金银花检验标准操作规程

原药材检验标准操作规程
目的：建立一个中药饮片原药材检验标准操作程序，确保检验结果准确可靠。

适用范围：中药原药材。

责任人：质量保证部主任、质量控制部主任、化验员。

标准来源：《中华人民共和国药典》2010年版一部、《安徽省中药饮片炮制规范》。

内容：
1、性状
取本品适量，放入白瓷盘中，用眼观察，可见以下性状特征：
本品呈棒状，上粗下细，略弯曲，长2~3cm，上部直径约3mm，下部直径约1.5mm。

表面黄白色或绿白色（贮久色渐深），密被短柔毛。

偶见叶状苞片花萼绿色，先端5裂，裂片有毛，长约2mm。

开放者花冠筒状，先端二唇形；雄蕊5，附于筒壁，黄色；雌蕊1，子房无毛。

气清香，味淡、微苦。

2、鉴别
主要使用仪器：电子分析天平、紫外光灯等。

2.1薄层鉴别
取本品粉末0.2g，加甲醇5ml，放置12小时，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液10~20μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：
2.5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3、检查
主要使用仪器：电子分析天平、马弗炉、坩埚等。

3.1水分
取供试品适量，适当粉碎，精密称定，置500ml的短颈圆底烧瓶中，加甲苯约200ml，并加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满水分测定管的狭细部分。

将烧瓶置电热套中缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。

待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在测定管的管壁上，可用蘸有甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。

检读水量，按下式计算即得。

V
供试品中的含水量（%）＝────────×100％
W
W 样品重（g）
V 水体积（ml）
本品含水量不得过12.0%。

3.2总灰分
取供试品适量，粉碎使能通过二号筛混合均匀后，取3～5g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500~600℃，使完全灰化并至恒重。

根据残渣重量，按下式计算即得。

W2－W1
供试品中总灰分的含量（％）＝────────×100％
W
W1坩埚重（g）
W 样品重（g）
W2炽灼残渣与坩埚重之和（g）
本品总灰分不得过10.0％。

3.3酸不溶灰分
取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。

滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。

根据残渣重量，按下式计算即得。

W2－W1
供试品中酸不溶灰分的含量（％）＝────────×100％
W
W1坩埚重（g）
W 样品重（g）
W2炽灼后残渣与坩埚重之和（g）
本品酸不溶灰分不得过3.0％。

3.4 重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（《中华人民共和国药典》附录ⅨB原子吸收分光光度法）测定。

3.4.1铅的测定（石墨炉法）
3.4.1.1测定条件参考条件：波长283.3nm，干燥温度100～120℃，持续20秒；灰化温度400～750℃，持续20～25秒；原子化温度1700～2100℃，持续4～5秒；背景校正为氘灯或塞曼效应。

3.4.1.2铅标准储备液的制备精密量取铅单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含铅（Pb）1µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。

3.4.1.3标准曲线的制备分别精密量取铅标准储备液适量，用2%硝酸溶液制成每1ml分别含铅0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。

分别精密量取1ml，精密加含1%磷酸二氢铵和0.2硝酸镁的溶液1ml，混匀，精密吸取20µl 注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3.4.1.4供试品溶液的制备取供试品粗粉1g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸－高氯酸（4：1）混合溶液5～10ml，混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜。

置电热板上加热消解，保持微沸，若变棕黑色，再加硝酸－高氯酸（4：1）混合溶液适量，持续加热至溶液澄明后升高湿度，继续加热至冒浓烟，直至白烟散尽，消解液呈无色透明或略带黄色，放冷，转入50ml量瓶中，用2%硝酸溶液洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

同法同时制备试剂空白溶液。

3.4.1.5测定法精密量取空白溶液与供试品溶液各1ml，精密加含1%磷酸二氢铵和0.2%硝酸镁的溶液1ml，混匀，精密吸取10～20µl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中铅（Ｐb）的含量，计算，即得。

C×V
供试品中铅的含量（％）＝──────×100％
G×109
C 供试品的浓度（mol/L）
V 供试品的体积（ml）
G 供试品的重量（g）
本品含铅不得过百万分之五。

3.4.2镉的测定（石墨炉法）
3.4.2.1测定条件参考条件：波长228.8nm，干燥温度100～120℃，持续20秒；灰化温度300～500℃，持续20～25秒；原子化温度1500～1900℃，持续4～5秒；背景校正为氘灯或塞曼效应。

3.4.2.2镉标准储备液的制备精密量取镉单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含镉（Cd）0.4µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。

3.4.2.3标准曲线的制备分别精密量取镉标准储备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含镉0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。

分别精密吸取10µl，注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3.4.2.4供试品溶液的制备同铅测定项下供试品溶液的制备。

3.4.2.5测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液各10～20µl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度（若供试品有干扰，可分别精密量取标准溶液、空白
溶液和供试品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氢铵和0.2％硝酸镁的溶液1ml，混匀，依法测定），从标准曲线上读出供试品溶液中镉（Cd)的含量，计算，即得。

C×V
供试品中镉的含量（％）＝──────×100％
G×109
C 供试品的浓度（mol/L）
V 供试品的体积（ml）
G 供试品的重量（g）
本品含镉不得过千万分之三。

3.4.3砷的测定（氢化物法）
3.4.3.1测定条件采用适宜的氢化物发生装置，以含1％硼氢化钠和0.3％氢氧化钠溶液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1→100）为载液，氮气为载气，检测波长为193.7nm，背景校正为氘灯或塞曼效应。

3.4.3.2砷标准储备液的制备精密量取砷单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含砷（As）1µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。

3.4.3.3标准曲线的制备分别精密量取砷标准储备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含镉0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。

分别精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml，摇匀，加10%抗坏血酸溶液（临用前配制）1ml，摇匀，用盐酸溶液（20→100）稀释至刻度，摇匀，密塞，置80℃水浴中加热3分钟，取出，放冷。

取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3.4.3.4供试品溶液的制备同铅测定项下供试品溶液的制备中的A法或B 法制备。

3.4.3.5测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液各10ml照标准曲线的制备项下，自“加25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml”起，依法测定。

从标准曲线上读出供试品溶液中砷（As）的含量，计算，即得。

C×V
供试品中砷的含量（％）＝──────×100％
G×109
C 供试品的浓度（mol/L）
V 供试品的体积（ml）
G 供试品的重量（g）
本品含砷不得过百万分之二。

3.4.4汞的测定（冷吸收法）
3.4.4.1测定条件采用适宜的氢化物发生装置，以含0.5%硼氢化钠和0.1%氢氧化钠的溶液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1→100）为载液，氮气为载气，检测波长为253.6nm，背景校正为氘灯或塞曼效应。

3.4.4.2汞标准储备液的制备精密量取汞单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含汞（Hg）1µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。

3.4.4.3标准曲线的制备分别精密量取汞标准储备液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，加4%硫酸溶液40ml、5%高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，用4%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3.4.4.4供试品溶液的制备取供试品粗粉1g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸-高氯酸（4：1）混合溶液5～10ml，混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜，置电热板上，于120～140℃加热消解4～8小时（必要时延长消解时间，至消解完全），放冷，加4%硫酸溶液适量、5%高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入25ml量瓶中，用4%硫酸溶液洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得，同法同时制备试剂空白溶液。

3.4.4.5测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线制备项下的方法测定，从标准曲线上读出供试品溶液中汞（Hg）的含量，计算，即得。

C×V
供试品中汞的含量（％）＝──────×100％
G×106
C 供试品的浓度（mol/L）
V 供试品的体积（ml）
G 供试品的重量（g）
本品含汞不得过千万分之二。

3.4.5 铜的测定（火焰法）
3.4.5.1测定条件检测波长为324.7nm，采用空气-乙炔火焰，必要时选择氘灯或塞曼效应进行背景校正。

3.4.5.2铜标准储备液的制备精密量取铜单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含铜（Cu）10µg的溶液，即得（0～5℃贮存）。

3.4.5.3标准曲线的制备分别精密量取铜标准储备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含铜0µg、0.05µg、0.2µg、0.4µg、0.5µg、0.8µg的溶液。

依次喷入火焰，测定吸光度，以吸光度为坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3.4.5.4供试品溶液的制备同铅测定项下供试品溶液的制备。

3.4.5.5测定法精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线的制备项下的方法测定，从标准曲线上读出供试品溶液中铜（Cu）的含量，计算，即得。

C×V
供试品中铜的含量（％）＝────×100％
G×106
C 供试品的浓度（mol/L）
V 供试品的体积（ml）
G 供试品的重量（g）
本品含铜不得过百万分之二十。

3.5二氧化硫残留量
按中国药典2010 年版第一增补本附录二氧化硫残留量测定法测定，取本品细粉10g，精密称定，置于两颈圆底烧瓶中，加水300ml—400 ml（应加水至没过氮气导气管的下端），取6mol/L盐酸10ml加入带刻度的分液漏斗中连接分液漏斗，并导入氮气至瓶底，。

锥形瓶内加水125ml和淀粉指示液1 ml作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌。

连接回流冷凝管，在冷凝管上部连接导气管，
将导气管插入250ml锥形瓶底部，开通氮气，调节氮气流量为0.2L/min，打开带刻度的分液漏斗的活塞，使盐酸流入烧瓶。

加热圆底烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸约3分钟后开始用0.01mol/l, 的碘滴定液滴定，吸收液置于磁力搅拌器上不断搅拌，至吸收液显蓝色或蓝紫色，持续30秒不消失，并将滴定的结果用空白校正，每1毫升的碘滴定液(0.01mol/l)相当于0.6406mg的二氧化硫。

本品二氧化硫量不得过150mg/kg。

4、含量测定
主要使用仪器：电子分析天平、高效液相色谱仪等。

4.1绿原酸照高效液相色谱法(《中华人民共和国药典》附录ⅥD)测定。

4.1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相；检测波长为327nm。

理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。

4.1.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。

4.1.3供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

4.1.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品以干燥品按下式计算即得供试品的含量：
A x×C R×V x
供试品的含量（％）＝────────——×100％
A R×G×（1－W）×106
A x 供试品的峰面积或峰高。

V x 供试品的体积(ml)
C R 对照品的浓度
A R 对照品的峰面积或峰高
G 供试品的重量(g)
W 供试品的含水量(%)
本品含绿原酸(C16H18O9)不得少于1.5%。

4.2木犀草苷照高效液相色谱法(《中华人民共和国药典》附录ⅥD)测定。

4.2.1色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm,5μm)；以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸溶液为流动相B，按下表程序梯度洗脱；检测波长为350 nm。

理论板数按木犀草苷峰计算应不低于2000。

时间（分钟）流动相A（％）流动相B（％）
0～30 10 →30 90→70
4.2.2对照品溶液的制备精密称取木犀草苷对照品适量，加70%乙醇制成每1ml含40µg的溶液，即得。

4.2.3
供试品溶液的制备取本品细粉（过四号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，称定重量, 超声处理（功率250W，频率35KHz）1小时，放冷, 再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液10ml，回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

4.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品以干燥品按下式计算即得：
A x×C R×V x
供试品的含量（％）＝────────——×100％
A R×G×（1－W）×106
A x 供试品的峰面积或峰高。

V x 供试品的体积(ml)
C R 对照品的浓度
A R 对照品的峰面积或峰高
G 供试品的重量(g)
W 供试品的含水量(%)
本品含木犀草苷(C21H20O11)不得少于0.050%。