒽醌 ; 紫外分光光度法
中图分类号 : R28411 ; R944 文献标识码 : A
文章编号 : 100420668 (2006) 012047204
Determination of Total Anthraquinone in Rhubarb Dispensing Granule
参考文献 , 采用将结合型蒽醌用酸水解成苷元 的方法进行测定[328] , 分别对提取溶媒 、方法 , 水 解用酸的种类 、用量 、水解时间 , 萃取溶媒的种 类 、用量等条件进行了筛选试验 。 2121311 提取溶媒的考察
设计了 2 个水平的提取溶剂 , 水平 1 : 甲醇 ; 水平 2 : 80 %乙醇 , 结果见表 1 。选用水平 2 溶剂 提取 。
中药化学实验指导—实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
实验八 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
③
芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液， 加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀， 经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
碱溶酸沉法 适用于具有 酚羟基的醌 类化合物， 由于其可溶 于碱液，加 酸后又沉 淀出。
游离蒽醌与蒽醌 苷的分离
游离蒽醌 的分离
蒽醌苷 的分离
利用苷与苷 元极性不同 ，溶解度不 同的特点进 行分离。
pH梯度 萃取法 此法是分 离游离蒽 醌最常用 的方法。 是利用其 酸性的差 异进行分 离的。
色谱法 常用的吸附 剂有硅胶和 聚酰胺，慎 用氧化铝， 因羟基蒽醌 能与氧化铝 形成牢固的 螯合物，难 以洗脱。
蒽苷的分离 比苷元困难 ，分离前一 般先用溶剂 法除去大部 分杂质，得 较纯的总苷 后，再用柱 色谱分离。
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
④
大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离
（3）薄层检识
吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板。 样品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：苯-醋酸乙酯（8∶2）；苯-甲醇（8∶1） 显色：氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是指一类存在于大黄根茎中的化学成分，主要成
分包括大黄素、大黄酸与大黄蒽醌等。
提取分离与鉴定这些化学成分
需要以下几个步骤：
1. 样品的准备：采集大黄根茎样品，削去外皮和细根，切碎成小
块或粉碎成粉末状。
2. 提取：将样品加入适量的有机溶剂中进行提取，常用的有机溶
剂有乙醇、乙醚、丙酮等。
提取可以采用不同的方法，比如浸泡提取、超声波提取等。
3. 结晶：将提取得到的药材颗粒溶解在有机蒸馏水中，然后用双
水浴器加热到一定温度，待溶液浓缩到一定程度时，停止加热，继续
搅拌至其冷却结晶。
4. 分离：用过滤或分离漏斗等方法将结晶物分离出来，再用洗涤
剂或其他方法对其进行提纯。
5. 鉴定：利用色谱法、红外光谱法、核磁共振法等手段对所提纯
的化合物进行鉴定，确定其结构和成分。
以上是大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定的基本步骤，可以根据
实际情况进行调整和优化。
天然药化大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
滤渣
滤液 滤液移入 500ml 的蒸馏烧瓶中，体积勿超 过瓶容积的 1/2， 常压下回收乙醇至糖浆状 （勿太稠厚） ，得乙醇总提物。加入乙醚 60ml（丙酮 10ml） ，时时振摇，将上层乙 醚液倾入另一三角烧瓶中，残渣加乙醚 40ml（丙酮 2ml） ，合并乙醚提取液。 总游离蒽醌
2．游离蒽醌的分离 乙醚提取物 （1）5%NaHCO3 水溶液萃取 3 次
OH
O
OH
CH3O O
CH3
大黄素-6-甲醚（Physcion） 4．大黄酚（Chrysophanol） 本品六方形或单斜形结晶（乙醇或苯） ，熔点 196℃；具升华性，几乎不溶于水，略溶 于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、氯仿、乙醚及丙酮等。
OH
O
OH
CH3 O
大黄酚（Chrysophanol） 5．芦荟大黄素（Aloe emodm） 橙色针状结晶（甲苯） ，熔点 223-224℃。易溶于热乙醚中。在乙醚及苯中呈黄色，氨 水及硫酸中呈绯红色。
OH HO O OH
OH
OH OO
O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
OH
OH
H OH
OH
CH3
H OH
OH OH
葡萄糖
鼠李糖
三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制 槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H四、实验容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 5%Na大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。
提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。
在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。
2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。
为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。
柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。
薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。
3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。
常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。
红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
大黄中蒽醌类成分的提取 - 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
e.显色：在可见光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后用浓氨水熏 或喷5%醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
f.观察记录：记录图谱并计算Rf值。
四、思考题
1．大黄中5种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如 何排列?为什么?
2．pH梯度法的原理是什么?适用于哪些中药成分的分离?
三、操作要点
1.提取、分离流程（如图一）
2.总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉100 g，加20％硫酸溶液300 ml润湿，再加氯 仿500 ml，回流提取2hr，稍冷后过滤，残渣弃去，氯仿提 取液于分液漏斗中，分出酸水层，得氯仿提取液。
图1.大黄提取分离流程图
3.蒽醌苷元的分离和精制
（1）蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验
（2）分离与精制
a.大黄酸的分离和精制
将含有总蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8缓冲液150 ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250 ml烧杯中，在搅拌下滴 加20％盐酸至pH 3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗 出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10 ml加热溶解，趁热过滤，滤液 放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。
b.醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇l ml使 溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。
(2)色谱鉴识
a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。
b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的 氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。
c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
一、实验目的 1. 掌握蒽醌苷元的提取方法——酸水解法。 2. 掌握缓冲纸色谱的原理及基本操作技术。 3. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术。 4. 通过大黄酚和大黄素甲醚的分离实验，熟悉柱色 谱的操作技术。 5. 熟悉蒽醌类化合物的鉴定方法。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
实验目的
1．掌握 PH 梯度萃取的原理及操作技术； 2．掌握蒽醌类化合物鉴定方法； 3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；
实验原理
利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分 提取出来； 总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解Байду номын сангаас，故回收乙醇后得总提 取物可用乙醚提取总苷元； 根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后 得到不同的蒽醌苷元。
（ 2）呈色反应 ① 滴加 2%NaOH 水溶液，观察颜色变化 ② 滴加 0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 ③ 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化
思考题
PH 梯度萃取的原理是什么？ 大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？ 根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么 它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？
乙醇总提物
放冷，加入乙醚 60ml冷浸，振摇 20′将 乙醚液倾入 500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚 +16ml丙酮冷浸三次（每次 15′）
乙醚层
浸膏
乙醚总提液
2、游离蒽醌的分离
乙醚总提液
5%NaHCO3 水溶液萃取 3次，每次 40、 30、30ml，至水层颜色变浅
乙醚层
5%Na 2CO3水溶 液萃取 3次，每 次40、35、35ml
实验方法
1、大黄中总蒽醌成分的提取分离
大黄粗粉 100g
置1000ml 圆底烧瓶中，加入 95%乙醇 250ml， 回流提取 2hr，趁热抽滤
醇液
醇液
药渣
加入 95%乙醇 200ml，回流提取 1.5hr， 趁热抽滤
药渣
乙醇提取液
回流法提取大黄总蒽醌类成分的工艺研究
回流法提取大黄总蒽醌类成分的工艺研究本研究采用回流法提取大黄总蒽醌类成分。
通过单因素实验和正交试验优化提取工艺条件，得到最佳提取条件为：乙醇浓度60%、提取时间3h、料液比1:10、提取温度80℃。
在此条件下，大黄总蒽醌类成分的提取率为7.86%，总蒽醌类成分的含量为1.57%。
本研究为大黄的提取工艺提供了参考。
关键词：大黄；总蒽醌类成分；回流法；提取工艺引言大黄是一种常用的中药材，具有泻下通便、清热解毒、消肿止痛等功效。
大黄中主要成分为大黄素、大黄酚、大黄酸等，其中大黄素和大黄酚是总蒽醌类成分，是大黄的主要活性成分。
因此，提取大黄总蒽醌类成分对于大黄的药用价值和应用前景具有重要意义。
目前，提取大黄总蒽醌类成分的方法主要有超声波提取法、微波辅助提取法、水提取法、酸碱提取法、醇提取法等。
其中，醇提取法具有操作简单、成本低、提取效果好等优点，是目前应用较广泛的提取方法之一。
回流法是醇提取法中常用的一种方法，具有提取效率高、操作简便等优点，因此在本研究中采用了回流法提取大黄总蒽醌类成分。
实验方法1. 材料与仪器大黄：购自当地药材市场，粉碎后筛选。
乙醇：优级无水乙醇，购自化学试剂公司。
水浴锅：型号为DZKW-2，购自实验室仪器公司。
紫外分光光度计：型号为UV-1800，购自分析仪器公司。
2. 提取方法将大黄粉末称取5g，加入250mL三口瓶中，加入60%乙醇，料液比1:10，回流3h，提取温度80℃。
提取液过滤，取滤液10mL，定容至100mL，用紫外分光光度计测定吸光度，计算提取率和总蒽醌类成分的含量。
3. 实验设计本研究采用单因素实验和正交试验优化提取工艺条件。
单因素实验中，提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度分别作为研究因素，其他条件不变，每个因素设置3个水平，进行提取实验。
正交试验采用L9(34)正交表，共进行9次实验，优化提取条件。
结果与分析1. 单因素实验结果提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度对大黄总蒽醌类成分的提取率和总蒽醌类成分的含量的影响如表1所示。
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品生物制品检定所提供。
样品:牙敏宁喷雾剂(杭州西泠医药保健品厂),方法学研究使用的批号为2000722。
2 实验方法与结果2.1 紫外吸收波长的研究:黄芩苷对照品溶液在277nm处有最大吸收,故本含量测定项选择277nm 作为检测波长。
2.2 色谱条件:色谱柱:Suntek Kro masil C18 (250mm×4.6mm,5L m);流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液(53∶47);检测波长:277nm;流速: 1.0mL/m in。
样品中黄芩苷含量测定的流动相选择甲醇-0.5%磷酸水溶液(53∶47)为流动相。
黄芩苷峰的t R约为13min。
2.3 线性关系考察:精密吸取黄芩苷对照溶液0.0515,0.1030,0.2060,0.412,0.618L g,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定,以黄芩苷吸收峰面积的积分值为纵坐标Y,进样量X(L g)为横坐标,绘制标准曲线,线性回归方程:Y= 52138.9+1727153X,r=0.9999,在0.0515～0.618L g范围内呈线性关系。
2.4 对照品溶液与供试品溶液的制备:对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品适量,加50%甲醇水溶液,制成每1mL含黄芩苷20.6L g的溶液。
供试品溶液的制备:取牙敏宁喷雾剂1.0mL,置10mL容量瓶中,加入50%甲醇水溶液至刻度,摇匀,经0.45L m的微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2.5 精密度试验:精密吸取对照品溶液10L L,注入高效液相色谱仪,测定6次,得样品中黄芩苷的平均含量为0.184mg/mL,RS D=1.90%。
2.6 稳定性试验:精密吸取供试品溶液10L L,每间隔60min进样1次,测定5次后,再过24h测定1次,结果表明供试品溶液在24h内基本稳定,RSD= 2.39%(n=6)。
2.7 重现性试验:取同批号牙敏宁喷雾剂6份,依法测定,结果平均含量为0.178mg/mL,RSD为2.09%。
2.8 回收率试验:精密吸取供试品0.5mL加入到10m L的容量瓶,精密加入黄芩苷对照品适量,加50%甲醇水溶液稀释至刻度,按供试品溶液制备法制备,依法测定,平均回收率为101.87%,R SD为1.49%(n=6)。
2.9 样品测定:精密吸取供试品溶液10L L,注入高效液相色谱仪,测定黄芩苷含量,结果10批平均含量为0.17mg/mL,R SD=0.98%。
2.10 限量的制定:根据10批样品测定结果:每1mL牙敏宁喷雾剂含黄芩以黄芩苷(C21H18O11计)不得少于0.12mg。
测定大黄蒽醌类成分样品制备方法的研究魏俊峰1,王乃婕2,伍孝先1,王洪志1a(1.天津市中西医结合急腹症研究所,天津 300100; 2.天津乐仁堂制药厂,天津 300122)中图分类号:T Q461,R927.2 文献标识码:B 文章编号:02532670(2001)11099303 大黄中含有多种化学成分,其中以蒽醌衍生物最能代表大黄的泻下、抑菌、止血等作用。
此类成分测定方法,本文参考文献[1,2],对用氯仿回流提取游离型蒽醌和用硫酸水解蒽苷氯仿抽提的方法进行了研究。
1 仪器和材料 仪器:Shim adzu LC-10A高效液相色谱仪。
对照品:芦荟大黄素(aloe-em odin),大黄酸(rhein),大黄素(emodin),大黄酚(chr yso phano l),大黄素甲醚(physcion)购自中国药品生物制品检定所。
试剂:甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。
样品:本实验所用大黄药材样品由作者购自不同产地,经北京大学医学部药学院郑俊华教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄Rheum p almatum L.的干燥根及根茎。
2 方法和结果・993・中草药 Chinese T r aditio na l and Her bal D rugs 2001年第32卷第11期a收稿日期:2000-12-21 选择大黄药材中所含的游离型蒽醌和总蒽醌作为测定的指标,分别对其样品制备方法进行了考查。
2.1 色谱条件[3]:流动相:甲醇-1%高氯酸水溶液(85∶15);检测波长:254nm;柱温:25℃;流速:1.0 mL/m in。
2.2 游离型蒽醌样品制备方法筛选:采用氯仿回流提取的方法,分别对回流时间、溶剂的用量等条件进行筛选。
2.2.1 回流时间的筛选:设计了3个水平的回流时间,水平1:30,20,20,20min;水平2:60,30,30,30 min;水平3:90,30,30,30min。
结果见表1。
选用水平1的回流时间。
2.2.2 溶剂用量筛选:设计了3个水平溶剂用量,水平1:30,20,20,20mL;水平2:40,20,20,20mL;水平3:50,25,25,25mL。
结果见表1。
根据表1结果,选用水平3溶剂用量。
试验基本确定游离型蒽醌样品制备方法,即取大黄药材粉末(通过4号筛)0.1g,精密称定,于100 mL圆底烧瓶中,第一次加入氯仿50m L,水浴回流30min,分取上清液,第二次加入氯仿25mL,水浴回流20m in,分取上清液,反复提取至上清液无色,合并,滤过,回收溶剂至干,用甲醇溶解残渣,定容于5mL量瓶中,过膜,取续滤液即得。
表1 回流时间及溶媒用量筛选结果(相当于大黄药材mg/g)回流时间溶媒用量水平123123aloe-em od in0.1310.1240.1250.1310.1340.134 rh ein0.1720.1570.1630.1720.1750.171emodin0.4030.3950.4030.4030.3980.404 chrys ophan ol 1.196 1.196 1.211 1.196 1.263 1.286 phys cion0.3560.3550.3620.3560.309 1.279totals 2.258 2.227 2.264 2.258 2.279 2.299 2.3 总蒽醌样品制备方法筛选:采用将结合型蒽苷用硫酸水解成游离型蒽醌的方法进行测定,分别对水解用硫酸的浓度、用量、水解温度、水解时间等条件进行了筛选试验。
2.3.1 水解用硫酸浓度筛选:设计了3个水平的硫酸浓度,水平1:10%;水平2:20%;水平3:30%。
结果见表2。
选用水平2硫酸浓度。
表2 水解用硫酸浓度及用量实验结果(相当于大黄药材mg/g)酸浓度酸用量水平1231234aloe-em odin 3.391 3.611 3.615 3.441 3.756 3.654 3.749 rhein 4.002 4.869 4.759 4.040 4.531 4.534 4.932 emodin 5.182 5.233 5.023 4.417 4.700 4.637 4.919 chrys oph an ol8.7819.1478.7257.3207.5847.3857.494 phys cion 2.619 2.754 2.570 2.759 2.758 2.804 2.851 totals23.97525.61424.69221.97723.32923.01423.9442.3.2 水解硫酸用量筛选:设计了4个水平的硫酸用量,水平1:1.5m L;水平2:2.5m L;水平3:3.5mL;水平4:5.0mL。
结果见表2。
根据以上结果,决定选用水平4硫酸用量。
2.3.3 水解温度筛选:设计了3个水平的水解温度,水平1:70℃;水平2:80℃;水平3:90℃。
结果见表3。
选用水平2水解温度。
表3 水解温度及时间实验结果(相当于大黄药材mg/g)水解温度水解时间水平123123aloe-emodin 3.795 4.013 3.790 3.813 3.794 3.706 rhein 4.543 5.181 4.730 4.953 4.701 5.018emodin 4.997 5.207 4.860 5.102 5.207 5.049ch rysophanol7.7728.0388.0028.2858.4788.398physcion 2.902 3.003 2.881 2.835 2.907 2.803totals24.00925.44224.26324.98825.08724.974 2.3.4 水解时间筛选:设计了3个水平的水解时间,水平1:1h;水平2:2h;水平3:3h。
结果见表3。
选用水平2水解时间。
实验基本确定总蒽醌样品制备方法,即取大黄药材粉末(通过4号筛)0.06g,称定,于100m L圆底烧瓶中,加入20%硫酸5.0mL,室温振摇5min,加入氯仿50mL,水浴加热(80℃)回流水解2h,放至室温,分取氯仿层,第二次加入氯仿20mL振摇,分取氯仿层,反复抽得至氯仿层无色,合并,加入适量无水硫酸钠脱水,滤过,用少量氯仿洗涤残渣,回收溶剂至干,用甲醇溶解残渣,定容于25m L量瓶中,过膜,取续滤液即得。
2.4 重复性试验:按照2.2和2.3项下确定的样品制备方法分别制备6份样品,结果见表4。
2.5 回收率试验:采用加样回收法,取已知含量的大黄药材粉末,分别加入一定量的对照品混合溶液依法测定回收率,结果见表4。
以上重复性试验数据说明除大黄酸RS D值偏高外,其余4种成分均符合要求,表明本法重复性良好。
加样回收率试验数据说明除大黄酸偏高外,其余・994・中草药 Chinese T r aditio na l and Her bal D rugs 2001年第32卷第11期4种成分均小于2%,表明本方法可行。
2.6 样品测定:通过上述试验决定大黄药材中游离型蒽醌和总蒽醌的含量均以芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量之和计,我们收集了9批大黄药材,根据上述实验方法,分别测定其游离型蒽醌和总蒽醌的含量,以此确定大黄药材的含量限度。
含量测定结果见表5。
根据上述9批大黄药材的测定结果,个子货(1～5)中游离型蒽醌含量在0.528～5.365mg /g 之间,总蒽醌含量在15.850～26.822m g/g 之间,饮片(6～9)中游离型蒽醌含量在4.804～7.723mg /g 之间,总蒽醌含量在15.923～18.403mg /g 之间。
表4 重复性试验和加样回收率试验结果试验项目RS D (%)aloe -emodinrhein emodin chrysoph a nolphys cion totals 重复性试验游离型蒽醌 1.38 2.680.930.680.650.56总蒽醌 1.58 3.140.230.270.850.76加样回收率试验游离型蒽醌 1.8312.01 1.320.980.760.76总蒽醌1.924.410.601.041.961.00表5 9批药材含量测定结果(mg /g )游离蒽醌总蒽醌批次aloe -em odin emodin chryso -phanol phys -cion totals aloe -emodin em odin ch ryso -ph anol p hys -cion totals 10.1320.492 1.1230.355 2.102 4.003 4.7308.383 3.16920.28520.1320.499 1.1390.360 2.130 2.762 4.9427.349 2.77317.82630.3430.929 3.1940.898 5.364 3.756 5.98012.492 4.59426.82240.0490.1720.2770.0760.574 3.5608.4618.664 2.22422.90950.0380.0990.2790.1120.528 2.684 3.4807.006 2.68015.85060.420 1.031 3.0350.887 5.373 2.398 3.6067.700 2.21915.92370.3240.976 2.6760.828 4.804 2.453 4.4247.862 2.43417.17380.565 1.303 4.540 1.3157.723 2.694 3.8839.213 2.61318.40390.4621.1783.8191.1276.5862.5403.8299.0562.48817.9133 结论3.1 在总蒽醌样品制备方法的试验中,用水浴加热,受热均匀且温度容易控制,效果较好。