4.2酶偶联法测定酶活性

G-6-PDH
G-6-P + NAD+
NADH +H++葡萄糖酸-6-P
内脂
HK：己糖激酶
2.ALT:
ALT
L-丙氨酸＋α-酮戊二酸
L-谷氨酸＋丙酮酸
LDH
丙酮酸＋NADH＋H+
L-乳酸＋NAD +
3.AST
AST
L-天冬氨酸＋α-酮戊二酸
L-谷氨酸＋草酰乙酸
MDH
草酰乙酸＋NADH＋H +
L-苹果酸＋NAD +
MDH：苹果酸脱氢酶
谢 谢！
(2)间接偶联：当无合适的Ei直接与Ex偶联时，可加
入另一种酶来将Ex与Ei连接起来。
Ex
Ea
Ei
A
B
C
D Ea: a — assistant
Ea— 辅助酶：与指示酶联系，辅助偶联反应进行的酶。
几种临床诊断酶盒的偶联反应
1.肌酸激酶 CK
肌酸磷来自百度文库＋ADP
肌酸＋ATP
HK
ATP＋葡萄糖
G-6-P+ ADP
使用最频繁的方法
Ex
Ei
S
Px
Pi
指示酶(Ei):常用脱氢类,如:LDH
酶偶联的连续监测法的偶 联方式：
(1)直接偶联：待测酶(Ex)+指示酶(Ei)
Ex
Ei
A
B
C Ei: i — indicator
特点：①A、B无法直接测； ②需用Ei来催化→C，C可监测,(Ei— 指示酶) 指示酶定义：能提供直接监测的产物，起指示 偶联反应作用的酶(常为脱氢酶)
第四章 酶学测定技术 酶偶联法测定酶活性 彭剑雄 中南大学湘雅医学院医学检验系
间接连续监测法：
目前，大部分酶都无法直接测定，因为需S与P间理化 特性有显著差异，方可直接连续监测
(1)经典间接法：要求：显色剂对酶活性无影响 E
S → P + 显色剂 → 呈色产物 连续检测
(2)酶偶联方法：如：与指示酶偶联： 已成为应用最广，