第五章 种子生活力和活力测定

第五章种子生活力与活力测定

本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法

§2、种子活力测定原理及方法

第一节种子生活力测定的原理与方法

在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。

一、种子生活力概念：

种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的

生命力；

种子生活力和发芽具有不同的含义：

一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。

二、种子生活力测定的意义

1、测定休眠种子的生活力

新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。（怎样利用？）

播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。

种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。

2、快速预测种子的发芽力:

休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，

因为发芽试验所需的时间较长。如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。

而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d计算发芽率）。这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。

种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。

本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。

三、四唑测定法（GB）

(一)四唑测定法概述

1、发展简史

四唑测定法于1942年由德国kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。ISTA于1950年成立四唑测定技术委员会，1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程，主持编写《四唑测定手册》，经过多次ISTA会议讨论修改，于1984年正式公布发行。该手册汇集了650多个种属的具体测定技术，是四唑测定的权威性参考书。目前国际和国家检验规程都将其列于正式检验项目，它是测定种子生活力公认的最有效的方法。

2、四唑测定方法的特点

四唑测定是一种世界公认、省时快速、结果可靠的种子生活力

测定方法。有以下几个特点：

1）原理可靠，结果准确：主要是按胚的染色图形来判断种子的死与活，该技术已发展成熟。如果能正确使用四唑测定方法，四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3～5％。

2）不受休眠限制：利用种子内部的还原反应显色来判断种子的死与活，不受休眠限制。

3）方法简便，省时快速：所需仪器设备和物品较少（恒温箱、培养皿、刀片、镊子、放大镜和四唑药品等）。测定方法也较为简便，

一般只需6～24h就能获得结果。特别是同发芽试验相比是很快的。

4）成本低廉：由于四唑测定所需仪器、物品少和方法简便，

所以每个样品测定所花成本很低。

四唑测定也有缺陷：对种子检验员经验和技能要求较高；

结果不能提供休眠的程度。

3、适用范围：

根据1996国际种子检验规程，四唑测定适用于下列范围：（p61）(1)测定深度休眠种子；收获后需马上播种的种子；发芽缓慢的种子；要求估测发芽潜力的种子。另外，也适用于：

(2)测定发芽末期未发芽种子的生活力，特别是怀疑有休眠时。

(3)测定种子收获或加工过程中的种子损伤的原因(如热害、机械损

伤、虫蛀等)。

(4)解决发芽试验中存在的问题，如查明不正常幼苗产生的原因；

怀疑杀菌剂、种子包衣的处理效果等。

(二)、四唑测定法的原理

有生活力的种子活细胞内有脱氢酶，可与氧化还原反应指示剂：四唑（无色）反应而显色，被还原成为红色、稳定的三苯基甲腊(triphenyl formazam)。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。

除了完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，还可能出现一些部分染色的种子。说明在不同部位存在面积大小不同的坏死组织。

判断种子有无生活力，主要看胚和胚乳不染色坏死组织的部位及面积大小，而不完全取决于染色的深浅。染色的深浅可以区别健壮程度。即染色愈深，种子生活力愈旺盛。

四唑染色是一酶促反应，反应不仅受酶活性的影响，还受底物浓度、反应温度、pH等因素的影响。

(三)、四唑测定法应用的化学试剂

1、四唑

四唑盐类有多种，常用的是2，3，5—氯化三苯基四氮唑，

｛英文2，3，5—triphenyl tetrazo1ium chloride｝，缩写为TTC。（1）特性

①白色或淡黄色粉剂，易溶于水，有微毒，使用时不要接触（少接触）。

②见光易被还原成粉红色，需用棕色瓶包装，再裹一层黑纸。同样，配好的四唑溶液也应装入棕色瓶里，暗处保存，种子染色也需在暗处和弱光处进行。

（2）四唑液浓度

常用的四唑染色浓度为0.1％～1.0％(m/v)．一般来说:

切开种胚的种子可用0.1％～0.5％的四唑溶液；

整个胚、整粒种子需用1.0％的四唑溶液。

（3）pH:

四唑溶液的pH要求在6.5～7.5，若溶液的pH不在此范围，反应不能正常进行。因此，对于游离酸含量高的四唑应当用缓冲液配制。即一般国产的四唑游离酸含量高，要用缓冲液配制（进口的可直接用蒸馏水配制）。

配制方法：称取lg（或0.1g）四唑粉剂溶解于100mL磷酸缓冲液中，即配成1.0％（或0.1％）的四唑溶液；