液相色谱仪操作规程及参数检验操作方法

波长重复性应不大于1nm。 3.2.2 设备及试剂 f) 色谱数据工作站一台 g) 输液泵一台 h) 二通一个； i) 5mL 注射器一支； j) 标物:紫外波长标准溶液（标准波长为 235nm、257nm、313nm、350nm） k) 标物:紫外波长标准溶液空白液:0.05mol/L 硫酸溶液 3.2.3 试验程序
将检测器和电脑相连，开机预热稳定后，在每设定波长处用1mL注射器向与检测池相连 的二通的入口处注入紫外波长标准溶液（充满检测池），打开软件波长扫描程序,直接扫描 紫外波长标准溶液光谱图(注意扣除空白),谱峰最高或最低时的波长值与标准溶液特征波长 之差即为波长示值误差。 3.2 波长重复性 3.2.1 要求
液相色谱仪出厂检验操作规程
目的:保证产品质量,保证出厂产品为 100%合格品。
适用范围：生产部质检员和品管部
操作方法：
1.外观检查 a) 外观整洁，外表应光洁平整、字迹清晰，表面涂覆色泽均匀、不应有明显划伤、露 底、裂纹、起泡等现象。 b) 仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌。 出厂的仪器还应有制造计量器具许可证标志。 (c)仪器的电源线、信号线等插接紧密，各调节旋钮、按键、开关等工作正常，无松动； 指示灯、显示器清晰完整。 (d)整机显示屏指示灯,屏幕亮度一致 （e）初始参数设置正确 输液泵参数设置：流速：1.0mL/min；最大压力:6000psi；最小压力:0psi； System:地址:2或3；控制模式:0:remote(等度配N2000可设为1:local)其他参数默认。 检测器参数设置:波长:254nm；链接模式：0；控制模式：0:remote(等度配N2000可设为
3
2.4.3 试验程序
将紫外检测器波长设定在 254nm.泵出口适当加一背压(8MPa ±2MPa)并通过两通连接到
检测器.色谱数据工作站(或记录仪)与检测器信号输出端连接,按表 3 设置梯度参数,梯度设
置示意图见图 1.输液泵流量设为 1.0mL/min,待仪器稳定后,开始采集数据,得到梯度曲线.
t ——收集流动相的时间，单位为分钟（min）；
Fm ——同一设定流量三次测量的平均值，单位为毫升每分钟（mL/min）； FS——流量设定值，单位为毫升每分钟(mL/min)； Fmax——同一设定流量三次测量的最大值，单位为毫升每分钟（mL/min）； Fmin——同一设定流量三次测量的最小值，单位为毫升每分钟（mL/min）。
1:local)；地址：1。 2.输液泵 2.1 输液泵恒压测试 2.1.1 要求
输液泵连接恒压测试色谱柱，压力恒定在4000psi左右3小时，无漏液。 2.1.2 设备及试剂
包括： a) 耐压测试色谱柱一根； b) 秒表一块：分度值不大于 0.1s； c) 耐压测试流动相：20%甲醇水溶液。 2.1.3 试验程序 将输液泵通过管路连接色谱柱，调节合适流量（0.1～5ml/min)，使压力在4000psi左右， 测试过程中观察有无无漏液情况。 2.2 密封性 2.2.1 要求:
输液泵流路截止，压力达到上限值的 90%(5400psi)，输液泵停止运行，保持 10min，压 力下降应不大于 5MPa(约 710psi),并且无漏液。
1
2.2.2 设备及试剂
包括： a) 堵头一个； b) 秒表一块：分度值不大于 0.1s； c) 纯净水
2.2.3 试验程序
将输液泵通过三通，输液泵最高压力设定在压力上限值90%处，以纯净水为流动相，待 系统排出气体，流量设为0.1mL/min，启动输液泵，用堵头堵住泵出口处，压力将逐渐上升， 达到输液泵压力上限值90%时，输液泵停止运行，记录此时压力表示值，保持10min后，记录 压力表示值。测试过程中观察有无无漏液情况。
式中：
CL=
2
´
Hd H ´ 20
´
c
´V
CL——最小检测浓度，单位为克每毫升（g/mL）；
............................................................... (3)
SS——流量输出误差％； SR——流量稳定性％； Fm——Fm=(W2-W1)/(ρ∙t)，流量实测值，单位为毫升每分钟（mL/min）； W1 ——称量瓶重量，单位为克（g）； W2 ——称量瓶+流动相重量，单位为克（g）； ρ ——试验温度下流动相的密度，单位为克每毫升(g/mL)；
色谱数据工作站一台 3.3.3 试验程序 检测器波长为254nm，检测器为空池（充满空气），响应时间（T90) 不大于1.0s。开机预热 后，记录基线1h，取1h内平行包络线的中心线的起点与终点的差值为检测器基线漂移（如图 所示）。选取所记录基线中噪声较大的5min作为计算噪声的基线，以为1min为界画平行包络 线（如图所示），按照下列公式计算短期基线噪声。五个平行包络线宽度的平均值，作为检 测器短期基线噪声。
利用色谱数据工作站波长扫描功能，直接扫描紫外波长标准溶液光谱图，连续扫描三次， 选取对应波长三次中最大值与最小值之差为波长重复性误差。 3.3 静态基线漂移及静态短期基线噪声 3.3.1 要求 静态基线漂移应不大于 5×10-4AU/h；
6
静态短期基线噪声应不大于 3×10-5AU。 3.3.2 设备
8
将输液泵与检测器及色谱数据工作站连接，泵出口适当加一背压（8MPa±2MPa），并连 接到检测器，以 100%甲醇为流动相，流量设定为 1.0ml/min,其他同静态基线漂移及静 态短期基线噪声。
3.5 最小检测浓度
3.5.1 要求
最小检测浓度应不大于4×10-8g/ml。
3.5.2 设备及试剂
注：注：流量的设定可根据输液泵的流量范围而定。流量测量顺序可以任意选择。
表 2 泵流量试验收集时间要求
流量设定值 mL/min ≤1.0
1.0～10.0 ≥10.0
收集流动相时间 min 10 5 3
2.4 梯度误差
2.4.1 要求:
梯度误差不超过±2%
2.4.2 设备及试剂:
包括: a) 紫外检测器一台; b) 色谱数据工作站 c) 背压装置一个：在设定流量下可提供 8MPa±2MPa 的背压； d) 两通一个； e) 流动相:A 通道溶液:二次蒸馏水;B 通道溶液:0.1%丙酮/水溶液.
包括： a) 输液泵一台; b) 色谱数据工作站 c) 带定量环(10μL 或 20μL)进样阀一个; d) 50μL 注射器一支 e) C18 色谱柱一支：4.6mm´250mm,5μm，理论塔板数不小于 50000N/m; f) 标物：1.0×10-7g/mL 萘/甲醇标准溶液； g) 流动相：HPLC 级甲醇 100%。
个流量下各测试三次。分别按公式（2）、公式（3）计算流量输出误差及稳定性。
SS= Fm - Fs ×100% Fs
...............................................................(2)
式中：
SR= F max - F min ×100% Fm
2.3.2 设备及试剂
包括： a) 秒表一块：分度值不大于 0.1s； b) 分析天平一台：根据测试流量大小选择合适载荷，测试质量尽量在天平载荷的 60% 左右，准确度不低于 级,实际标尺分度值不大于 1mg； c) 背压装置一个：在设定流量下可提供适当的背压； d) 25mL 的容量瓶三个； e) 纯净水。
3.5.3 试验程序
连接仪器系统（包括泵、检测器、色谱数据工作站、色谱柱、进样阀等配件），检测器
波长设定为 254nm，检测器灵敏度设定为 1.0AU，泵流量设定为 1.0mL/min，运行系统，待
检测器示值稳定后从进样阀入口注入 1.0×10-7g/mL 的萘/甲醇溶液 20μL，采集色谱图，记
录色谱图中萘-甲醇溶液的峰高和短期基线噪声。按公式（4）计算最小检测浓度：
基线漂移计算示意图
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短期基线噪声计算示意图
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å Nd = yi / n i=1
式中： Nd—— 短期基线噪声，单位为AU; Yi——第i个平行包络线基线宽度，单位为AU; n——平行包络线个数（此处为n=5）。 3.4 动态基线漂移及动态短期基线噪声 3.4.1 要求 静态基线漂移应不大于 1×10-3AU/h； 静态短期基线噪声应不大于 5×10-5AU。 3.4.2 设备及试剂 包括： a) 输液泵一台； b) 色谱数据工作站 c) 背压装置一个：在设定流量下可提供 8MPa±2MPa 的背压；（可用色谱柱替代） d) 两通一个； e) 流动相:甲醇 3.4.3 试验程序
清洗溶液能顺畅流出 2.6.2 测试程序
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将清洗装置管路连接好，进液管放在清洗溶液中，注射器连接到出口管，将空气抽净， 液体顺畅流出，泵头四周无液体渗出，
3 检测器 3.1. 波长示值误差 3.1.1 要求
波长示值误差应不超过±2nm。 3.1.2 设备及试剂
包括： a) 色谱数据工作站 b) 二通一个； c) 5mL 注射器一支； d) 标物:紫外波长标准溶液（标准波长为 235nm、257nm、313nm、350nm） e) 标物:紫外波长标准溶液空白液:0.05mol/L 硫酸溶液 3.1.3 试验程序
测量各种溶液配比时的输出信号值 ,用式(4)计算各种溶液配比时的梯度误差 ,重复两次,取
其中最大者为输液泵梯度误差,梯度误差计算示意图见图 2.
表 3 梯度参数设置
序号
时间
A 通道%
B 通道%
1
0
100
0
2
10
100
0
3
15
80
20
4
25
80
20
5
30
80
20
6
35
60
40
7
45
60
40
8
50
40
60
9
60
40
60
10
65
20
80
Байду номын сангаас11
75
20
80
12
80
0
100
13
90
0
100
14
91
100
0
15
100
100
0
梯度误差的计算
Tci
=
Lti
- Vi -VA VB -VA
´100%
式中: Tci 第 i 段梯度误差%,i=1,2,3,4; Lti 第 i 段设定梯度值%,i=1,2,3,4; VA A 通道流动相 100%时输出信号值; VB B 通道流动相 100%时输出信号值; Vi 第 i 段梯度输出信号值,i=1,2,3,4.
按公式（1）计算压力下降值：
Dp = p1 - p2
........................................................ (1)
式中： △p —— 压力下降值，单位为兆帕（MPa）； p1 —— 达到上限值90%时的压力表示值，单位为兆帕（MPa）； p2 —— 停泵10min后压力表示值，单位为兆帕（MPa）。
2
2.3.3 试验程序
用仪器专用管路连接输液泵的出口、入口，出口适当加一背压，以纯净水为流动相，将 数字温度计探针插入流动相内，测量此时流动相的试验温度。设定合适流量，待输液泵运行
稳定后，按表 1 分别设定流量，在流动相排出口用事先清洗并称重过的称量瓶收集流动相，
同时用秒表计时，待达到表 2 规定的收集时间后停止收集流动相，并按下秒表停止计时。每
2.3 流量输出误差及稳定性
2.3.1 要求:
泵流量输出误差及稳定性见表1：
表 1 泵流量输出误差、稳定性
流量设定值 mL/min 0.1 1.0 2.0 5.0 10.0 30.0 50.0
流量输出误差 %
±2 ±1 ±2 ±3 ±3 ±5 ±5
流量稳定性 %
≤1.5 ≤1.0 ≤1.5 ≤1.5 ≤1.5 ≤3 ≤3
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2.5 压力显示 2.5.1 要求: 输液泵压力显示与精密压力表差值小于±0.5MPa 2.5.2 设备及试剂: 包括: a) 需经过较准精密压力表一台 b) 堵头一个; c) 二通一个; d) 流动相:A 二次蒸馏水; e) 管路; 2.5.2 试验程序 开启输液泵,查看压力显示是否为 0,若为不 0,将压力调为 0,将输液泵出口管路与二通一接 口相接,精密压力表与二通另一接口相接,开启泵,以 5mL/min 流量运行,直至压力表读书开 始上升至 1MPa 左右(压力表管路体积较大),将流速调成 0.1mL/min,升至 5MPa 时调节压力微 调装置,使压力显示与精密压力表一致。 2.6 清洗装置测试 2.6.1 要求