组培实验报告

普通生物学实验报告

一、实验名称：烟草叶片的组织培养

二、实验原理：

1.植物细胞具有全能性。植物组织中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，会发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞，并生长发育为完整的植株。

2.愈伤组织是指一个离体的细胞、组织或器官，通过脱分化不断分裂，增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了结构无序的细胞团。

3.培养基中生长素、细胞分裂素浓度比不同，可以诱导烟草叶片生根或生芽。

三、实验材料及用具：

1.材料：无菌烟草叶片

2.试剂：MS培养基母液、0.5mol/L NaOH、1mol/L HCl、0.1mg/ml NAA、0.1mg/ml 6-BA、0.1mg/ml 2,4-D

3.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、30ml烧杯、500ml烧杯、药匙、玻璃棒、100ml培养瓶、高压橡皮筋、试纸（pH5.4-7)、报纸等

四、实验步骤：

(一）诱导培养基的配制

①向烧杯中加入15mlMS母液，加入100ml蒸馏水

②称量4.5g蔗糖，加入烧杯

③用蒸馏水粗略定容至150ml

④分瓶，每瓶30ml

⑤加植物生长调节剂

对照组（t0) 无

诱导生根组（t1) 0.03ml 6-BA+0.15ml NAA

诱导生芽组 (t2) 0.15ml 6-BA+0.03ml NAA

诱导生愈伤组(t3) 0.03ml 2,4-D

⑥调节pH至5.8

⑦加琼脂，每瓶0.24g

（二）灭菌

1.培养基、剪子、镊子、平皿需在120℃的高压灭菌锅中灭菌15分钟

2.接种前打开无菌间和超净台紫外灯，照射30分钟

3.用肥皂清洗手和手腕

4.进入无菌间，先用70%酒精喷手。关掉无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，关掉超净台上的紫外灯

（三）接种

1.坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手和超净台面

2.待手上的酒精干了，点燃酒精灯

3.将培养瓶的盖子旋松，但不要打开，放到无菌风道侧面备用

4.将镊子，剪子在酒精灯外焰上灼烧，冷却后，剪取叶片约1cm2。将剪好的叶片均匀铺在培养基上，每瓶放入三片，间隔相等

5.盖好瓶盖，不必太紧，瓶上做好标记

（四）培养

将培养瓶放入培养箱中，培养四周，25℃，湿度70%-80%，光照16h,暗8h

五、实验结果：

时间

t0t1t2t3

组别

培养前

培养4周后

六、实验讨论：

1.蔗糖既是碳源，又起到维持渗透压的作用。

2.调节pH应准确。若pH过低，会导致培养基不凝；若pH过高，则会导致培养基过硬。

3.琼脂粉是固化剂，支持物。它在冷水中并不溶解，在高温下自然会溶解，所以加入后不必为了使之溶解而搅拌。

4.无菌操作时不要讲话，以免污染。

5.用酒精擦手后，要等其彻底挥发后在点燃酒精灯，以免火焰伤手。

6.剪取叶片时要尽量避开主叶脉，并保证叶片的四边都是剪出的伤

口。

7.将叶片铺在培养基上时，要注意叶片下表面与培养基接触，不要弄反。

8.无菌操作的整个过程中，叶片都不能接触双手和台面，镊子、剪子也要放在平皿上，若掉落在台面上，要再次灼烧，以保证操作的无菌性。