内皮祖细胞鉴定方法

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大鼠骨髓EPC的鉴定:①EPC培养约2周后达到80% ~90%融合,以0.25 %胰酶+0.01%EDTA消化,传代至24孔板中,待细胞贴壁完全后用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定。细胞在含Dil-ac-LDL(10μg/mL)的培养液中避光孵育10 h,然后以2% 的中性甲醛固定10min,PBS液漂洗后再加FITC-UEA-1(10μg/mL)避光孵育1 h。PBS液漂洗后在荧光显微镜下观察,显示红色荧光的为ac-LDL阳性细胞,显示绿色荧光的为UEA-1阳性细胞,显示双荧光阳性(黄色)的细胞被认为是EPC,随机计数10个非重叠视野,计算双阳性细胞比例。同时以大鼠主动脉内皮细胞为阳性对照,大鼠主动脉平滑肌细胞为阴性对照。

2、流式细胞仪检测细胞表型。取培养14天的EPC细胞1×10的6次方进行流式细胞仪检测,分别检测CD34+、CD133+、vWF+、Flk-1+细胞所占的比例。

需要一定数量培养EPC过程中EPC的显微镜下照片

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