免疫荧光法检测抗体
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免疫荧光法检测抗体
所需试剂
·细胞固定液（50ml）
48 ml PBS
2 ml 多聚甲醛
·细胞透化液（50ml）
49.9 ml PBS
0.1 ml Trion X-100
·封闭液
3% BSA，用1x PBS
步骤
1、培养XXX细胞，达到一定密度后，消化，吹散，铺片。
2、将玻璃盖玻片放到6孔板孔内，将上述吹散的细胞滴到玻片上。
3、37＇C培养一晚，待细胞长到70-80%密度。
4、1 ml枪吸去细胞培养基，加2ml PBS清洗，放入摇床振荡，视细胞密度适度，调整振荡速度。5 min/次x 3次。
5、加入固定液2 ml/孔，室温孵育20 min。
6、PBS 洗三次，同上。
7、加入透化液2 ml/孔，室温5min。
8、1x PBS清洗3次，10 min/次，2 ml/孔。
9、加入封闭液，3 ml/孔，37＇Ｃ静置30 min。
10、PBS清洗3次，10 min/次。
11、一抗稀释1-2 ml/孔，空白（BSA代替），阴性对照（正常鼠血清）。
12、Over night，4＇Ｃ。
13、PBST清洗三次，5 min/次。
14、羊抗鼠FITC标记二抗用PBST稀释1:150倍。1-2 ml/孔，室温静置2h。
15、PBST洗三次，5 min/次。
16、Hochest + PBST 1:2000稀释，1-2 ml/孔，室温15 min。
17、PBST洗三次，5 min/次。
18、80%甘油封片。
19、观察，拍片。