苦杏仁苷提取工艺优化

苦杏仁苷溶剂提取工艺优化
西安源森生物公司苦杏仁苷提取自苦杏仁，其活性成分是一种天然产生的氰化物，是人类的代谢产物，只能在癌细胞中发挥作用，因此常被用作抗癌辅助药物，在医学领域具有十分广阔的发展空间。

一般企业的苦杏仁苷提取方法为柱色谱分析法和溶剂提取法，这两种方法分别具有洗脱剂耗费量大、成本高和产物纯度较低、工艺路线长等缺点。

本次实验，西安源森生物实验室针对以上问题采用溶剂提取法进行提取，制订了较短的工艺路线，并且采用正交试验将工艺条件进行优化，确保所得苦杏仁苷纯度在95%以上。

一、苦杏仁苷溶剂提取仪器与试药
HP1100型高效液相色谱仪及色谱工作站；
TG328B型电光分析天平；
对照品；
苦杏仁（陕西产）。

二、方苦杏仁苷溶剂提取方法与结果
（一）苦杏仁苷的提取工艺
1. 取苦杏仁1kg→除杂、粉碎后→加去离子水5000ml煮沸1h→浸提液用乙醚除脂→于95℃水浴下浓缩的密度为1.13g/ml的浸膏11
2.3g。

2. 精密称取浸膏适量（约11.3g）→移至三颈瓶→加入95%乙醇适量进行萃取→完毕后萃取液冷至室温→加入定量的乙醚→移至锥形瓶→静置24h。

3. 过滤→滤纸与结晶于60℃干燥2h→得结晶。

（二）苦杏仁苷含量的HPLC检测法
色谱条件：色谱柱（4.6mmx200mm，5μm）；
流动相甲醇-水（74：26）；
柱温1.2min/ml；
检测波长252nm。

标准曲线：精密称取苦杏仁苷
对照品23.7mg置50ml量瓶中，用甲醇溶解定容。

精密量取2、4、6、8ml，分别置于各10ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，得系列标准溶液。

依次用HPLC进行测定，以浓度（C）为横坐标，色谱峰面积（A）为纵坐标，求得回归方程为：A=129.8601C-25.6334，r=0.9997。

以上结果表明浓度在0.1~0.5mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

（三）苦杏仁苷提取收率的计算
将结晶连同滤纸一起转移到烧杯里，用甲醇少量多次洗涤滤纸，将溶液和洗液完全转移至25ml量瓶中，以甲醇定容，稀释50倍后测定含量，计算提取收率：
（四）苦杏仁苷萃取正交试验及结果
根据萃取和结晶原理，本试验选取萃取时间（A）、萃取温度（B）、萃取剂用量（C）、结晶液（乙醇-乙醚溶液）配比（D）为影响因素，各因素取3水平，采用L9（34）正交表设计实验，以提取收率为考察指标，对萃取、结晶的工艺条件进行优化，结果见表1。

由表1可见，各因素对提取效果的影响程度由小到大依次为B< D< C< A，说明A、C两项因素对提取收率有显著影响，各因素的优化组合为A3B2C1D1，即萃取时间30min，萃取温度为60℃，萃取剂用量40ml，乙醇-乙醚比例为1：0.3时萃取率为最高。

（五）工艺验证及结晶纯度
取苦杏仁100g照上述优化工艺条件进行萃取，得到结晶3.10g，提取收率为3.1%。

精密称取结晶21.75mg置50ml量瓶中，用甲醇定容，HPLC法测得该溶液的浓度为0.42mg/ml，则产物纯度=1量/产物量X100%=（50X0.42）/21.75X100%=96.5%。

三、西安源森生物实验室溶剂提取苦杏仁苷实验结果讨论
苦杏仁苷提取时间的延长和萃取剂增加到某一节点会使提取收率逐渐减小，结晶较难析出，因此通过正交试验法，西安源森生物将本次实验的最佳提取条件控制在30min，萃取剂用量为40ml。

而乙醚用量对苦杏仁苷的提取收率影响不大，这说明乙醚的加入只起到诱导晶种的作用。