脱毒苗培育

用的有BA、KT，前者用于油菜、豌豆、菜心等蔬菜
快繁，后者多用于莴苣。
生长素类物质如IAA、IBA、NAA、2，4-D等具有促进
新梢生长的显著作用，并可诱导外植体产生愈伤组织和生 根。往往低浓度的生长素与细胞分裂素配合可以达到促进 芽增殖，提高繁殖效果的作用。 百合 MS+BA 0.5~1.0mg/L+NAA 0.5mg/L
脱毒苗培育
一、病毒病对作物的危害
无性繁殖作物一旦感染病毒，代代相传，体内不断积累， 严重影响植株生育。病毒病不能采用杀菌剂和抗生素防治， 生产上尚无法根治。
蕙兰嵌纹病毒病
一串红病毒病
Cymbidium Mosaic Virus
苹果花叶病毒 Apple mosaic virus
脱毒苗指通过物理、化学、生物技术等方法去除已知某些特定 病毒的苗木。 （1）脱毒苗只是相对而言，许多植株含有多种已知病毒及尚未 鉴定的未知病毒，通过茎尖培养的幼苗，经过鉴定只能说出去了已 知的主要病毒，因此称之为“无特定病毒苗”更为合理。
杂。
（四）酶联免疫测定法（ELISA）
将抗原与抗体的免疫反应和酶的高效催化作用结合起来，形成一
种酶标记的免疫复合物，结合在该复合物上的酶遇到相应的底物时， 催化无色的底物产生水解形成有色产物，从而可以用肉眼观察或用比
色定性、定量判断结果。
0.5~1cm长的茎尖或整个芽；若进行茎尖分生组织脱毒培养，
外植体应该尽量小些，通常在解剖镜下剥掉细叶及叶原基， 将生长点暴露，然后切取0.1~1mm长的部分作为培养材料。
3. 接种与培养
以MS培养基为基本培养基，White、B5、Morel
等培养基也常用于茎尖培养，蔗糖浓度一般为3%，
过高或过Baidu Nhomakorabea会抑制生长，应提高K+与NH4+含量，促进 茎尖生长。 细胞分裂素可促进细胞分裂和分化，诱导不定 芽形成，有助于解除顶端优势，促进腋芽萌发。常
在维管系统，病毒在细胞间移动的另一途径是通过胞间连丝，但是
速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。 在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制。
在分生组织中病毒钝化系统比其它区域都具有更高的活性，因而分
生组织不受侵染。 在茎尖中存在高水平的内源生长素，可以抑制病毒的增殖。
2. 方法
（2）脱毒苗并不具有病毒病抗性，在今后种苗繁育过程中有可
能重新感染病毒病。
马铃薯脱毒苗
二、脱毒苗培育方法
（一）热处理脱毒 1. 原理：病毒受热以后不稳定性，使病毒钝化，失去活 性，高温可以延缓病毒扩散速度和抑制其增殖。 2. 方法：热水浸泡---接穗在50℃热水中浸泡数分钟或 数小时。
高温空气处理---旺盛生长植物在33~40℃条件下生长发
植物叶片上，5min后用清水冲洗叶面，将接种 植物放在防虫罩内，20~25℃条件下培养数天至 数周后观察症状。
（二）电镜显微检测法
直接观察病毒微粒的存在与否，以及病毒的大小、形态
结构和种类，可以显示细胞与组织中病毒的精确定位。
TMV杆状病毒
（三）抗血清鉴定法
植物病毒也是一种抗原，能引起动物产生抗 体，由于不同病毒产生的抗血清（含有抗体的血清） 都具有特异性，用特定病毒的抗血清拉鉴定病毒具 有高度的专一性，但是制备抗原和免疫过程比较复
育，热处理之后立即把茎尖切下来嫁接到无病砧木上。 3. 局限性：只对球状、线状病毒有效，对杆状病毒不 起作用。
（二）茎尖培养脱毒
1. 原理
病毒在植物体内的分布是不均匀的。老叶片及成熟的组织和器官病 毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织或器官病毒含量较低，生长 点（0.1～1.0 mm区域）则几乎不含或含病毒很少。 在植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存
指示植物要求：常年栽培，较长时间内保持对病毒敏感性，易于接 种。 常见的指示植物有苋色藜、千日红和多种烟草。
千日红 Gomphrena globosa
烟草 Nicotiana tabacum
方法：从待测植株上取1~3g幼叶，加入少 量pH7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液，研成匀浆，吸
取少量涂抹在500~600目金刚砂擦伤表皮的指示
培养，愈合成为完整的植株。
（五）愈伤组织培养脱毒 （六）抗病毒药剂脱毒---抗病毒醚
三、脱毒苗鉴定方法
（一）指示植物法 利用病毒在其他植物上出现的症状特征，作为鉴定病毒种类的标准， 这种专用于产生症状的寄主植物称为指示植物。 指示植物分类：（1）接种后产生系统症状，并扩展到非接种部位；
（2）只在接种部位产生局部病斑、坏死或褪绿环状病斑。
苹果 MS+BA 0.5~1.0mg/L+GA3 0.1~0.5mg/L +IBA
0.2~0.5mg/L
（三）热处理结合茎尖培养脱毒
（四）微体嫁接脱毒 微体嫁接是组织培养与嫁接方法相结合来获得无病毒 苗木的一种技术。它是将0.1~0.2mm的茎尖作为接穗，嫁 接到由试管中培养出来的无菌室生砧木上，继续进行试管
（1）材料的准备 一般说来，带有叶原基的茎尖易于培养，成苗快，培养时间 短，要获得无病毒植株，理论上茎尖越小越好，实际应用时，根据 病毒种类不同切取0.1~1mm大小的生长点，即可获得无病毒植株， 外植体越小，培养难度越大，或者时间越长。
（2）材料消毒
流水冲洗5 min---洗涤剂---流水冲洗30min---70%酒精 3~5min---升汞8~10min---无菌水冲洗3~4次 （3）茎尖分生组织分离 如果进行普通茎尖培养，外植体形大些为好，一般切取