医学文献中信号通路检索方法探讨
信号通路研究方法
信号通路研究方法信号通路研究是生物医学领域中的重要课题，它涉及到细胞内外的信号传导过程，对于理解疾病发生机制、药物研发以及临床治疗具有重要意义。
因此，研究人员需要掌握一系列的研究方法来深入探究信号通路的调控机制。
本文将介绍一些常用的信号通路研究方法，希望能为相关研究工作提供一些参考和帮助。
首先，信号通路研究的基本方法之一是蛋白质相互作用分析。
蛋白质在信号传导中起着至关重要的作用，而蛋白质之间的相互作用则构成了复杂的信号网络。
研究人员可以利用免疫共沉淀、酵母双杂交、荧光共定位等方法来分析蛋白质之间的相互作用关系，从而揭示信号通路中的关键蛋白质及其相互作用网络。
其次，信号通路研究还需要进行信号分子的检测和定量分析。
常用的方法包括免疫印迹、荧光定量PCR、质谱分析等。
这些方法可以帮助研究人员准确地检测和定量目标信号分子的表达水平，从而揭示信号通路在不同生理或病理状态下的变化规律。
此外，细胞信号通路的研究也需要进行细胞信号转导通路的测定和分析。
细胞内的信号传导网络是复杂而精密的，研究人员可以利用siRNA干扰、荧光显微镜观察、细胞融合实验等方法来研究特定信号通路的活化、抑制及其对细胞功能的调控作用。
最后，信号通路研究还需要进行动物模型的建立和信号通路调控的体内验证。
通过建立相关的动物模型，研究人员可以对信号通路的调控机制进行深入研究，并且可以验证潜在的药物靶点。
例如，基因敲除小鼠、转基因小鼠等模型的建立可以为信号通路研究提供重要的实验材料。
综上所述，信号通路研究方法涉及到多个方面，包括蛋白质相互作用分析、信号分子的检测和定量分析、细胞信号转导通路的测定和分析以及动物模型的建立和体内验证等。
研究人员可以根据具体的研究课题和目的选择合适的方法，从而深入研究信号通路的调控机制，为相关疾病的治疗和药物研发提供理论和实验基础。
基于NO-cGMP-PKG信号通路探讨益母缩宫颗粒对药物不全流产大鼠阴道流血的影响
基于NO-cGMP-PKG信号通路探讨益母缩宫颗粒对药物不全流产大鼠阴道流血的影响古祥鑫;段秋雨;毛惠【期刊名称】《临床医学研究与实践》【年(卷),期】2024(9)16【摘要】目的通过创建益母缩宫颗粒干预药物不全流产大鼠阴道流血模型,研究其对子宫组织中内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)、蛋白激酶G(PKG)水平的影响,以探讨该药物治疗模型大鼠的作用机制。
方法通过联合米非司酮及米索前列醇进行药物不全流产大鼠阴道流血造模后分组,分别使用对照药物及不同剂量的益母缩宫颗粒进行干预,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠子宫组织处理后的eNOS、cGMP、PKG水平。
结果缩宫素组及益母缩宫颗粒低、中、高剂量组的阴道流血时间明显短于模型组(P<0.01)。
缩宫素组及益母缩宫颗粒低、中、高剂量组的eNOS、cGMP及PKG水平低于模型组(P<0.05)。
益母缩宫颗粒低剂量组的eNOS、cGMP及PKG水平明显高于缩宫素组(P<0.01)。
结论益母缩宫颗粒可能通过调控NO-cGMP-PKG信号通路,降低模型大鼠子宫组织中eNOS、cGMP、PKG水平,加强子宫平滑肌及血管收缩,缩短药物不全流产阴道流血时间。
【总页数】4页(P23-26)【作者】古祥鑫;段秋雨;毛惠【作者单位】西南医科大学;西南医科大学附属中医医院产科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.宫缩素配合复方益母胶囊防治药物流产不全197例临床效果观察2.补血益母颗粒治疗药物流产后阴道流血疗效观察3.益宫颗粒用于药物流产后减少阴道流血观察4.益宫颗粒治疗药物流产后阴道流血64例临床观察5.基于PI3K/Akt信号通路探讨归肾育宫汤对早发性卵巢功能不全大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
信号通路研究的技术方法
Relative kinase activity
12 10 8
6
4 2 0 0 5 10 20 30 60 90 120
Time (min)
Effect of individual MAPK pathways on PRAK activity in intact cells
Control MKK7(D) MKK1(E)
几种MAPK通路抑制剂的化学结构示意图:
O NH2 OCH3 N H N OH O
N
F
PD98059
OCH3 O CH=CH OH
SB202190
N
H N S N CH3 O
O
CH=CH
OH OCH3
F
Curcumin
SB203580
Effects of SB203580 and PD98059 on endogenous PRAK activity
25 36 32 35 38
Construction of p38 loop-12 to ERK like structure
p38 p38(E) p38(6+) p38(6+E) p38(VAP) p38(DL) p38(VAPD6+LE) ERK2
...DFGLARHTDDE------MTGYVATRWYRAPE... ...DFGLARHTDDE------MTEYVATRWYRAPE... ...DFGLARHTDDEHDHTGFMTGYVATRWYRAPE... ...DFGLARHTDDEHDHTGFMTEYVATRWYRAPE... ...DFGLARVADPE------MTGYVATRWYRAPE... ...DFGLARHTDDD------LTGYVATRWYRAPE... ...DFGLARVADPDHDHTGFLTEYVATRWYRAPE... ...DFGLARVADPDHDHTGFLTEYVATRWYRAPE...
医学文献检索检索基础及检索方法
医学文献检索检索基础及检索方法
医学文献检索是为了找到与特定医学主题相关的学术文献而进行的信
息检索过程。
它是医学研究和临床实践中不可或缺的重要环节，能够帮助
医务人员获取最新的研究成果、进一步了解相关领域的知识，以及支持临
床决策的制定。
一、医学文献检索的基础
进行医学文献检索需要具备以下几个基础：
1. 熟悉检索工具：掌握常用的文献检索数据库，如PubMed、Embase、Cochrane图书馆等。
了解各个数据库的特点和优势，这样可以根据需要
选择最适合的数据库进行检索。
2. 熟悉检索词：检索词是进行文献检索的关键。
有效的检索词能够
提高检索的准确性和遍历率。
医学主题词（MeSH term）是PubMed常用的
检索词，还可以根据具体需求自定义其他检索词。
3.了解检索策略：根据研究目的，设计合理的检索策略是非常重要的。
检索策略应包括关键词的组合、语法操作符（如AND、OR）以及文献类型等。
二、常用的医学文献检索方法
1.关键词检索：将与特定主题相关的关键词输入检索系统，通过组合
或排列这些关键词，查找与之相符的文献。
这种方法适用于对特定领域的
综述性研究或概览性研究。
4. 齐次组织文献检索：通过已发表的系统评价和Meta分析，以获取针对其中一特定主题的高质量证据。
齐次组织文献检索是进行循证医学的重要方法。
5.非英语文献检索：在进行全球范围的医学研究时，还需要进行非英语文献的检索。
学习各个国家的医学数据库和相应的检索工具，并根据需要进行适当的检索。
细胞信号通路的研究方法与应用
细胞信号通路的研究方法与应用细胞信号通路，是指不同细胞之间，或同一细胞不同区域、不同类型的信号分子、传递方式、响应机制等，为了维持生命体内平衡，而在身体各个组织和器官中调节和控制各种生理活动的一个复杂的调节网络。
细胞信号通路涉及诸如激素受体、嵌合受体、递质受体等，以及他们和各种信号分子例如细胞内途径相关的蛋白、激酶、低分子小分子化合物和离子等的相互作用。
细胞信号通路的研究，为生命科学领域内探索生命机理、关键蛋白和化合物的学习提供了强有力的工具和方法，对于疾病的防治和新药研发领域也具有举足轻重的地位。
本文将就细胞信号通路的研究方法和应用展开讨论。
1. 细胞信号通路研究大致过程细胞信号通路的研究在实验室内一般会遵循以下程序进行：首先，选定试验对象（一般为研究的蛋白、化合物或细胞），确定所要探究的信号通路方向和相关存活率物质。
其次，应用体外或体内细胞系统，包括复合物、细胞质、全细胞等，进行相应刺激，收集所产生的信号分子和底物，进行初始分离和预处理；接着将预处理过的组分加入适当的化学和分离方法，对样品进行分离和解析；最后，将获得的材料送入质谱计和分子拓扑实验室，利用肽质谱、分子拓扑等技术进行鉴定、验证和定量。
以上是研究细胞信号通路的大致流程。
2. 细胞信号通路研究的实验技术（1）膜抓纸法膜抓纸法是一种快速简单的实验技术，适用于分析受体和激酶的信号传递，可用于测定激酶活性和鉴定其下游分子。
该技术基于类似于风琴的原理将一个磷酸诱导剂卡在了细胞膜表面上，细胞环境中的激酶会通过识别磷酸诱导剂而与其相互作用，进而在膜表面释放出磷酸成分。
再将膜取出，膜表面固定到含有荧光标记磷酸诱导剂的膜片上，通过荧光信号测定已结合的底物含量。
膜抓纸法可以应用于一系列信号转导通路的研究。
（2）蛋白芯片蛋白芯片是一种高通量的生物芯片，使用多个精细的技术，在荧光、电化学或色标特性的基础上确定细胞蛋白的互作关系。
该技术利用基底作为载体固定一系列的蛋白，然后在蛋白表面上耦合结合分子，再通过模拟体内微环境进行细胞分析。
〖医学〗文献检索的方法、途径和步骤
主要的中、外生物医学光盘数据库有以下 几种：
(1)MEDLINE。收录印刷本美国《医学索 引》、《牙科文献索引》、《国际护理 索引》的内容。
(2) 中 国 生 物 医 学 文 献 光 盘 数 据 库 ， 简 称 CBMdisc。
(3)中 国生物 医学期 刊数据 库 (Chinese medicial current contents ， 简 称 CMCC) 。 是 解 放 军 医 学 图 书 馆 数 据 库研究部研制开发的书目型数据库， 收 集 了 1994-1998 年 国 内 正 式 出 版 和 内部发行的生物医学刊物1000余种。
[Thesaurus]等按钮。[Database]指数据 库。[Searches]、[Index]、[Thesaurus] 是常用的检索途径。
3．检索区、检索史区(Search History) 和检索结果区
检索பைடு நூலகம்：输入检索词或检索式； 检索史区：显示相应的检索序号、命中
文献数和检索提问式，记录各次检索； 检索结果区：显示检索结果。
告号、专利号、标准号、会议号等。 (七)其他
如分子式、生物分类、属类等。
三、检索步骤 (一)分析检索课题，明确检索要求。
(二)选择检索工具，确定检索方法。
(三)选择检索途径 (四)具体查找文献线索 (五)索取原始文献
第四节 光盘检索和 网络信息资源
一、光盘检索概述 1985年美国将第一个光盘数据库投 放市场。
例：p256
2．主题词检索
点 击 工 具 栏 中 [Thesaurus] ， 出 现 主 题
词检索屏幕(图13-6)，主屏幕只有主 题词输入区(Thesaurus)和显示区，检 索完成后回到基本检索界面显示检索 结果。例：P259
医学文献中信号通路的检索方法及网络信息资源
篇 文献 ， 经将命 中文献展 开 ， 发现大部 分是 Ｗｎ ｆ ３ １ 一 ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ书写 ［ ４ ］ 赵跃 民． 竞争情 报服务 与科技查 新工作 的开展 ［ Ｊ ］ ． 情报科
学， ２ ０ ０ ４ （ １ ） ： ４ ７ — ５ ０ ．
科技情报开发 与经济
文章编 号： １ ０ ０ ５ — ６ ０ ３ ３ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４ — ０ １ ２ ５ — ０ ３
Ｓ Ｃ Ｉ — Ｔ Ｅ Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ｆ Ｏ Ｒ Ｍ Ａ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ Ｄ Ｅ Ｖ Ｅ Ｌ Ｏ Ｐ Ｍ Ｅ Ｎ Ｔ＆Ｅ Ｃ Ｏ Ｎ Ｏ Ｍ Ｙ
２ ０ １ ３ 年
献 中信 号通路的检 索方法及应注意的 问题进行 了论述 ， 探讨 了它们 对医学科技查新的
影响。
关键词 ： 科技 查新 ； 医学文献 ； 网络信 息资源； 信 号通路 ； 检 索方法 中图分类号 ： Ｇ ２ ５ ２ ． ６ ２ 文献标识码 ： Ａ
近年来研究发现 ，信号转导通路几乎参 与所 有的细胞生命 活动 ， 包括细胞代谢 、 分裂 、 分化 、 凋亡等 。异 常的信号转导通路 在肿瘤细胞 的增殖和分化过程 中起着重要 的调节作用 。分析异 常 的信号通路 ， 将对癌症的机理研究提供有益的指导作用 。下面
［ １ ］ 马景娣 ， 田稷． 基 于 Ｗｅ ｂ的科技查新 工作平 台设计 与实 现
［ Ｊ ］ ． 现代情报 ， ２ ０ ０ ５ （ ３ ） ： １ ６ ４ — １ ６ ５ ； ７ ． ［ ２ ］ 卢振波 ， 梁南燕 ， 张春红． 论 查新信息 的规范管理——北京 大学 图书馆案例分析［ Ｊ ］ ． 现代情报 ， ２ ０ ０ ５ （ ３ ） ： １ ２ ５ — １ ２ ６ ． ［ ３ ］ 刘朝旭从 日本查新人员技术资格考试谈查新人员素质 Ｅ Ｊ ３ ．
细胞信号通路研究
细胞信号通路研究细胞信号通路是细胞内外环境信息传递的重要途径，对于细胞生物学和医学研究具有重要意义。
本文将介绍细胞信号通路的研究概况，包括其重要性、研究方法和进展等方面内容。
一、细胞信号通路的重要性细胞信号通路是细胞内信息传递的重要通道，通过它可以调控细胞的生理和病理过程。
细胞信号通路在维持细胞的稳态、促进细胞生长和增殖、调节细胞分化和凋亡等方面起着关键作用。
了解和研究细胞信号通路可以揭示细胞内分子相互作用和调控机制，有助于理解生命活动的基本规律。
二、细胞信号通路的研究方法1. 生物化学方法生物化学方法是细胞信号通路研究的重要手段之一。
通过分离纯化细胞蛋白、酶活性测定、互作蛋白筛选等技术手段，可以鉴定和分析细胞内关键蛋白、酶和互作蛋白等重要组分，揭示细胞信号通路的结构和功能。
2. 分子生物学方法分子生物学方法在细胞信号通路研究中起到关键作用。
通过基因克隆、表达调控和基因敲除等技术手段，可以研究细胞信号通路中的关键基因和调控机制。
例如，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术可以精确地敲除或修饰细胞信号通路中的关键基因，从而揭示其功能和调控机制。
3. 生物信息学方法生物信息学方法在细胞信号通路研究中扮演重要角色。
通过对细胞信号通路相关基因和蛋白的生物信息学分析，可以预测其结构、功能和相互作用等信息。
同时，借助数据库查询和分析工具，可以系统地整合和分析细胞信号通路研究的大量数据，揭示其网络结构和调控机制。
三、细胞信号通路研究的进展1. 重要信号通路的研究细胞信号通路研究中，一些重要信号通路得到了广泛关注。
如MAPK信号通路、PI3K/AKT信号通路、Wnt信号通路等，在细胞生长、分化、凋亡等方面具有重要作用。
通过对这些信号通路的深入研究，揭示了其在多种疾病中的异常活化或失活机制，为疾病的预防和治疗提供了新的思路和靶点。
2. 新的研究技术和方法随着科学技术的不断发展，细胞信号通路研究方法也在不断更新和完善。
医学文献检索方法ppt课件
通过阅读文献的摘要，了解其主要内容 和观点，判断其是否符合个人需求和研
究目的。
笔记与摘录
在阅读过程中做好笔记和摘录，记录 重要观点和数据，为后续研究提供参
考。
全文阅读
对符合个人需求的文献进行全文阅读 ，深入了解其研究背景、方法、结果 和结论等。
归纳与总结
对阅读过的文献进行归纳和总结，形 成自己的观点和认识，为论文写作和 学术交流做准备。
评估检索结果
根据相关性、质量和数 量等指标，对检索结果 进行筛选和评估。
医学文献检索的常用术语
主题词和自由词
主题词是规范化的检索语言，自由词是自然语言的检索词。
布尔逻辑运算符
包括AND、OR、NOT等，用于组合或排除检索词。
截词符
用于检索词的不同词形或拼写变体，如*、?等。
限定符
用于限制检索结果的某些特征，如时间范围、文献类型等。
03 医学文献检索工具与数据库
综合性医学文献检索工具
PubMed
提供生物医学方面的论文搜寻以及摘要，并且免费搜寻的 数据库。其核心主题为医学，但亦包括其他与医学相关的 领域，像是护理学或者其他健康学科。
Cochrane Library
循证医学的数据库，包含高质量的系统评价、综述、临床 试验等。
Scopus
07 医学文献检索的挑战与趋势
大数据与智能化技术在医学文献检索中的应用
大数据技术
利用大数据技术对海量医学文献进行存储、管理和分析，提高检 索效率和准确性。
智能化技术
应用自然语言处理、机器学习等智能化技术，实现医学文献的自 动分类、摘要提取和语义检索等功能。
个性化推荐
基于用户历史检索记录和偏好，利用智能化技术为用户推荐相关 度高的医学文献。
有效的医学信息搜索策略与技巧
有效的医学信息搜索策略与技巧在当今信息爆炸的时代，医学领域的信息量日益庞大，如何快速、准确地搜索到有效的医学信息成为医学从业者必备的技能。
有效的医学信息搜索策略与技巧能够帮助医生、研究人员和学生及时获得所需的最新医学知识。
以下是一些有效的医学信息搜索策略和技巧，供参考：1.明确搜索目标：在进行医学信息搜索之前，首先明确所需的信息目标。
确定搜索的主题和关键词，尽量将关键词具体化，以便获得更准确和相关的搜索结果。
2.选择合适的搜索引擎：目前市面上有许多搜索引擎可供选择，如谷歌学术、PubMed、Embase等。
不同搜索引擎的搜索结果可能有所不同，根据具体的搜索需求选择合适的搜索引擎。
3.使用布尔逻辑符号：在进行医学信息搜索时，可以使用布尔逻辑符号来帮助筛选搜索结果。
常见的布尔逻辑符号有AND、OR、NOT。
AND用于同时包含两个或多个关键词的结果，OR用于将两个或多个关键词的结果组合在一起，NOT用于排除某些关键词的搜索结果。
4.利用标签和分类：在搜索结果页面可以利用标签和分类筛选结果。
有些搜索引擎会将搜索结果按照不同的标签进行分类，通过选择相关标签可以更精确地获得所需的信息。
5.综合利用多种资源：医学信息除了可以通过搜索引擎获得外，还可以参考一些专业的医学网站、学术期刊和数据库。
这些资源中的信息更加专业、权威。
同时，还可以通过与同行交流、参加学术会议等方式获取最新的医学信息。
6.注意筛选结果的质量：不是所有的搜索结果都是可靠和准确的。
在浏览搜索结果时，要注意筛选结果的来源和作者背景，尽量选择来自权威机构和专业作者的信息。
7.关注最新研究和评论：医学领域的知识不断更新和发展，一些最新的研究和评论可以帮助医学从业者了解最新的进展和观点。
关注一些权威的医学期刊、杂志、博客等是获取最新、准确医学信息的有效途径。
8.参考其他人的推荐和评价：不少专家、研究人员和学生在某些医学信息资源上推荐和评价一些研究成果、文章、工具等。
基于JAKSTAT信号通路探讨复方竹节参片对膝关节骨性关节炎兔的作用机制
基于ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路探讨复方竹节参片对膝关节骨性关节炎兔的作用机制彭名行１ꎬ３ꎬ田春漫１ꎬ２ꎬ涂㊀星１ꎬ２ꎬ谢慧臣１ꎬ袁丽君１ꎬ李三宇１(１.湖北民族大学医学部ꎬ湖北恩施４４５０００ꎻ２.风湿病性疾病发生与干预湖北省重点实验室ꎬ湖北恩施４４５０００ꎻ３.达州中医药职业学院ꎬ四川达州６３５０００)㊀㊀[摘要]㊀目的㊀探讨ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路在膝关节骨性关节炎(ＫＯＡ)发生㊁发展和转归中的作用ꎬ初步揭示复方竹节参片治疗ＫＯＡ的作用环节和靶点ꎮ方法㊀取６只雄性日本大耳白兔作为对照组ꎬ取３４只雄性日本大耳白兔采用关节腔注射木瓜蛋白酶诱导ＫＯＡ模型ꎮ将造模成功的兔随机分为模型组８只和复方竹节参片高㊁中㊁低剂量组各６只ꎮ造模结束后ꎬ复方竹节参片高㊁中㊁低剂量组分别按１５０ｍｇ/ｋｇ㊁７５ｍｇ/ｋｇ㊁３７.５ｍｇ/ｋｇ的剂量灌胃给予复方竹节参片混悬液ꎬ模型组和对照组同法给予蒸馏水ꎬ均每天１次ꎬ连续１４ｄꎮ分别于造模前㊁造模结束后㊁灌胃７ｄ和灌胃１４ｄ测量各组兔脚踝周径ꎻ于末次灌胃后２４ｈꎬ取膝关节㊁血清和滑膜组织ꎬ采用ＨＥ染色法观察膝关节组织病理学形态ꎬＥＬＩＳＡ法测定血清中白细胞介素－６(ＩＬ－６)水平ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达量ꎮ结果㊀与对照组比较ꎬ模型组兔脚踝周径显著增加(Ｐ<０.０５)ꎬ血清ＩＬ－６水平及滑膜中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达量均显著升高(Ｐ均<０.０５)ꎮ与模型组比较ꎬ复方竹节参片各组兔脚踝周径明显缩短(Ｐ均<０.０５)ꎬ复方竹节参片高㊁中剂量组血清ＩＬ－６水平均显著降低(Ｐ均<０ ０５)ꎻ复方竹节参片高剂量组滑膜组织中ＪＡＫ２蛋白表达量及复方竹节参片各组滑膜组织中ｐ－ＪＡＫ２㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达量均显著降低(Ｐ均<０.０５)ꎮ结论㊀复方竹节参片能显著缓解ＫＯＡ的关节肿胀ꎬ其机制可能与调控ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路上下游相关的细胞因子和蛋白表达有关ꎮ[关键词]㊀膝关节骨性关节炎ꎻ复方竹节参片ꎻＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００８－８８４９.２０２１.１３.００９[中图分类号]㊀Ｒ－３３２㊀[文献标识码]㊀Ａ㊀[文章编号]㊀１００８－８８４９(２０２１)１３－１４０８－０５[作者简介]㊀彭名行ꎬ男ꎬ硕士ꎬ研究方向为中医内科ꎮ[通信作者]㊀田春漫ꎬＥ－ｍａｉｌ:１９９８０１９＠ｈｂｍｙ.ｅｄｕ.ｃｎ[基金项目]㊀湖北省教育厅科学技术研究项目(Ｂ２０１６１０１)ꎻ风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室第二批(２０１５年度)开放基金项目(ＯＩＲ１５０１４)ＤｉｓｃｕｓｓｉｏｎｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒａｂｂｉｔｓｗｉｔｈｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｂａｓｅｄｏｎＪＡＫ/ＳＴＡＴｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙＰＥＮＧＭｉｎｇｈａｎｇ１ꎬ３ꎬＴＩＡＮＣｈｕｎｍａｎ１ꎬ２ꎬＴＵＸｉｎｇ１ꎬ２ꎬＸＩＥＨｕｉｃｈｅｎ１ꎬＹＵＡＮＬｉｊｕｎ１ꎬＬＩＳａｎｙｕ１(１.ＨｕＢｅｉＭｉｎＺｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨｅａｌｔｈＳｃｉｅｎｃｅＣｅｎｔｅｒꎬＥｎｓｈｉ４４５０００ꎬＨｕｂｅｉꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＯｃ￣ｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄＩｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｏｆＲｈｕｍａｔｉｃＤｉｓｅａｓｅｓꎬＥｎｓｈｉ４４５０００ꎬＨｕｂｅｉꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＤａｚｈｏｕＶｏｃａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＤａｚｈｏｕ６３５０００ꎬＳｉｃｈｕａｎꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＩｔｉｓｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆＪＡＫ/ＳＴＡＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅꎬｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｏｕｔ￣ｃｏｍｅｏｆｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ(ＫＯＡ)ꎬａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｒｅｖｅａｌｔｈｅｒｏｌｅａｎｄｔａｒｇｅｔｐｏｉｎｔｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＫＯＡ.ＭｅｔｈｏｄｓＳｉｘｍａｌｅＪａｐａｎｅｓｅｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬａｎｄａｎｏｔｈｅｒ３４ｍａｌｅＪａｐａｎｅｓｅｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｐａｐａｉｎｉｎｔｏｔｈｅｊｏｉｎｔｃａｖｉｔｙｔｏｉｎｄｕｃｅｔｈｅＫＯＡｍｏｄｅｌｓ.Ｔｈｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｍｏｄｅｌｅｄｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏａｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗｉｔｈ８ｒａｂｂｉｔｓａｎｄｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｈｉｇｈꎬｍｅｄｉｕｍꎬａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈ６ｒａｂｂｉｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ.Ａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｍｏｄｅｌｉｎｇꎬｔｈｅｈｉｇｈꎬｍｅｄｉｕｍꎬａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅｇｉｖｅｎａｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓａｔｔｈｅｄｏｓｅｓｏｆ１５０ｍｇ/ｋｇꎬ７５ｍｇ/ｋｇꎬａｎｄ３７.５ｍｇ/ｋｇｂｙｇａｖａｇｅꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｄｉｓｔｉｌｌｅｄｗａｔｅｒｂｙｇａｖａｇｅꎬａｌｌｏｎｃｅａｄａｙｆｏｒ１４ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｄａｙｓ.Ｔｈｅａｎｋｌｅｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｒａｂｂｉｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆ￣ｔｅｒｔｈｅｍｏｄｅｌｉｎｇꎬ７ｄａｙｓａｎｄ１４ｄａｙｓａｆｔｅｒｇａｖａｇｅꎻａｔ２４ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔｇａｖａｇｅꎬｔｈｅｋｎｅｅｊｏｉｎｔｓꎬｓｅｒｕｍａｎｄｓｙｎｏｖｉａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｔａｋｅｎｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｋｎｅｅｊｏｉｎｔｂｙＨＥｓｔａｉｎｉｎｇꎬｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｒｕｍｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣６(ＩＬ￣６)ｂｙＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄꎬａｎｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＪＡＫ２ꎬｐ￣ＪＡＫꎬＳＴＡＴ３ꎬＥＲＫ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｓｙｎｏｖｉａｌｔｉｓｓｕｅｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｍｅｔｈｏｄ.ＲｅｓｕｌｔｓＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆａｎｋｌｅｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｅｒｕｍＩＬ￣６ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＳＴＡＴ３ꎬＪＡＫ２ꎬｐ￣ＪＡＫ２ａｎｄＥＲＫ１ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｓｙｎｏｖｉｕｍｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ(ａｌｌＰ<０.０５).Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆａｎｋｌｅｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｈｉｇｈꎬｍｅｄｉｕｍａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｓｈｏｒｔｅｎｅｄ(ａｌｌＰ<０.０５)ꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｅｒｕｍＩＬ￣６ｉｎｈｉｇｈａｎｄｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ(Ｐ<０.０５)ꎬＪＡＫ２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｓｙｎｏｖｉｕｍｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥｒＫ１ꎬＳＴＡＴ３ꎬｐ￣ＪＡＫ２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｓｙｎｏｖｉｕｍｏｆｅａｃｈｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ(ａｌｌＰ<０ ０５).ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＣｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｉｅｖｅｔｈｅｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｉｎｇｏｆＫＯＡꎬｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｕｐｓｔｒｅａｍａｎｄｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅＪＡＫ/ＳＴＡＴｓｉｇ￣ｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓꎻｃｏｍｐｏｕｎｄｐａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓｔａｂｌｅｔｓꎻＪＡＫ/ＳＴＡＴｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙ㊀㊀膝关节骨性关节炎(ｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓꎬＫＯＡ)以膝关节疼痛㊁肿胀㊁变形及功能障碍为主要临床表现ꎬ严重影响患者的生活质量[１]ꎮ目前临床上常用非甾体类抗炎药物治疗ＫＯＡꎬ虽能在一定程度上减轻疼痛ꎬ但长期应用所致的消化道不良反应影响了其治疗依从性[２－３]ꎮ中医药治疗本病具有疗效好㊁不良反应小的优势[４]ꎮ复方竹节参片是湖北民族大学附属民大医院治疗ＫＯＡ的院内制剂ꎬ在临床使用１０余年ꎬ疗效确切ꎬ无明显不良反应[５－６]ꎮ前期研究证实ꎬ复方竹节参片具有调节免疫㊁抗炎㊁镇痛㊁抗风湿等药理作用[７]ꎬ但其治疗ＫＯＡ的作用机制尚不明确ꎮ本研究拟采用木瓜蛋白酶诱导的ＫＯＡ兔模型为研究对象ꎬ采用复方竹节参片进行干预治疗ꎬ考察其对ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路上下游相关细胞因子和蛋白表达的影响ꎬ初步揭示其作用机制ꎮ１㊀实验材料与方法１ １㊀实验材料１ １ １㊀实验动物㊀清洁级雄性日本大耳白兔４０只ꎬ体重(２.０ʃ０.２)ｋｇꎬ购自湖北逸挚诚生物科技有限公司ꎬ动物许可证号:ＳＣＸＫ(鄂)２０１６－００２０ꎬ实验前适应性喂养７ｄꎮ１ １ ２㊀主要药物与试剂㊀复方竹节参片(购自湖北民族大学附属民大医院ꎬ恩施州卫药制准字[２０１１]０３－３８ꎬ批号:１７１１０１)ꎻ木瓜蛋白酶(南京奥多福尼生物科技有限公司ꎬ批号:２０１６０３０８)ꎻ白细胞介素－６(ＩＬ－６)(武汉博士德生物工程有限公司ꎬ批号:ＥＫ０４１２)ꎻｐ－ＪＡＫ２单抗(ｘｙ－３２０６Ｒꎬ上海信裕生物技术有限公司)ꎻＥＲＫ１㊁ＪＡＫ２㊁ＳＴＡＴ３单抗均购自武汉三鹰生物技术有限公司ꎮ１ １ ３㊀主要仪器㊀５８１０Ｒ高速冷冻离心机(德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司)ꎻ酶标定量测定仪(德国Ｔｈｅｒｍｏ公司)ꎻＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ电泳及转膜装置(美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司)ꎻＴＳ－Ⅰ型脱色摇床(江苏海门麒麟医用仪器厂)ꎮ１ ２㊀实验方法㊀取３４只兔于第１ꎬ４ꎬ７天分别于膝关节腔内注射２％木瓜蛋白酶水溶液０.５ｍＬꎬ另取６只兔作为对照组ꎬ同法注射等量生理盐水ꎬ参考文献[８]评价其造模是否成功ꎬ结果成功模型２６只ꎬ成功率为７６.５％ꎮ将造模成功的兔随机分为模型组８只和复方竹节参片高㊁中㊁低剂量组各６只ꎮ竹节参片高㊁中㊁低剂量组分别以１５０ｍｇ/ｋｇ㊁７５ｍｇ/ｋｇ㊁３７.５ｍｇ/ｋｇ给予浓度为６０ｍｇ/ｍＬ㊁３０ｍｇ/ｍＬ㊁１５ｍｇ/ｍＬ复方竹节参片混悬液５ｍＬ灌胃ꎬ对照组及模型组同法灌胃等体积蒸馏水ꎬ均每天１次ꎬ连续１４ｄꎮ１ ３㊀观察指标及方法１ ３ １㊀兔脚踝周径测定㊀分别于造模前㊁造模结束后㊁灌胃７ｄ及灌胃１４ｄꎬ将兔固定于兔台ꎬ用细麻线环绕脚踝一周ꎬ测量并记录细麻线长度ꎬ即为兔脚踝周径ꎮ１ ３ ２㊀样本采集㊀于末次灌胃后禁食不禁水１２ｈꎬ以１０％水合氯醛麻醉各组兔后ꎬ腹主动脉取血ꎬ３０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎬ取血清ꎬ于－８０ħ冰箱中保存ꎻ剥离左侧膝关节滑膜ꎬ置于ＥＰ管中ꎬ于－８０ħ冰箱中保存ꎻ取右侧膝关节ꎬ置于４％多聚甲醛溶液中固定ꎬ－８０ħ冰箱中保存ꎮ１ ３ ３㊀膝关节病理样本制备与形态观察㊀取４％多聚甲醛溶液中固定的右侧膝关节组织ꎬ经常规脱水ꎬ脱钙ꎬ石蜡包埋ꎬ切片ꎬＨＥ染色后ꎬ在光学显微镜下观察ꎮ１ ３ ４㊀血清中ＩＬ－６水平测定㊀取上述待测血清ꎬ按照ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书检测血清中ＩＬ－６水平ꎮ１ ３ ５㊀滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达检测㊀取滑膜组织ꎬ常温解冻ꎬ称取滑膜组织重量ꎬ匀浆后加入蛋白裂解液充分裂解组织㊁离心㊁分离上清液ꎬ把样品煮沸变性ꎬ按照ＢＣＡ试剂盒操作进行蛋白定量ꎬ然后将样品加入电泳凝胶中进行蛋白分离ꎬ裁剪出目的蛋白的蛋白胶后进行转膜ꎬ封闭后加入浓度均为１ʒ１０００的ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１抗体ꎬ孵育过夜后用ＴＢＳ冲洗ꎬ加入二抗后室温下孵育２ｈꎬ用ＴＢＳ(Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲盐溶液)清洗条带后进行ＥＣＬ底物发光ꎮ将胶片进行扫描ꎬ用凝胶图像处理系统(Ｇｅｌ－Ｐｒｏ－Ａｎａｌｙｚｅｒ软件)分析目标条带的光密度值ꎮ１ ４㊀统计学方法㊀实验结果采用ＳＰＳＳ２１.０统计软件分析ꎬ计量资料采用 ｘʃｓ表示ꎬ组间比较采用Ｏｎｅ－ｗａｙＡｎｏｖａ处理ꎬ若两两比较方差齐则采用ＬＳＤ检验ꎬ方差不齐则采用Ｄｕｎｎｅｔｔ检验ꎬ以Ｐ<０ ０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结㊀㊀果２ １㊀各组兔脚踝关节肿胀程度比较㊀造模结束后模型组㊁复方竹节参片各组兔脚踝周径均显著长于对照组及造模前(Ｐ均<０.０５)ꎬ各造模组间比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎻ灌胃７ｄ后ꎬ复方竹节参片各组兔脚踝周径均有缩短趋势ꎬ但与模型组比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎻ灌胃１４ｄ后ꎬ复方竹节参片各组兔脚踝周径均显著短于模型组(Ｐ均<０.０５)ꎬ且复方竹节参片各组间比较差异均无统计学意义(Ｐ均>０.０５)ꎮ见表１ꎮ２ ２㊀各组兔膝关节病理形态学表现㊀对照组滑膜表１㊀各组兔脚踝周径比较( ｘʃｓꎬｃｍ)组别只数造模前造模结束后灌胃７ｄ后灌胃１４ｄ后对照组６５.７５ʃ０.２６５.７８ʃ０.２５５.８０ʃ０.２３５.８３ʃ０.２６模型组８５.７５ʃ０.２８６.７６ʃ０.４２①②６.６０ʃ０.３１６.４８ʃ０.３１复方竹节参片低剂量组６５.５８ʃ０.１９６.５２ʃ０.２８①②６.３７ʃ０.１９６.０２ʃ０.２４③复方竹节参片中剂量组６５.８１ʃ０.１８６.９８ʃ０.３５①②６.５２ʃ０.４０６.１７ʃ０.２６③复方竹节参片高剂量组６５.７３ʃ０.２３６.７３ʃ０.２５①②６.５０ʃ０.１４６.１８ʃ０.１３③㊀㊀注:①与对照组比较ꎬＰ<０.０５ꎻ②与造模前比较ꎬＰ<０.０５ꎻ③与模型组比较ꎬＰ<０.０５ꎮ细胞排列整齐ꎬ踝关节软骨表面光滑无破坏ꎬ滑膜组织结构完整无破坏ꎬ无炎性细胞浸润及血管增生等炎性症状ꎻ模型组软骨组织结构遭到破坏ꎬ滑膜细胞增生变形㊁纤维化ꎬ细胞排列紊乱ꎬ有大量炎性细胞浸润增生及滑膜血管翳形成ꎻ与模型组比较ꎬ复方竹节参片高剂量组膝关节软骨破坏减少ꎬ其滑膜组织增生减轻ꎬ所观察到的细胞形态未出现紊乱ꎬ无血管翳形成ꎻ复方竹节参片中㊁低剂量组炎性细胞浸润明显改善ꎬ滑膜细胞排列相对整齐ꎬ血管翳明显减少ꎮ见图１ꎮ２ ３㊀各组兔血清ＩＬ－６水平比较㊀对照组㊁模型组及复方竹节参片高㊁中㊁低剂量组血清ＩＬ－６水平分别为(１０６.９６ʃ１４.１０)μｇ/ｍＬ㊁(１９９.９４ʃ１４.３５)μｇ/ｍＬ㊁(１４７.０４ʃ５.２３)μｇ/ｍＬ㊁(１５４.４９ʃ７.６６)μｇ/ｍＬ㊁(１８１.０４ʃ１１.４７)μｇ/ｍＬꎬ模型组显著高于对照组(Ｐ<０.０５)ꎬ复方竹节参片高㊁中剂量组均显著低于模型组及复方竹节参片低剂量组(Ｐ均<０ ０５)ꎬ复方竹节参片高㊁中剂量组间比较差异无统计学意义(Ｐ>０.０５)ꎮ２ ４㊀各组兔滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达量比较㊀与对照组比较ꎬ模型组滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１表达量均显著升高(Ｐ均<０.０５)ꎻ与模型组比较ꎬ复方竹节参片各组滑膜组织中ｐ－ＪＡＫ２㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达量及复方竹节参片高剂量组滑膜组织中ＪＡＫ２蛋白表达量均显著降低(Ｐ均<０.０５)ꎮ见图２ꎮ３㊀讨㊀㊀论目前ＫＯＡ发病机制尚不明确ꎬ但国内外普遍认为其可能与合成及分解代谢相关的炎症因子㊁脂蛋白基因㊁细胞因子和自由氧化因子等有关[９－１０]ꎮＪＡＫ/ＳＴＡＴ是重要的细胞内信号转导通路ꎬＪＡＫ家族与ＳＴＡＴｓ家族成员均存在于人体细胞质中ꎬ主要参与炎症反应㊁氧化应激㊁细胞损伤㊁凋亡㊁介导机体免疫等[１１]ꎮＩＬ－６是ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路重要上游图１㊀各组兔膝关节ＨＥ染色表现(ˑ４００)图２㊀各组兔滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达情况的细胞因子ꎬ是一种具有多种生理功能的炎性细胞因子ꎬＫＯＡ发生后ꎬＩＬ－６能与ＩＬ－６受体结合ꎬ激活下游ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路ꎬ使得ＪＡＫ２和磷酸化ＪＡＫ２(ｐ－ＪＡＫ)的表达量均显著增加ꎬ进而诱导上调[１２]ꎮ研究发现ꎬ通过调控ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路ꎬ可以抑制骨性关节炎炎症反应ꎬ抑制软骨细胞凋亡ꎬ明显缓解关节软骨的退变[１３－１５]ꎮＫＯＡ属于祖国医学 骨痹 痹证 范畴ꎬ该病以中老年患者居多ꎬ是由于中年以后ꎬ肝肾精血虚亏ꎬ筋骨失养ꎬ气血运行不畅ꎬ经脉不通ꎬ不通则痛ꎬ不通则肿ꎮ所以治疗重在滋补肝肾㊁益气活血㊁舒筋活络[６]ꎮ复方竹节参片以益气活血㊁散瘀止痛的竹节参为君药ꎬ以血当归㊁白芍㊁淫羊藿为臣药ꎬ与君药合用以达养血活血㊁滋补肝肾㊁强筋壮骨之效ꎻ佐以搜风除湿㊁散寒逐瘀之青风藤㊁地蜂子㊁穿地龙等ꎬ共奏滋补肝肾㊁益气活血㊁祛风除湿之功ꎬ组方用药与ＫＯＡ中医病机相契合ꎮ本研究采用经典的木瓜蛋白酶膝关节腔注射进行ＫＯＡ兔模型造模ꎬ探讨了复方竹节参片治疗ＫＯＡ的可能作用机制ꎮ结果显示ꎬ木瓜蛋白酶诱导的ＫＯＡ模型家兔关节明显肿胀ꎻ膝关节病理切片表现为软骨组织结构破坏ꎬ滑膜细胞增生变形ꎬ有大量炎性细胞浸润ꎻ血清ＩＬ－６水平及滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１蛋白表达量显著升高ꎮ提示木瓜蛋白酶关节腔注射可以诱导膝关节的炎性反应ꎬ从而促进炎性因子ＩＬ－６的分泌ꎬ进而激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路ꎬ进一步加重关节炎症反应ꎬ导致软骨的破坏和滑膜的增生ꎬ最终形成ＫＯＡꎮ给予模型家兔复方竹节参片干预后ꎬ家兔血清ＩＬ－６水平及滑膜组织中ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１表达量均明显降低ꎬ提示复方竹节参片可能通过抑制炎性因子ＩＬ－６表达ꎬ从而抑制ＪＡＫ/ＳＴＡＴ信号通路ꎬ进而减轻关节炎症反应ꎬ减少软骨细胞的破坏ꎬ最终达到治疗ＫＯＡ的目的ꎬ分析ＩＬ－６㊁ＪＡＫ２㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３㊁ＥＲＫ１是复方竹节参片的主要作用靶点ꎮ目前尚未见经典的治疗ＫＯＡ的成药ꎬ故本研究未设置阳性药物对照ꎬ在治疗作用的比较上尚存在一定的局限性ꎮ此外ꎬ以木瓜蛋白酶诱导的ＫＯＡ动物模型是否具有相应的中医证候属性ꎬ是否符合复方竹节参片的组方特色ꎬ还有待进一步研究ꎮ利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突ꎮ[参考文献] [１]㊀ＨｕａｎｇＤꎬＬｉｕＹＱꎬＬｉａｎｇＬＳꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙｏｆＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＫｎｅｅＪｏｉｎｔＤｉｓｅａｓｅ:ＥｘｐｅｒｔＣｏｎ￣ｓｅｎｓｕｓｆｒｏｍｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰａｉｎＭｅｄｉｃｉｎｅＰａｎｅｌ[Ｊ].ＰａｉｎＲｅｓＭａｎａｇꎬ２０１８ꎬ２０１８:２０１０１２９.[２]㊀ＭｕｒａｋｉＳꎬＡｋｕｎｅＴꎬＯｋａＨꎬｅｔａｌ.Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄｒｉｓｋｆａｃ￣ｔｏｒｓｆｏｒｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｋｎｅｅｐａｉｎｉｎＪａｐａｎｅｓｅｍｅｎａｎｄｗｏｍｅｎ:Ａｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ￣ｂａｓｅｄｃｏｈｏｒｔｓｔｕｄｙ[Ｊ].ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍꎬ２０１２ꎬ６４(５):１４４７－１４５６.[３]㊀ＪｏｒｄａｎＫＭꎬＡｒｄｅｎＮＫꎬＤｏｈｅｒｔｙＭꎬｅｔａｌ.ＥＵＬＡＲＲｅｃ￣ｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ２００３:ａｎｅｖｉｄｅｎｃｅｂａｓｅｄａｐｐｒｏａｃｈｔｏｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ:ＲｅｐｏｒｔｏｆａＴａｓｋＦｏｒｃｅｏｆｔｈｅＳｔａｎｄｉｎｇＣｏｍｍｉｔｔｅｅｆｏｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｌｉｎｉｃａｌＳｔｕｄ￣ｉｅｓＩｎｃｌｕｄｉｎｇＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＴｒｉａｌｓ(ＥＳＣＩＳＩＴ)[Ｊ].ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓꎬ２００３ꎬ６２(１２):１１４５－１１５５. 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医学文献检索检索基础及检索方法
医学文献检索检索基础及检索方法
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基于MAPK_信号通路探讨中医药治疗肝癌的研究进展
728 环球中医药2024年4月第17卷第4期 Global Traditional Chinese Medicine,April 2024,Vol.17,No.4㊃综述㊃基金项目:河南省中医药科学研究专项(2019ZYZD06);河南省卫生健康委员会国家中医临床研究基地科研专项(2022JDZX083)作者单位:450046 郑州,河南中医药大学第一临床医学院[张格松(硕士研究生)];河南中医药大学第一附属医院血液肿瘤科(蒋士卿)作者简介:张格松(1997-),2021级在读硕士研究生㊂研究方向:中西医结合防治恶性肿瘤的研究㊂E⁃mail:zhanggesong123@ 通信作者:蒋士卿(1965-),博士,主任医师,教授,博士生导师㊂研究方向:中医药防治肿瘤疾病㊂E⁃mail:Jiangshiqing66@基于MAPK 信号通路探讨中医药治疗肝癌的研究进展张格松 蒋士卿【摘要】 肝癌是全球常见的恶性肿瘤之一㊂丝裂原活化蛋白激酶(mitogen⁃activated proteinkinase,MAPK)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,具有调节细胞的生长㊁分化㊁凋亡等多种功能,与肝癌细胞的增殖㊁凋亡㊁侵袭转移㊁自噬等细胞活动密切相关㊂中医药通过干预MAPK 通路下游蛋白来调节细胞周期蛋白表达,阻滞细胞通过G1期进入S 期,从而抑制增殖;通过上调促凋亡蛋白与下调抑凋亡蛋白,激活半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)级联反应促进细胞凋亡;通过下调基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)㊁血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,抑制上皮 间质转化(epithelial⁃mesenchymal transition,EMT),从而降低肝癌细胞侵袭转移能力;上调自噬相关蛋白的表达,促进肝癌细胞自噬㊂本文通过检索近年来相关文献,就中医药基于MAPK 通路治疗肝癌的机制进行综述㊂【关键词】 肝癌; 中医药; 丝裂原活化蛋白激酶; 增殖; 凋亡; 侵袭转移; 自噬【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2024.04.036Research progress of liver cancer intervened by TCM based on MAPK signaling pathway ZHANG Gesong ,JIANG ShiqingHenan University of Chinese Medicine ,Zhengzhou 450046,China Corresponding author :JIANG Shiqing ,E⁃mail :Jiangshiqing66@【Abstract 】 Liver tumor is one of the most common malignant tumors worldwide.The mitogen⁃activated protein kinase (MAPK)signaling pathway has various functions such as regulating cell growth,differentiation,and apoptosis,and is closely related to cell activities such as proliferation,apoptosis,invasion and metastasis,and autophagy of hepatoma cells.Traditional Chinese medicine regulates cell cycle protein expression by intervening in downstream proteins of the MAPK pathway,and blocks cells fromentering the S phase through the G1phase,thereby inhibiting proliferation.By up⁃regulating apoptotic protein and down⁃regulating apoptotic protein,the cysteine proteolytic enzyme(Caspase)cascade reaction is activated to promote apoptosis;by downregulating the expression of matrix metalloproteinase (MMP)and vascular endothelial growth factor (VEGF ),epithelial⁃mesenchymal transition (EMT )is inhibited,thereby reducing the invasion and metastasis ability of hepatoma cells;by upregulating the expression of au⁃tophagy⁃related proteins to promote autophagy in hepatoma cells.This paper reviews the mechanism of traditional Chinese medicine in the treatment of liver cancer based on the MAPK pathway by searchingrelevant literature in recent years.㊂环球中医药2024年4月第17卷第4期 Global Traditional Chinese Medicine,April2024,Vol.17,No.4729 【Key words】 liver cancer; traditional Chinese medicine; MAPK; proliferation; apoptosis; invasion and metastasis; autophagy 肝癌是全球常见的恶性肿瘤之一,其分子机制尚未完全明了㊂丝裂原活化蛋白激酶(mitogen⁃activated protein kinase,MAPK)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,在细胞的生长㊁分化㊁凋亡和死亡过程中起着至关重要的作用[1]㊂肝癌的发生㊁发展㊁侵袭和转移都与MAPK信号通路的异常活化密切相关[2]㊂大量临床实践已证实,中医药在预防肝癌发生㊁抑制复发转移㊁减轻疾病痛苦㊁延长寿命等方面有着独特的优势㊂中医药治疗是肝癌综合治疗的一个重要组成部分,应当参与肝癌防治的全过程,也是提高肝癌综合疗效的重要途径之一[3]㊂本文概述中医药通过干预MAPK通路及有关靶蛋白治疗肝癌的机制,以期为中医药干预肝癌临床与科研提供更多思路㊂MAPK是一种广泛存在于真核细胞中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可将细胞外的多种刺激传导至细胞内介导各种细胞反应㊂目前研究发现的MAPK家族信号通路主要有细胞外信号调控激酶1/2(extracellular signal regulated kinase,ERK1/2)㊁p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)㊁c⁃Jun氨基末端激酶(c⁃Jun N⁃terminal kinase,JNK)以及细胞外信号调控激酶5(ERK5)四条途径,尽管每条MAPK通路都具有其独特的特征,但迄今为止所研究的MAPK通路都存在着许多共性,都是通过三级激酶级联反应的方式将细胞外的信号传达至细胞内,从而调节细胞的生长㊁分化㊁凋亡等多种生理和病理过程[4]㊂目前,ERK1/2㊁p38㊁JNK这三条通路研究最广泛,每条通路可以由不同的刺激因素激活,具有相对独立的功能,但这些通路之间也存在着广泛的相关性,具有相互协同或抑制的作用[5]㊂根据肝癌的病因及其临床表现,可以将其归为中医的 肝积” 臌胀” 黄疸” 胁痛”等病范畴㊂肝癌为有形之结块积聚于胁下,由于阴阳失和㊁情志失调㊁饮食劳倦等原因导致脏腑功能失司,气血津液运行失常,产生气滞㊁血瘀㊁痰凝等病理产物,蕴结于脏腑,相互搏结,日久化为癌毒,癌毒渐耗正气,邪毒趁虚而入,凝于肝胆,久而为积,肝癌乃成[6]㊂肝癌初期病机以肝失疏泄,气机郁结为主,本期可无临床症状,难以发现;由于肝病易传于脾,中期多为肝脾同病,木郁土虚,本期常有腹胀㊁纳差㊁腹泻等表现,临床中也发现肝癌患者多以消化道症状为首发表现;晚期癌毒扩散,正虚邪盛,精气血虚极,肝脾肾同病[7]㊂中医药治疗肝癌重视辨证论治,合理配伍用药,攻补兼施,标本兼顾,在减轻病人疾病痛苦㊁抑制肿瘤复发㊁延长寿命等方面具有极大的优势㊂1 中药基于MAPK信号通路诱导肝癌细胞凋亡的机制研究 细胞凋亡对机体的组织分化㊁器官发育和稳态维持有着重要的意义,而肿瘤细胞可使凋亡信号失调,异常激活抗凋亡系统,逃避凋亡或程序性细胞死亡,从而导致恶性肿瘤发生发展㊂目前,研究最广泛的凋亡蛋白有半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族和B细胞淋巴瘤/白血病⁃2基因(B⁃cell lymphoma⁃2,Bcl⁃2)家族㊂MAPK通路可以调节促凋亡蛋白(如Bax㊁Bad等)和抗凋亡蛋白(如Bcl⁃2㊁Bcl⁃xL等)的表达,当促凋亡蛋白表达相对增加时会导致线粒体外膜的通透性增加,从而诱发细胞色素c的释放,进一步激活Caspase级联反应导致细胞凋亡[8]㊂吴茱萸碱是吴茱萸发挥抗肿瘤作用的主要成分,黎彩云[9]通过体内和体外实验发现吴茱萸碱可以抑制肝癌细胞增殖㊁促进肝癌细胞凋亡,并证实其是通过激活ERK㊁p38MAPK信号通路和上调促进凋亡Cleaved parp蛋白下调抑制凋亡Bcl⁃2蛋白表达,来实现抗肝癌作用㊂He J等[10]发现淫羊藿苷可以增加人肝癌HepG2细胞中的Bax/Bcl⁃2比率和激活Caspase⁃3诱导细胞凋亡,并同时上调JNK1的表达,使用JNK通路特异性抑制剂SP600125后淫羊藿苷诱导细胞凋亡的作用被抑制;说明淫羊藿苷通过激活JNK通路来诱导肝癌细胞凋亡㊂Wang WZ 等[11]研究发现经姜黄素处理后的人肝癌Huh7细胞中p38MAPK信号通路迅速激活,同时Huh7细胞中的Fas和其配体FasL快速显着增加并激活Caspase⁃3,当使用p38MAPK通路抑制剂SB203580后肝癌细胞中Fas㊁FasL㊁Caspase⁃3表达显著降低;由此证明姜黄素通过激活p38MAPK信号通路上调Fas㊁FasL㊁Caspase⁃3蛋白的表达从而诱导细胞凋亡㊂Lin W等[12]通过体内外实验发现,大黄素可以上调肝癌细胞中ERK㊁p38的磷酸化并轻度抑制JNK磷酸化,体内实验结果发现大黄素以剂量依赖性方式抑730 环球中医药2024年4月第17卷第4期 Global Traditional Chinese Medicine,April2024,Vol.17,No.4制肿瘤生长并可抑制小鼠的肺转移;研究证明大黄素在体外和体内均可抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与MAPK信号通路转导有关㊂鳖甲煎丸首载于‘金匮要略“,全方攻补兼施㊁气血并调,具有破血消癥㊁益气补血之功㊂常欣峰[13]通过体内和体外实验发现,鳖甲煎丸通过阻滞ERK信号通路,激活JNK信号通路,同时提高促凋亡蛋白Bax的表达和降低抗凋亡蛋白Bcl⁃2的表达,来促进肿瘤细胞凋亡,起到抗肝癌作用㊂沈政洁[14]通过Meta分析发现艾迪注射液可以提高肝癌患者生活质量㊁增强免疫力㊁降低甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)水平㊁延长生存期;设计体外细胞实验证明,艾迪注射液能够通过抑制ERK1/2通路和激活p38MAPK㊁JNK通路来下调凋亡抑制蛋白Bcl⁃2的表达和上调促凋亡蛋白Bak㊁Bid㊁Bax的表达,从而诱导肝癌细胞凋亡㊂2 中药基于MAPK信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制研究 肿瘤发生的关键在于破坏正常的细胞周期,导致细胞发生恶性增殖,丧失分化能力[15]㊂细胞周期受多条信号分子和周期蛋白的调控,而MAPK信号通路可以通过调节周期蛋白D(cyclin D)的表达,从而影响细胞增殖[16]㊂cyclin D是细胞周期蛋白家族的一员,可由促有丝分裂生长因子激活,当细胞生长因子刺激时,通过MAPK通路将增殖信号传递至细胞内部,从而使cyclin D合成的增加,cyclin D与细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin⁃dependent kinases,CDKs)结合形成复合物,使下游的蛋白质Rb磷酸化,从而启动细胞DNA复制,推动细胞周期由G1期进入S期,促进细胞增殖[17]㊂张丰华等[18]研究发现柴胡皂苷D(saikosaponin D,SSD)对SMMC⁃7721肝癌细胞具有明显的增殖抑制作用且抑制率与SSD的浓度呈正相关;采用流式细胞仪分析发现SMMC⁃7721肝癌细胞周期明显阻滞于G0/G1期;其机制可能与上调p38MAPK通路的表达有关,p38MAPK的活化可以抑制cyclin D的表达,阻滞细胞通过G1的检验点进入S期[19],从而使细胞分裂停滞于G0/G1期 抑制细胞增殖,发挥抗癌作用㊂WU WS[20]研究发现柴胡皂苷A (saikosaponin A,SSA)对肝癌细胞的生长也具有抑制作用,这主要是因为SSA可以磷酸化激活ERK,而活化的ERK又可以激活p15(INK4b)和p16 (INK4a)表达,p15和p16通过与cyclin D竞争性结合CDKs导致cyclin D无法发挥其作用[21],从而阻滞细胞由G1期进入S期,抑制肝癌细胞的增殖㊂斑蝥素酸镁是斑蝥体内强效抗肿瘤活性成分,刘云等[22]发现斑蝥素酸镁可以抑制蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase2A,PP2A)活性,而PP2A对MAPK信号通路具有调节作用[23],同时发现经斑蝥素酸镁处理后的肝癌细胞中ERK1/2磷酸化水平显著下调;由此推测斑蝥素酸镁可以通过抑制PP2A 活性来阻滞ERK1/2信号通路传导,进而抑制肝癌细胞增殖㊂大柴胡汤出自‘伤寒杂病论“,具有和解少阳,清泻阳明之功,常用于治疗肝癌㊂乔曦等[24]采用体外细胞培养技术发现,大柴胡汤能够浓度和时间依赖性地抑制肝癌Hepa1⁃6细胞恶性增殖,并可抑制ERK1/2㊁JNK㊁p38MAPK㊁STAT3蛋白的磷酸化表达;又建立肝癌小鼠模型,经大柴胡汤干预后模型小鼠体内肿瘤体积较前缩小,肝癌组织中的p38MAPK㊁STAT3磷酸化表达降低,但ERK1/2㊁JNK 磷酸化无明显改变;通过体内和体外实验证明,大柴胡汤可能通过下调p38MAPK和STAT3通路的表达来抑制肝癌的发生发展㊂3 中药基于MAPK信号通路抑制肝癌细胞侵袭、转移的机制研究 侵袭和转移是恶性肿瘤的特性,也是导致肿瘤治疗失败的主要原因之一㊂恶性肿瘤的侵袭是发生转移的前提,肿瘤的转移过程复杂,主要受细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解㊁血管生成㊁上皮 间质转化(epithelial⁃mesenchymal transition, EMT)等多种因素影响[25]㊂恶性肿瘤发生侵袭和转移首先要突破ECM,而降解ECM需要多种特异性蛋白酶发挥作用,其中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)在此过程中发挥了重要作用[26],而MAPK通路的激活可以促进MMP的表达[27]㊂Chiu YW等[28]发现,经黄芩素处理后的肝癌细胞生长受到抑制㊁细胞的侵袭能力显著下降㊁迁移水平降低;黄芩素还可降低肝癌细胞中MMP⁃2㊁MMP⁃9的活性以及蛋白激酶C (protein kinase C,PKC)和p38蛋白的的磷酸化水平;这表明黄芩素抑制人肝癌细胞增殖㊁侵袭㊁转移的能力与降低p38MAPK通路活性有关㊂路景涛[29]环球中医药2024年4月第17卷第4期 Global Traditional Chinese Medicine,April2024,Vol.17,No.4731研究发现,芍药苷能够抑制肝癌细胞的侵袭㊁转移,其作用机制可能与抑制ERK通路的传导和降低MMP⁃9蛋白的表达有关㊂蟾毒灵是中药蟾酥的提取物,通过体内和体外实验证实蟾毒灵能够通过抑制ERK通路和激活JNK㊁p38通路来上调促凋亡蛋白Bax的表达和抑制MMP⁃2的表达,从而发挥其抑制肝癌细胞增殖㊁侵袭和转移的作用[30]㊂人参皂苷Rh2作为人参总皂苷成分之一,可以抑制肝癌Hep G2细胞的迁移,其作用机制主要是通过MAPK通路抑制AP1转录因子从而降低MMP3的表达来实现的[31]㊂新血管生成为肿瘤的侵袭和转移提供足够的营养保障,在新血管的形成过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发挥重要作用,VEGF尤其受体结合后又可进一步激活ERK1/2通路加速肿瘤发展[32]㊂壁虎粗多肽由壁虎醇提物经盐析㊁透析得到的粗提产品;研究发现,壁虎粗多肽可以通过抑制淋巴管生成来发挥抑制肝癌HepG2细胞的增殖和转移作用,其机制与抑制血管内皮生长因子⁃C(VEGF⁃C)表达和下调p⁃ERK1/2㊁p⁃p38MAPK的表达有关[33]㊂传统中草药南蛇藤具有祛风除湿㊁活血止痛的作用;研究发现南蛇藤提取物可以抑制肝癌淋巴管的生成,具有抗肝癌的作用,其机制可能与抑制ERK1/2及PI3K/ Akt通路的传导和下调VEGF⁃C表达相关[34]㊂EMT是上皮细胞获得间质特征的过程,EMT后细胞的黏附性和极性降低从而导致细胞的侵袭性和迁移性增强,因此抑制细胞EMT对恶性肿瘤的治疗具有重要意义[35]㊂SNAIL1是转录因子的一员,对于诱导和维持EMT至关重要,ERK信号通路的激活可以稳定SNAIL1的表达诱导细胞EMT[36]㊂迷迭香酸为中药石见穿中主要活性成分,具有良好的抗肿瘤效果;研究发现迷迭香酸具有抑制肝癌细胞增殖㊁侵袭和迁移的作用,其作用机制与抑制ERK㊁Akt㊁Smad2/3信号通路的传导和抑制肝癌细胞EMT有关[37]㊂地五养肝胶囊为湖北省中医院研制的院内制剂,由熟地黄㊁五味子㊁茵陈㊁姜黄㊁甘草组成,有补肾养肝㊁活血通络的功效,临床常用于治疗慢性肝炎㊁肝硬化㊁肝癌等㊂研究发现,地五养肝胶囊可以抑制肝细胞EMT而促进间质 上皮转化(epithelial⁃mesenchymal transition,MET),并能通过下调Ras/Raf/Mek/ERK和JAK/STAT信号通路的表达来发挥其抑制肝癌发生发展作用[38]㊂Qu J 等[39]研究发现,姜黄素和重组人腺病毒p53(rAd⁃p53)联合使用可以通过调节肝癌细胞中ERK1/2㊁p38MAPK和JNK信号通路来抑制肝癌细胞EMT,与rAd⁃p53或姜黄素单独治疗相比,二者联合使用增强了抑制EMT作用㊂4摇中药基于MAPK信号通路促进肝癌细胞自噬的机制研究 细胞自噬可以将错误折叠的蛋白质㊁受损或老化的细胞器和突变的蛋白质隔离在称为自噬体的双膜囊泡中,最终融合到溶酶体,导致隔离成分的降解,是维持细胞稳态㊁实现细胞代谢和某些细胞器更新的重要途径[40]㊂当细胞自噬功能抑制或缺陷时,会使自噬介导的细胞垃圾处理失败,导致细胞和组织进行性损伤,从而引发慢性组织损伤和炎症,这与DNA损伤和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的产生密切相关,有助于引发癌症和促进肿瘤进展[41]㊂MAPK信号通路可以影响Bcl⁃2㊁Bcl⁃xL磷酸化,进一步影响自噬蛋白Beclin⁃1从Beclin⁃1⁃Bcl⁃2/Bcl⁃xL复合物中分离,游离的Beclin1可以募集并激活hVps34蛋白并能与之结合复合物,该复合物在促自噬体蛋白结构形成和吞噬泡组装中起着至关重要的作用[42]㊂白花丹醌是从植物药材白花丹中分离提纯所得,具有抗肿瘤㊁抗炎㊁杀菌等作用;研究发现,经白花丹醌处理后的肝癌细胞中自噬相关蛋白LC3⁃Ⅱ㊁Beclin1㊁ATG5㊁ATG7表达增加,并可观察到自噬液泡的形成,从而诱导肝癌细胞凋亡与自噬,其分子机制可能与抑制p38MAPK与PI3K/Akt/mTOR信号通路的相关蛋白磷酸化有关[43]㊂槐耳是一种药用真菌,具有抗癌㊁止血㊁止痢之功;研究发现槐耳可以显著提高肝癌细胞中自噬相关蛋白LC3⁃Ⅱ和Beclin1的表达量,诱导肝癌细胞发生自噬,其作用机制与与抑制p38MAPK信号通路的传导有关[44]㊂Wang N等[45]发现黄连素可以通过激活p38MAPK 和抑制Akt通路传导,从而上调自噬相关蛋白Beclin1的表达来诱导肝癌细胞诱导自噬性死亡㊂疏肝祛瘀解毒方是由广东省名中医林丽珠教授所创的肝癌经验方,由柴胡㊁白芍㊁枳壳㊁桃仁㊁山慈菇等药物组成㊂前期网络药理学研究显示,疏肝祛瘀解毒方可能通过调控Ras/MAPK信号通路来发挥其抗癌作用;后期通过体外细胞实验发现,疏肝祛瘀解毒方含药血清作用于人肝癌HepG2细胞24小732 环球中医药2024年4月第17卷第4期 Global Traditional Chinese Medicine,April2024,Vol.17,No.4时后可以激活Ras/MAPK信号通路和诱导细胞自噬,48小时后可以抑制Ras/MAPK信号通路并能诱导细胞凋亡;以上研究结果表明疏肝祛瘀解毒方可以双向调节Ras/MAPK信号通路,早期激活肝癌细胞自噬,晚期诱导肝癌细胞凋亡[46]㊂5摇小结与展望目前,现代医学对于肝癌的治疗以手术㊁放化疗㊁介入治疗㊁局部消融等综合疗法为主,这些疗法在治疗肝癌的同时也带来了许多毒副反应,轻者降低生活质量,重者放弃治疗㊂随着近年来对肝癌发病机制的研究逐渐深入,已经证实MAPK信号通路在肝癌的发生发展中起到关键性作用,因此通过调节MAPK信号通路的表达可能成为防治肝癌的新方法㊁新思路㊂大量研究已证实,多种中药单体及其活性物质㊁中药复方㊁中成药可通过调节MAPK 信号通路来抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡与自噬,影响肝癌侵袭与转移㊂中医药基于MAPK信号通路治疗肝癌的研究也存在这一些不足:(1)研究主要集中于中药单体及其活性物质,对经典方剂的研究较少㊂(2)在多数研究中,仅是得到抗肝癌作用与通路中关键蛋白的表达水平相关,但进一步的作用机制研究较少㊂(3)在一些研究中发现,中医药可以同时干预两条及以上通路,但研究并未深入探讨通路之间的相互作用㊂(4)中医外治法(如:针灸㊁艾灸㊁穴位敷贴等)对肝癌的治疗也具有良好疗效,但现无关于中医外治法通过MAPK信号通路治疗肝癌的机制研究,有待拓展㊂(5)研究局限于细胞实验和动物实验,缺乏高质量的临床对照试验来验证㊂虽然本类研究存在着许多不足,但随着研究的不断深入,中医药必将为肝癌患者带来更多希望㊂参考文献[1] Cargnello M,Roux P P.Activation and function of the MAPKsand their substrates,the MAPK⁃activated protein kinases[J].Microbiol Mol Biol Rev,2011,75(1):50⁃83.[2] Moon H,Ro S W.MAPK/ERK signaling pathway inhepatocellular carcinoma[J].Cancers(Basel),2021,13(12):3026.[3] 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医学：文献检索的方法、途径和步骤
筛选和评估检索结果
筛选文献
根据研究主题和目的，从检索结果中筛 选出相关度较高、质量较好的文献。
VS
评估文献质量
对筛选出的文献进行质量评估，如通过阅 读文献的摘要、目录和全文来评估其学术 价值和实用性。
获取和整理文献资料
获取全文
根据需要，通过文献传递、购买等方式获取 全文。
整理文献资料
对获取的文献资料进行整理和分类，以便后 续的阅读和使用。
等纸质资源。
图书馆提供安静的阅读环境，方 便用户进行深入阅读和学术研究。
图书馆的馆藏资源通常比较全面， 覆盖各个医学领域，但更新速度
相对较慢。
学术数据库
学术数据库是医学文献检索的重要途径，如 PubMed、Cochrane Library等。
学术数据库收录了大量高质量的医学文献，包括 期刊论文、临床试验、综述等。
序号检索法
总结词
通过文献编号或序号查找相关文献
详细描述
序号检索法是通过输入文献的编号或序号来查找相关文献的方法。这种方法适用于已知 文献编号或序号的情况，能够快速准确地获取特定文献。但需要用户对文献编号或序号
有一定的了解和记忆。
03 文献检索的途径
图书馆馆藏
图书馆是传统的文献检索途径， 拥有丰富的医学书籍、期刊杂志
开放存取资源
01
开放存取资源是指在网络上公开免费获取的学术资源，包括OA 期刊、OA机构仓储等。
02
开放存取资源可以弥补传统学术出版模式的不足，加速学术交
流和知识传播。
开放存取资源的质量和影响力在不断提升，逐渐成为学术研究
03
的重要来源之一。
04 文献检索的步骤
确定研究主题
明确研究目的和范围
生命科学中信号通路的发现与探索常用方法
生命科学中信号通路的发现与探索常用方法
在生命科学中，信号通路的发现与探索常用方法主要有以下几种：
1. 基因表达分析：通过检测特定信号通路相关基因的表达水平，了解这些基因在生物体内的功能和作用。
常用的技术包括基因芯片和RNA测序等。
2. 蛋白质组学分析：利用蛋白质组学技术，研究信号通路中蛋白质的表达、修饰和相互作用，从而揭示信号通路的调控机制。
3. 细胞生物学方法：通过观察细胞在特定信号刺激下的反应，研究信号通路的功能和作用机制。
例如，通过荧光共振能量转移（FRET）技术实时监测
蛋白质之间的相互作用。
4. 遗传学方法：利用基因敲除、基因敲减、基因过表达等手段，研究信号通路中关键基因对生物体表型和生理功能的影响。
5. 生物信息学方法：通过对大规模基因组、转录组和蛋白质组等数据进行整合分析，挖掘与信号通路相关的基因和蛋白质，预测其功能和相互作用关系。
6. 药理学方法：利用药物抑制或激活信号通路中的特定分子，观察生物体反应，从而验证信号通路在生物体内的功能和作用机制。
7. 体内实验方法：将信号通路相关分子导入动物模型中，观察其对动物生理功能的影响，进一步验证信号通路在生物体内的功能和作用。
8. 计算机模拟方法：利用计算机模拟技术，构建信号通路的数学模型，预测信号通路的动态变化和调控机制。
这些方法各有优缺点，可以根据研究的具体需求选择合适的方法。
同时，这些方法也可以相互补充，为信号通路的发现与探索提供更全面、深入的信息。
信号通路的研究方法
信号通路的研究方法信号通路是细胞内外信息传递的重要途径，它参与调控细胞的生理功能和病理过程。
研究信号通路的方法多种多样，本文将介绍几种常用的研究方法。
蛋白质相互作用是研究信号通路的重要手段之一。
蛋白质相互作用可以通过多种实验方法来检测和验证。
例如，酵母双杂交实验可以用来筛选和鉴定蛋白质间的相互作用关系。
此外，共免疫沉淀实验也是常用的方法，它可以通过特异性抗体将目标蛋白质与其相互作用的蛋白质一起沉淀下来，从而验证它们之间的相互作用关系。
细胞信号通路的研究还可以通过基因敲除或过表达的方法来进行。
基因敲除是通过利用CRISPR/Cas9等技术将目标基因进行突变或删除，从而观察信号通路的变化。
而基因过表达则是将目标基因在细胞中过量表达，以研究其对信号通路的影响。
这些方法可以帮助我们深入了解信号通路中各个组分的功能和相互关系。
细胞信号通路的研究还可以通过药物干预的方法来进行。
药物可以选择性地靶向信号通路中的关键分子或靶点，从而干扰信号传递过程。
例如，激酶抑制剂可以抑制信号通路中的激酶活性，从而阻断信号传递。
通过观察药物对信号通路的影响，可以揭示信号通路的调控机制和潜在的治疗靶点。
细胞信号通路的研究还可以利用高通量技术进行。
高通量技术可以同时检测和分析大量的信号通路相关分子或信号分子的变化。
例如，基因芯片技术可以用来检测信号通路中基因的表达水平的变化，蛋白质组学技术可以用来分析信号通路中蛋白质的表达和修饰的变化。
这些技术的应用可以帮助我们全面了解信号通路的变化和调控机制。
信号通路的研究方法多种多样，包括蛋白质相互作用、基因敲除和过表达、药物干预以及高通量技术等。
这些方法的应用可以帮助我们深入了解信号通路的调控机制和功能，为疾病的治疗和药物研发提供理论基础和实验依据。
随着技术的不断发展，相信信号通路的研究将会取得更加深入和全面的进展。
Akt1信号通路在胃癌组织中的表达及意义
Akt1信号通路在胃癌组织中的表达及意义程玉;李春辉;刘海旺;李建玲【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2015(000)004【摘要】目的：探讨Akt1信号通路在胃癌组织中的表达及意义。
方法采用RT－PCR和Western blot技术分别检测60例胃癌组织及25例正常胃组织中Akt1 mRNA及蛋白的表达情况。
结果 Akt1 mRNA和蛋白在胃癌组织中的相对表达量均显著高于正常胃组织（P＜0.01）。
Akt1 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达与患者的性别、年龄无关（P＞0.05），而与胃癌的分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移情况相关（P＜0.05）。
Akt1 mRNA与蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关（r＝0.634，P＝0.000）。
结论 Akt1信号通路参与胃癌的发生、发展、浸润转移，在胃癌的癌变过程中起着重要作用。
【总页数】3页(P560-562)【作者】程玉;李春辉;刘海旺;李建玲【作者单位】承德医学院附属医院病理科河北承德067000;承德医学院附属医院病理科河北承德067000;承德医学院附属医院病理科河北承德067000;承德医学院附属医院麻醉科河北承德067000【正文语种】中文【相关文献】1.P13K/AKT/mTOR信号通路在胃癌组织中的表达及意义 [J], 张刚;郭剑;李杰;郑少鹏;李萍;赵醒;张爱民2.T细胞α型趋化因子/CXC趋化因子受体-3信号通路在胃癌组织中的表达及其意义 [J], 董霞;梁秀云;李大龙;赵琨3.信号通路蛋白 Akt1、ERK1／2与 HIF-1α在肺癌组织中的表达及其临床意义[J], 万军;车云;康宁宁4.Notch信号通路中受体及配体在胃癌组织中的表达及意义 [J], 黄博;金国荣;屈重霄;马海宁;丁彩云5.PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白p-AKT及p-mTOR在胃癌组织中的表达及意义[J], 张刚;郭剑;郝鑫;李萍;李杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
信号通路研究思路
证明一个药物能通过抑制P38表达而发挥保护细胞的作用,需要做的是：要证明你的药物是通过抑制P38表达而发挥保护作用,首先要证明P38表达增加会导致损伤;其次,要证明你的药物存在保护作用;再次,证明你的药物可以抑制P38表达;最后,证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用;首先证明P38表达增加会导致损伤;这里需要建立一个损伤模型;正如你提到的,钙离子导致P38mapk的增高,如果某种损伤可以通过钙离子导致P38mapk的增高,那么你就建立起了一个损伤模型;这时,对P38做个RNA干扰,使其表达下降,再来损伤刺激,如果这时损伤刺激不会导致损伤,那么可以说P38mapk的增高会导致损伤;这里最好不要用P38的抑制剂SB来处理,因为这个抑制剂是针对P38活性的抑制剂,抑制的是P38的磷酸化,而不是表达量;如果说明的问题是p38磷酸化水平增加而导致损伤,那么我建议用抑制剂;这时还可以用Dominant-negative;抑制剂的实验证实该药物不影响P38表达,而影响其活化;应该首先考虑选用抑制剂,因为目前一些药物的作用机制不是抑制靶点的表达,而是抑制靶点的激活;如果在此应用RNAi的话,很可能会漏掉这个机制或增加实验步骤;其次,要证明你的药物存在保护作用;当然就是用你的药物先处理一下,再来损伤刺激,如果这时损伤刺激不会导致损伤,那么可以说你的药物存在保护作用;再次,证明你的药物可以抑制P38表达;用你的药物先处理一下,再来损伤刺激,再检测P38表达,如果用药组相对于没有用药组P38表达下降,那么可以说你的药物可以抑制P38表达;最后,证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用;这一步看似不必要,其实是最重要的步骤,而国内的文章往往忽略了这一关键环节; 这里建议还是用RNA干扰P38表达,再用你的药物处理,再进行损伤刺激,如果用药组与没有用药组的损伤程度一致,那么才可以说你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用;抑制剂也有其局限性,有时是“致命”的,主要原因是抑制剂缺乏特异性;虽然我们在文章里看到用抑制剂的时候都说是什么什么的特异性抑制剂,但真的那么特异吗其实往往是作者为了写文章发文章的需要而夸大了抑制剂的特异性;细胞里无数的信号通路,谁也不能保证抑制剂在作用于靶分子时不会影响其他信号通路;其实无论什么抑制剂,对剂量的要求都相对比较苛刻,为什么就是因为一旦浓度高了,就不知道会干扰到其他哪些信号通路,从而产生很多说不清道不明的现象;PI3K的抑制剂---LY294002和wortmannin,它们都能抑制PI3K和相关的激酶,但LY294002的浓度达到200μM常用来抑制DNA依赖的蛋白激酶DNA-PK；wortmannin 在浓度超过3μM常用来抑制运动失调性毛细血管扩张基因突变ATM以及DNA-PK;相对而言,MEK1/2的抑制剂U0126和PD98059以及P38MAPK的抑制剂SB203580就要好一些;所以研究人员一般应用LY294002时采用20μM,应用wortmannin时采用0.2μM,以此来最小化其他的效应;有些学者们同时应用两种抑制剂进行对比,也许也有顾及于此的原因吧;但是,从严谨的角度讲起特异性的话,RNAi也不能说是绝对特异的,我们只能说它是高特异性,因为RNAi的机制中还有很多没有完全阐明;一些研究者会在RNAi处理后,还要在实验中应用Western来同时检测该蛋白所在家族的其他成员的表达量变化以检测其特异性和选择性,以表严谨;举个例子：比如针对Survivin进行RNAi之后,你最好同时检测XIAP,cIAP1/2等蛋白;当然,如果你所针对基因的siRNA构建已经很成熟,有前人的文章检测特异性做基础,那就另当别论了,所以给科研态度很严谨的lwjssry兄弟提个醒,如果你的siRNA序列尚无很好的文献应用基础,这个问题你也许应该考虑的;临时找到一个描诉相关内容的06年文献,影响因子3分多,截取其中的内容供lwjssry兄参考吧：信号通路有细胞特异性和条件特异性,即同一信号通路在不同的细胞之间或同一细胞在不同的条件下,作用机理可能是不同的;细胞内的信号通路之间存在复杂的相互作用,想证明哪一个分子是另一分子的充要条件真的很难;本人最近研究了一个信号系统的两个信号分子,A和B;A在细胞质,B 在细胞核;以往的研究已经证明A是B的上游信号通路之一;我们的研究是想证明在某种病理过程中A和B作为一个系统发挥作用;我们首先应用能够提升该系统的药物干预,发现A升高的同时B也得到升高,但这也不能说明什么问题;所幸的是A分子目前有特异性的阻断剂,于是我们便对A分子的激活进行阻断,结果发现B分子的激活也收到抑制;由此初步推测A和B可能在某种病理过程中作为一个系统发挥作用;但也只能证明了A是B的必要条件而已;做信号传导的在于你研究一种的机制有什么作用,其机制是否于信号传导有关,有哪些关系,是什么原因导致此信号传导的表达,表达后的下游基因怎么变化这中间最好有基因敲出或者抑制剂和激动剂干预后看看上游下游之间的变化和你预期的结果有没有关系;如果单纯的做信号传导而去做没有什么意义的,就像前面楼上说的一样信号的启动/最终发挥功能“想证明哪一个分子是另一分子的充要条件真的很难”;我最近正在做一个实验,证明A对B的作用;先用外源物处理细胞,跑weternblot,发现A和B都有所增加,B的量增加在A之后;于是用抑制剂抑制A,以及用siRNA使Aknockdown,然后看B的表达量也下来了;但是这也只能证明A和B有关联,无法证明A对B是直接作用还是间接作用;甚至无法说明B的改变是A信号knockdown造成的,还是A信号knockdown 以后,细胞为了弥补该信号的不足,补充促进了C信号,而C信号可以改变B信号;最近在考虑用Co-IP证明A和B有结合作用,也许能证明A和B的直接关系;探讨信号转导中分子间的充要条件,与探讨数学中的充要条件是不一样的,因为细胞中信号转导通路往往存在反馈机制;即使X是上游信号,Y是下游信号,改变Y信号也会通过反馈机制使得X信号发生改变;所以,在考虑生物体内的信号分子间充要条件时会复杂得多,要慎之又慎下结论;信号分子的环路效应普遍存在个人觉得研究A分子与某个信号通路应该更具体得分为两种情况：1,以前还不知道A分子是这个信号通路的成分,这时我们要证明A分子是这个信号通路的成分,这时的研究就是上文谈到的研究内容了;2,A分子是信号通路的成分,这是已知的,现在发现某个现象跟这个通路有关,现在我们要证明A分子是这个信号通路参与这个现象的关键分子,则又是另一种模式;1,“创造信号通路”,别人没有研究过A和B之间的相互作用,而你发现了,并证明了,这就是创造,其实准确点说应该是“发现”,因为信号通路是客观存在的,只不过被找到了而已,不过用“创造”这个词比较形象;这一类的研究是开创性的,比较困难的,研究的时候常常是用免疫共沉淀去把与某个蛋白结合的一堆蛋白都搞出来,再做质谱分析,进行鉴定,再进一步证明两者间的相互作用,这就涉及到充分必要条件的证明;单纯进行这一类的研究缺乏目的性和研究的意义,所以通常还是建立于某种现象基础上的,用自己“创造”的信号通路来解释某种现象,也就是下面说的第二种模式;2,“利用信号通路”,利用别人或自己“创造”的信号通路来解释某个具体的现象,比如,某个药物、某种毒物、某种应激、某种射线、等等,在这些刺激下,具体到某种细胞的某条信号通路发挥调控作用;在第一类中,是用充分必要条件来证实A分子与B分子的作用;在第二类中,是用充分必要条件来证实A现象与B信号通路之间的关系;看文献是最基础的训练,看文献,一是看思路,二是学技术和逻辑思维;思路告诉我们为什么去做,技术和逻辑思维教我们怎么去做;过表达A基因,发现B基因的mRNA水平明显增加,对应的B的蛋白水平也明显增加；干扰A基因表达,发现B基因的mRNA水平明显降低,对应的B的蛋白水平也明显降低;投稿,被拒稿,主要原因是审稿人提出：应该弄清楚A是如何调控B的表达的;请问各位老师,A调控B可能是通过什么途径需要做什么实验A和B都是脂类代谢中的酶基因,它们在胞浆和核内都有表达;回答：1、下一步应该搞清楚B基因mRNA改变的原因是什么,在转录水平还是影响了RNA的稳定性;2、假设A和B是直接关联的假定A影响B的转录,是否一般得做两个实验：Luciferasereporterassay和CHIPassay只做一个CHIP实验行不行其中Luciferasereporterassay是否就是为了检验A蛋白是否能结合到B基因的Promoter区是不是A蛋白必须得是转录因子才有可能结合到B基因的Promoter区另外,怎么知道A蛋白是不是转录因子呢——针对这个问题的回答：不过建议找几篇JBC上的文章看看,JBC上这种调调的文章挺多的,精读3-5篇,把它的outline搞清楚,你就胸有成竹了;——我打开JBC网站一看,呵呵,每期专门有GeneRegulation板块;根据JBC上面的文章,A调控B基因,很多都是通过第三者如转录因子实现的;我再翻出以前自己的Real-timePCR实验结果,发现过表达A基因后,转录因子C的mRNA水平显着增加,而干扰A基因表达,转录因子C的mRNA水平显着降低;目前这个现象还没有文献报道;后期,我准备通过Luciferasereporterassay和CHIPassay来验证转录因子C是否能与B基因作用;我想请教的问题是：A基因调控转录因子C,除了前期的Real-timePCR实验当然再补一个WesternBlot实验,我还需要做其他实验吗会不会审稿人再提出：你需要弄清楚A基因如何调控转录因子C才行;说简单点：A基因通过转录因子C调控基因B,是否要将A影响C,C影响B两步都弄清楚——看你的目标杂志了,如果是JBC这样偏机制的,估计会要你说清楚的3、A可以影响B的mRNA水平,也能影响B的蛋白水平,这样的话,可能是只通过影响B的RNA水平影响B的蛋白表达,也可能同时影响B的RNA水平和B的蛋白稳定性;B 的蛋白稳定性你可以通过加入CHX检测B的半衰期;另外就是你说的Luciferasereporterassay实验;4、A和B的变化总是一致的,应该很有可能是通过转录水平调控的,因为你的mRNA、蛋白都变了;既然是转录水平,那就要找到B的启动子的序列,对应和这个序列结合的蛋白,这个蛋白可能是A也可能是其他的间接的;。
信号通路研究方法
信号通路研究方法信号通路研究方法是生物医学研究中十分重要的一部分，它涉及到细胞内外信号传导的调控机制、相关蛋白的功能及相互作用等方面。
本文将介绍一些常用的信号通路研究方法，希望能对相关领域的研究者有所帮助。
首先，我们要了解信号通路的研究对象。
信号通路是指细胞内外各种信号分子之间相互作用的一系列化学反应链，它可以调控细胞的生长、分化、凋亡等生命活动。
常见的信号通路包括细胞凋亡通路、细胞增殖通路、细胞分化通路等。
在研究信号通路时，常用的方法包括免疫印迹分析、蛋白质相互作用分析、基因敲除和过表达实验、荧光显微镜观察等。
免疫印迹分析是一种检测蛋白质表达水平的方法，通过对细胞或组织进行蛋白质提取，然后利用特异性抗体检测目标蛋白质的表达情况。
蛋白质相互作用分析可以帮助我们了解不同蛋白质之间的相互作用关系，常用的方法包括酵母双杂交、共免疫沉淀等。
基因敲除和过表达实验可以通过基因编辑技术，如CRISPR/Cas9技术，来研究特定基因对信号通路的调控作用。
荧光显微镜观察则可以帮助我们观察信号分子在细胞内的定位和运输情况。
除了上述方法外，近年来，一些新的技术也被应用于信号通路研究中，例如单细胞转录组学、蛋白质组学、代谢组学等。
这些技术的出现，为我们提供了更多的研究手段，帮助我们更全面地了解信号通路的调控机制。
在进行信号通路研究时，我们需要注意一些问题。
首先，实验设计要合理，控制组和实验组要设置得当，以保证实验结果的可靠性。
其次，实验操作要规范，遵循操作规程，确保实验过程的准确性和可重复性。
最后，对实验结果要进行合理的统计分析，以确保结果的科学性和可信度。
总之，信号通路研究方法涉及到多个学科领域的知识，需要综合运用分子生物学、细胞生物学、生物化学等多种技术手段。
通过不断地学习和实践，我们可以更好地掌握信号通路研究的方法，为相关领域的科研工作提供更多的支持和帮助。
希望本文介绍的内容能够对信号通路研究者有所启发和帮助。
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书写 方式 ，有 Ｂ一连 环蛋 白、ｐ一连锁蛋 白和 ｐ一连
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的发 生发展 密 切相 关 ，近 年来 大 量 的抗 癌 治疗 均 以
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（ 辽 宁省 科学 技术 情报 研究 所 沈阳 １ １ ０ １ ８ １ ）
［ 摘要］ 利 用维普 中文科 技期 刊数 据库 、 美国 国立 医学图 书馆 的 Ｐ ｕ ｂ Ｍｅ ｄ系统 ，分 别 对 Ｗｎ ｔ ／ ［ ３ 一ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ和 Ｐ ２ ３ Ｋ ／ Ａ Ｋ ｔ 信 号通路 进行 检 索 ，通过 对不 同检 索式命 中结果 的分析 ， 阐述 医学文献 中信 号 通路 的检 索方ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ 不同检 索词 及
书 写 方 式 的 结 果 比较 （ １ ９ ８ ９— ２ ０ １ ２ ． ９ ）
酶／ 丝 苏 氨 酸 蛋 白激 酶 （ Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／ Ａｋ ｔ ）信 号 通 路 的
检索方法及应 注意的问题 。
２ 维 普 中文 科 技 期 刊 数 据 库
应 注 意 的 问题 。
［ 关键词］ 中外文数据库 ；信号通路 ；检索方法； 查全率；查准率
Ｄｉ ｓ ｃ ｕ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ Ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ Ｐ ａ ｔ ｈ ｗａ ｙ Ｒｅ ｔ ｒ ｉ ｅ ｖ ａ ｌ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｉ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌｉ ｔ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｓ Ｓ Ｕ Ｎ Ｓ ｈ ｕ— ｐ ｉ ｎ ｇ． Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ ｓ ｃ ｅ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ —
一
ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ信 号通 路为 例 ，探 讨几 种 不 同检 索 词 的检
索 方法 ，见 表 ｌ 。
例 ，探 讨 科 技项 目查 新 检 索 工 作 中 Ｗｎ ｔ ／ ［ ３一连 环
蛋白 （ Ｗｎ ｔ ／ ［ ３一ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ ） 和 磷 脂 酰 肌 醇 一３一激
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医学信息学杂志
２ ０ １ ３年第 ３ ４卷第 １ 期
Ｊ ＯＵ Ｒ Ｎ Ａ Ｌ Ｏ Ｆ ＭＥ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｌ Ｉ Ｎ Ｆ Ｏ Ｒ ＭＡ Ｔ Ｉ Ｃ Ｓ ２ ０ １ ３． Ｖ ｏ １ ． ３ ４． Ｎ ｏ ． １
医 学 文 献 中 信 号 通 路 检 索 方 法 探 讨
孙淑 萍
［ Ｋｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ａ ｎ ｄ ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｇ ｎ ｄ ａ ｔ ａ ｂ ａ ｓ ｅ ｓ ；Ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ ｐ ａ ｔ ｈ ｗ ａ ｙ ；Ｒ ｅ ｔ ｒ ｉ ｅ ｖ ａ ｌ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ；Ｒ ｅ ｃ ｌ ａ ｌ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ；Ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ
和 分 化 过 程 中 起 着 重 要 的调 节 作 用 。 分 析 异 常 的 信 号 通 路 将 对 癌 症 的 机 理 研 究 提 供 指 导 作 用 。下 面 以维 普 中 文 科 技 期 刊 数 据 库 、Ｐ ｕ ｂ Ｍｅ ｄ系 统 为
Ｗｎ ｔ ／ ［ ３ 一ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ信 号 通 路 为 靶 点。Ｂ—ｃ ａ ｔ ｅ ｎ ｉ ｎ是